Retrograde Ohrspeicheldrüseninfusion durch Stensen-Kanal in einem nicht-menschlichen Primaten für vektorierte Genabgabe

Dieses Protokoll ist wichtig, weil es das Verfahren der retrograden Speicheldrüseninfusion im Detail demonstriert. Das Verfahren kann aus einer Vielzahl von medizinischen Gründen eingesetzt werden, wie z.B. vektorisierter Immunprophylaxe oder Gentherapie. Diese Technik ist leicht zu erlernen und zu reproduzieren.

Den Autoren ist es gelungen, dieses Verfahren mehrfach erfolgreich durchzuführen, obwohl sie weder Oralchirurgen noch einen solchen Hintergrund haben. Nach der Betäubung verwenden Sie Zahnlupen zur Vergrößerung und identifizieren Sie die Ohrspeicheldrüsenpapille oder die Öffnung des Stenson-Kanals auf der hinteren Wange neben dem oberen zweiten Backenzahn. Erweitern Sie vorsichtig die Ohrspeicheldrüsenpapille, indem Sie die Spitze eines konischen Dilatators in die Mitte oder Öffnung der Papille legen und den Dilatator für etwa 20 bis 30 Sekunden hin und her drehen.

Als nächstes halten Sie mit einer Pinzette das markierte Ende des Polyethylenröhrchens, das an der infusathaltigen Spritze befestigt ist, etwa 0,5 Zentimeter vom distalen Ende entfernt und führen Sie die Spitze des Röhrchens vorsichtig in die erweiterte Papille ein. Bewegen Sie das Rohr vorsichtig durch kleine Drehbewegungen voran, um die Röhren beim Gleiten zu unterstützen, gefolgt von einer Nachjustierung der Pinzette um 0,5 Zentimeter proximal zum vorherigen Griff. Wiederholen Sie diesen Vorgang, bis die Zwei-Zentimeter-Marke die Ohrspille erreicht.

Um die Ohrspeicheldrüsenpapille zu versiegeln und das Verschütten des Infusats in der Mundhöhle zu reduzieren, tragen Sie ein Cyanacrylat auf die Wange um die Papille und auf den eingeführten Schlauch auf. Sobald das Cyanacrylat trocknet, injizieren Sie das Infusat langsam über fünf Minuten mit einer Rate von 100 Mikrolitern pro Minute. Nachdem die Infusion abgeschlossen ist, lassen Sie den Schlauch mindestens fünf Minuten an Ort und Stelle, wodurch der Kanal verschlossen bleibt und das Infusat in der Ohrspeicheldrüse verbleibt.

Zum Schluss das Rohr mit sanfter Traktion entfernen und das Cyanacrylat zieht mit dem Rohr frei. Die Durchleuchtung mit einer Radiokontrastinfusion zeigte eine Verzweigung der Lösung durch den Stenson-Kanal und in die Ohrspeicheldrüse. Immuno, da die chemische Analyse der Ohrspeicheldrüse eine positive Färbung für EGFP sowohl in den duktalen als auch in den acinaren Zellen ergab, was auf eine erfolgreiche Transduktion und Transkription in beiden Zelltypen hinweist.

Die größte Herausforderung bei diesem Verfahren besteht wahrscheinlich darin, das Polyethylenrohr in die Papille einzuführen, was sehr sanft und langsam erfolgen sollte.