Systemische Behandlung von postnatalen, juvenilen und adulten Mäusen durch retrobulbäre Sinus-Injektion

Unsere Forschung umfasst die Entwicklung von Gentherapien für seltene genetische Störungen, insbesondere mit einem Fokus auf eine Gruppe von Stoffwechselstörungen, die als organische Azidämien bekannt sind. Das Ziel unserer Forschung ist es, herauszufinden, welche Ansätze am besten geeignet sind, um zu klinischen Studien am Menschen zu gelangen. Mehrere Gentherapien sind zugelassen, um eine Vielzahl von genetischen Krankheiten zu behandeln, was vor einem Jahrzehnt noch nicht der Fall war.

Tatsächlich sind mehrere klinische Gentherapie-Studien für organische Azidämie abgeschlossen, laufen oder sind geplant. Die systemische Verabreichung an Spiegelmodelle schwerer genetischer Erkrankungen kann eine Herausforderung darstellen, da die Mäuse möglicherweise nicht die Größe eines Erwachsenen erreichen. Dieses retrobulbäre Injektionsprotokoll wird die Erprobung von Gentherapien in Spiegelmodellen mit schweren Phänotypen ermöglichen und hoffentlich die Entwicklung neuer Therapien für Patienten ermöglichen.

Verdünnen Sie zunächst das AAV für jede Injektion auf das gewünschte Injektionsvolumen und die gewünschte Konzentration mit sterilem PBS in einem sterilen 1,5-Milliliter-Mikrozentrifugenröhrchen. Bewegen Sie den Kolben vor dem Befüllen der sterilen Einwegspritze mehrmals auf und ab, um sicherzustellen, dass der Kolben sanft gedrückt werden kann. Füllen Sie dann die Spritze auf das gewünschte Volumen und achten Sie darauf, dass keine Luftblasen entstehen.

Wenn Sie Rechtshänder sind, positionieren Sie die betäubte Maus auf der linken Seite, wobei die Schnauze zur rechten Hand zeigt, um das rechte Auge zu injizieren. Tragen Sie dann ein oder zwei Tropfen Augenanästhetikum auf den Augapfel auf, der injiziert werden soll. Entfernen Sie mit einem sterilen saugfähigen Mullkissen überschüssige ophthalmische Anästhesielösung.

Üben Sie mit den Fingerspitzen sanften Druck auf die Haut, dorsal und ventral auf das Auge aus, um den Augapfel der Maus teilweise aus der Augenhöhle herauszuragen. Führen Sie nun die Nadelabschrägung in einem 30-Grad-Winkel in den medialen Canthus ein. Üben Sie langsam und gleichmäßig Druck auf den Spritzenkolben aus, um das Injektor abzugeben.

Entfernen Sie abschließend die Gesichtsmaske von der Maus, damit sie sich von der Anästhesie erholen kann. Die Expression von Methylmalonyl-Coenzym-CoA-Mutase-RNA wurde in Hepatozyten beobachtet, was auf eine erfolgreiche retrobulbäre Injektion hinweist.