Diese Studie beschreibt eine anpassbare Methode zur Erstellung eines myokardialen Funktionsmodells in Miro durch Präzisionsligation der linken vorderen absteigenden Koronararterie durch Mikromanipulation. Dieses Protokoll verkürzt die Dauer des Eingriffs, gewährleistet eine kontrollierbare Infarktgröße und verbessert das Überleben der Maus. Verwenden Sie während des gesamten chirurgischen Eingriffs ein rechteckiges OP mit einem Heizkissen, das auf 37 Grad Celsius vorgewärmt ist.
Desinfizieren Sie das Board vor dem Eingriff mit ultraviolettem Licht und 70%igem Alkohol. Beginnen Sie, indem Sie die Maus in Rückenlage mit Gaze unter dem Kopf auf den OP legen, um eine Überhitzung der Augen zu vermeiden. Tragen Sie Augensalbe auf die Augen auf, um sie vor dem Austrocknen zu schützen.
Verwenden Sie eine Fellentfernungscreme auf dem Brustkorb und massieren Sie sie eine Minute lang gleichmäßig mit einem sterilen Wattestäbchen ein. Wischen Sie das überschüssige Fell mit Gaze ab. Verwenden Sie Povidon-Jod, gefolgt von 70%igem Alkohol, um den Bereich zu reinigen, und bedecken Sie den Thorax mit Gaze.
Verwenden Sie eine 4-O-Naht unter den oberen Schneidezähnen und befestigen Sie sie am Verankerungspunkt, um den Mund leicht geöffnet zu halten und die Kanülierung zu erleichtern. Ziehe am Schwanz, um den Körper gerade zu halten, und befestige ihn mit Klebeband am OT. Befestigen Sie die vier Gliedmaßen mit Klebeband und ziehen Sie sie an den Verankerungspunkten fest.
Überstrecken Sie die vorderen Gliedmaßen nicht, um eine Beeinträchtigung der Atemwege zu vermeiden. Verwende eine Pinzette, um den Kiefer zu öffnen und die Zunge anzuheben. Verwenden Sie dann einen Illuminator, um den Hals und die Stimmritze zu visualisieren.
Führen Sie vorsichtig eine 22-Gauge-Kanüle mit einem stumpfen Nadelstumpf durch den Mund in die Luftröhre ein, etwa einen Zentimeter den Rachen hinunter. Halten Sie die Zunge mit einer Hand fest und bewegen Sie sie mit einer stumpfen Pinzette leicht nach oben. Verwenden Sie gleichzeitig die andere Hand, um den Schlauch vorsichtig in die Luftröhre einzuführen.
Achten Sie darauf, den Schlauch nicht in die Speiseröhre einzuführen. Entfernen Sie die Nadel vorsichtig. Überprüfen Sie vor dem Anschließen an das Beatmungsgerät die Intubation, indem Sie den Schlauch ins Wasser halten, um die Bildung von Blasen zu überprüfen.
Schließen Sie den Endotrachealtubus an ein Beatmungsgerät an, das auf 120 pro Minute eingestellt ist und das Tidalvolumen auf 250 Mikroliter eingestellt ist. Überprüfen Sie die Intubation, indem Sie die bilaterale symmetrische Thoraxerweiterung überprüfen. Befestigen Sie dann die Verbindung zum OT mit Klebeband, um ein Herunterfallen zu vermeiden.
Platzieren Sie EKG-Elektroden an den Pfoten und schließen Sie sie an den EKG-Rekorder an. Überwachen Sie die Elektrophysiologie des Herzens während des gesamten Eingriffs. Entferne die Gaze am Brustkorb.
Desinfizieren Sie den Einschnittbereich mit drei Peeling-Zyklen mit 70%igem Alkohol. Um die Kontamination des Operationsfeldes zu reduzieren, decken Sie die Maus mit einem sterilen OP-Tuch mit einem Loch über dem Operationsfeld ab. Nachdem Sie einen schrägen Hautschnitt mit einem Skalpell gemacht haben, legen Sie die Rippen frei, indem Sie eine stumpfe Dissektion des Unterhautgewebes durchführen.
Achten Sie darauf, die Gefäße, Rippen und Lungen nicht zu verletzen. Verwenden Sie sterile Baumwollapplikatoren, um die Blutung zu stoppen. Identifizieren Sie den dritten Zwischenrippenraum und machen Sie einen Schnitt von etwa sechs bis acht Millimetern.
