Cette étude décrit une méthode personnalisable pour créer un modèle de fonction myocardique dans Miro par ligature de précision de l’artère coronaire descendante antérieure gauche par micro-manipulation. Ce protocole réduit la durée de la procédure, garantit une taille d’infarctus contrôlable et améliore la survie des souris. Utilisez un ergothérapeute rectangulaire avec un coussin chauffant préchauffé à 37 degrés Celsius tout au long de l’intervention chirurgicale.
Avant la procédure, désinfectez la planche avec de la lumière ultraviolette et de l’alcool à 70%. Commencez par placer la souris sur l’OT en décubitus dorsal avec de la gaze sous la tête pour éviter de surchauffer les yeux. Appliquez une pommade ophtalmique sur les yeux pour éviter qu’ils ne se dessèchent.
Utilisez une crème démaquillante sur le thorax et massez uniformément avec un coton-tige stérile pendant une minute. Essuyez l’excédent de fourrure avec de la gaze. Utilisez de la povidone iodée suivie d’alcool à 70 % pour nettoyer la zone et couvrez le thorax avec de la gaze.
Utilisez une suture 4-O sous les incisives supérieures et fixez-la au point d’ancrage pour garder la bouche légèrement ouverte et faciliter la canulation. Tirez sur la queue pour garder le corps droit et fixez-le à l’ergothérapeute à l’aide de ruban adhésif. Fixez les quatre membres avec du ruban adhésif et serrez-les sur les points d’ancrage.
Ne pas trop étirer les membres antérieurs pour éviter les troubles respiratoires. Utilisez une pince pour ouvrir la mâchoire et soulever la langue. Utilisez ensuite un illuminateur pour visualiser la gorge et la glotte.
Insérez doucement une canule de calibre 22 avec une aiguille tronquée émoussée à travers la bouche dans la trachée, à environ un centimètre dans la gorge. Utilisez une main pour tenir la langue et déplacez-la légèrement vers le haut avec une pince émoussée. Utilisez simultanément l’autre main pour insérer doucement le tube dans la trachée.
Veillez à ne pas insérer le tube dans l’œsophage. Retirez délicatement l’aiguille. Avant de vous connecter au ventilateur, vérifiez l’intubation en plaçant le tube dans l’eau pour voir si des bulles se forment.
Connectez la sonde endotrachéale à un ventilateur réglé à 120 par minute et au volume courant ajusté à 250 microlitres. Vérifier l’intubation en vérifiant l’expansion thoracique symétrique bilatérale. Fixez ensuite la connexion à l’OT avec du ruban adhésif pour éviter qu’elle ne tombe.
Placez les électrodes ECG sur les pattes et connectez-les à l’enregistreur ECG. Surveillez l’électrophysiologie cardiaque tout au long de l’intervention. Retirez la gaze sur le thorax.
Désinfectez la zone d’incision en utilisant trois cycles de gommage avec de l’alcool à 70%. Pour réduire la contamination du site chirurgical, couvrez la souris d’un champ chirurgical stérile avec un trou sur le champ chirurgical. Après avoir pratiqué une incision cutanée oblique avec un scalpel, exposez les côtes en effectuant une dissection contondante des tissus sous-cutanés.
Veillez à ne pas blesser les vaisseaux, les côtes et les poumons. Utilisez des applicateurs en coton stérile pour arrêter le saignement. Identifiez le troisième espace intercostal et faites une incision d’environ six à huit millimètres.
Ouvrez ensuite la cavité thoracique en effectuant une dissection contondante des tissus dans l’espace intercostal. Veillez à ne pas blesser l’artère thoracique interne. Enjamber l’espace intercostal à l’aide de pinces.
Insérez des écarteurs faits maison pré-stérilisés dans la cage thoracique et tirez vers l’arrière pour écarter l’incision à environ six millimètres de largeur. Fixez les enrouleurs à l’OT avec des élastiques. Retirez soigneusement les tissus environnants pour exposer entièrement le cœur.
Retirez doucement le péricarde avec une pince incurvée sans blesser le cœur. Utilisez un microscope à dissection et dirigez une lumière focalisée et appropriée pour la visualisation LAD. Appuyez doucement sur le site situé sous la position de ligature choisie pour agrandir temporairement le LAD, puis vérifiez à nouveau le LAD.
Sous un microscope à dissection, utilisez une aiguille conique pour passer un 8-0 ligature en soie sous le LAD. Assurez-vous que l’aiguille n’est pas assez profonde pour pénétrer dans le ventricule gauche et qu’elle n’est pas trop peu profonde pour éviter d’endommager le LAD. Attachez la ligature avec un double nœud lâche.
Placez une tubulure PE-10 de deux à trois millimètres dans une boucle parallèle à l’artère. Serrez doucement la boucle de ligature jusqu’à ce qu’elle soit autour de l’artère et de la tubulure. Fixez ensuite la boucle avec un nœud coulant.
Veillez à ne pas endommager la paroi myocardique avec une pression de serrage excessive. Une coloration pâle de la paroi antérieure du ventricule gauche après la ligature confirme l’arrêt du flux sanguin dans le LAD. Si une ligature permanente est nécessaire, procédez comme décrit dans le manuscrit du texte.
Retirez les écarteurs de l’incision. Ensuite, fermez temporairement la plaie avec une pince bouledogue. Assurez-vous que la souris continue d’être connectée au ventilateur.
Lorsque la période d’ischémie se termine, retirez la pince bouledogue et insérez les écarteurs pour ouvrir l’incision et exposer le cœur et le site de ligature. Dénouez le nœud coulant et retirez le tube PE-10. Le changement de la coloration pâle en rose-rouge confirme la restauration du flux sanguin.
Simultanément, pour détecter la reperfusion, observer l’ECG pour une dissolution potentielle de l’élévation ST. Quittez le 8-0 ligature in situ en cas de coloration ultérieure au bleu d’Evans et au TTC. Sinon, retirez la suture à cette étape.
Retirez les écarteurs et fermez l’incision en suturant les troisième et quatrième côtes avec une suture en soie 4-O. Veillez à ne pas blesser le poumon. Appuyez doucement sur la poitrine tout en faisant les nœuds de suture pour expulser l’air qui pourrait être emprisonné dans la cavité thoracique.
Fermez les couches musculaires avec des sutures continues en soie 4-O. Les images standard du processus expérimental ont été acquises à partir de l’intubation endotrachéale, de l’incision cutanée, de la thoracotomie, de l’identification LAD et de la ligature, jusqu’à la reperfusion. Les images ECG représentatives ont confirmé l’ischémie myocardique et la reperfusion avec une élévation significative du ST après la ligature.
Et dissolution de l’élévation ST après que le nœud coulant ait été dénoué. Avant la thoracotomie, il est très important de garder les voies respiratoires ouvertes, et le plus important est de s’assurer que le LAD est fermement ligaturé et d’éviter les dommages. Cette procédure sera suivie d’une échocardiographie pour évaluer la fonction cardiaque ainsi que d’un TTC pour évaluer la lésion myocardique.