Öffnen Sie dann die Brusthöhle, indem Sie eine stumpfe Dissektion des Gewebes im Zwischenrippenraum durchführen. Achten Sie darauf, die Arteria thoracica interna nicht zu verletzen. Spannen Sie den Zwischenrippenraum mit einer Pinzette.
Führen Sie vorsterilisierte, selbstgemachte Retraktoren in den Brustkorb ein und ziehen Sie ihn zurück, um den Schnitt auf eine Breite von etwa sechs Millimetern zu spreizen. Befestigen Sie die Retraktoren mit Gummibändern am OP. Entferne vorsichtig das umliegende Gewebe, um das Herz vollständig freizulegen.
Ziehen Sie den Herzbeutel vorsichtig mit einer gebogenen Pinzette ab, ohne das Herz zu verletzen. Verwenden Sie ein Präpariermikroskop und richten Sie ein fokussiertes und geeignetes Licht für die LAD-Visualisierung. Drücken Sie vorsichtig auf die Stelle unterhalb der gewählten Ligaturposition, um die LAD vorübergehend zu vergrößern, und überprüfen Sie dann die LAD erneut.
Verwenden Sie unter einem Präpariermikroskop eine sich verjüngende Nadel, um eine 8-0 Seidenligatur unter dem LAD. Stellen Sie sicher, dass die Nadel nicht tief genug ist, um in die linke Herzkammer einzudringen, und nicht zu flach, um eine Beschädigung der LAD zu vermeiden. Binde die Ligatur mit einem lockeren Doppelknoten.
Legen Sie einen zwei bis drei Millimeter langen PE-10-Schlauch in eine Schlaufe parallel zur Arterie. Ziehen Sie die Ligaturschlaufe vorsichtig fest, bis sie sich um die Arterie und den Schlauch befindet. Anschließend die Schlaufe mit einem Schlupfknoten fixieren.
Achten Sie darauf, die Herzmuskelwand nicht durch übermäßigen Anzugsdruck zu beschädigen. Eine Blässefärbung in der Vorderwand des linken Ventrikels nach einer Ligatur bestätigt die Einstellung des Blutflusses im LAD. Wenn eine permanente Ligatur erforderlich ist, gehen Sie wie im Textmanuskript beschrieben vor.
Entfernen Sie die Retraktoren aus dem Einschnitt. Anschließend die Wunde provisorisch mit einer Bulldoggenklemme verschließen. Stellen Sie sicher, dass die Maus weiterhin mit dem Beatmungsgerät verbunden ist.
Wenn die Phase der Ischämie endet, entfernen Sie die Bulldoggenklemme und führen Sie die Retraktoren ein, um den Einschnitt zu öffnen und das Herz und die Ligaturstelle freizulegen. Lösen Sie den Schlupfknoten und entfernen Sie den PE-10-Schlauch. Die Veränderung der blassen Färbung zu Rosa-Rot bestätigt die Wiederherstellung der Durchblutung.
Um eine Reperfusion zu erkennen, ist gleichzeitig das EKG auf eine mögliche Auflösung der ST-Hebung zu beobachten. Belassen Sie das 8-0 Ligatur in situ bei anschließender Evans-Blau- und TTC-Färbung. Andernfalls entfernen Sie die Naht in diesem Schritt.
Entfernen Sie die Retraktoren und schließen Sie den Einschnitt, indem Sie die dritte und vierte Rippe mit einer 4-O-Seidennaht vernähen. Achten Sie darauf, die Lunge nicht zu verletzen. Drücken Sie sanft auf die Brust, während Sie die Nahtknoten binden, um die Luft herauszudrücken, die in der Brusthöhle eingeschlossen sein könnte.
Verschließen Sie die Muskelschichten mit durchgehenden 4-O-Seidennähten. Die Standardbilder des experimentellen Prozesses wurden von der endotrachealen Intubation, der Hautinzision, der Thorakotomie, der LAD-Identifizierung und der Ligatur bis hin zur Reperfusion aufgenommen. Die repräsentativen EKG-Bilder bestätigten eine myokardiale Ischämie und Reperfusion mit signifikanter ST-Erhöhung nach Ligatur.
Und Auflösung der ST-Erhöhung, nachdem der Schlupfknoten gelöst wurde. Vor der Thorakotomie ist es sehr wichtig, die Atemwege offen zu halten, und das Wichtigste ist, sicherzustellen, dass die LAD fest ligiert ist und Schäden vermieden werden. Im Anschluss an dieses Verfahren erfolgt eine Echokardiographie zur Beurteilung der Herzfunktion sowie eine TTC zur Beurteilung der Myokardverletzung.
