Die Etablierung von Tumoren im hinteren Teil des Auges ist eine Herausforderung. Diese Methode ermöglicht die Induktion von reproduzierbaren Aderhautmelanomtumoren bei Mäusen und die Live-Bildgebung des Tumorwachstums zur Auswertung. Dieses Protokoll nutzt die OCT-Live-Bildgebung, um die Lage der Tumore bereits zum Zeitpunkt der Inokulation der Tumorzellen zu beurteilen und das Tumorwachstum bei lebenden Tieren zu verfolgen.
Das Uvealmelanom ist eine verheerende Erkrankung mit einer Metastasierungsrate von fast 50 %. Die Entwicklung experimenteller Modelle ist der Schlüssel zur Weiterentwicklung der Forschung, die auf neue therapeutische Möglichkeiten abzielt. Ein Vorteil dieser Methode besteht darin, dass die unmittelbare Beurteilung des Injektionserfolgs es ermöglicht, Studiengruppen mit homogenen Tumoren zu erreichen und diese kontinuierlich per Live-Bildgebung zu verfolgen.
Zur Untersuchung der Tumorprogression. Die Injektion in die Augen der kleinen Maus erfordert Übung. Die Möglichkeit, die injizierten Zellen zu visualisieren, ermöglicht es Ihnen, Ihren Erfolg sofort zu beurteilen und bei Bedarf mit weiteren Mäusen zu wiederholen.
Das Verfahren wird von Dr. Dimitri Gaber vom Ophthalmology Research Laboratory des Kaplan Medical Center demonstriert. Tragen Sie zunächst ein 0,4%iges ophthalmologisches Anästhetikum, Oxybuprocain, auf beide Augen der anästhesierten Maus auf. Tragen Sie dann äußerlich 0,5 % Tropicamid auf beide Augen auf, um die Pupillen zu erweitern, gefolgt von 1,4 % Hydroxyethylcellulose als Gleitmittel, um ein Austrocknen der Augen zu vermeiden.
Beobachten Sie ein Auge der Maus unter einem Operationsmikroskop. Halten Sie die Augenlider mit einer sterilen Augenzange offen. Halten Sie dann die obere temporale Limbo-Konjunktiva und ziehen Sie sie in eine infranasale Position.
Sichern Sie diese Position, indem Sie die Schwebebindehaut während des gesamten Eingriffs halten. Führen Sie mit einer 30-Gauge-Nadelspitze eine kleine konjunktivale Peritomie im dorsalen Schläfenbereich etwa ein bis zwei Millimeter hinter dem Limbus durch. Entfernen Sie die überschüssige Sehnenkapsel aus der Öffnung der Peritomie.
Führen Sie die Nadelspitze ein, um in die Sklera einzudringen, und erzeugen Sie eine Spur in den subchoroidalen Raum, bis die braune Farbe der Aderhaut durch die freiliegende weiße Substanz der Sklera erscheint. Laden Sie die Zellen in eine sterile 10-Mikroliter-Glasspritze aus Hamilton, die mit einer stumpfen 32-Gauge-Nadel montiert ist, die in einem Winkel von 45 Grad gedreht ist. Führen Sie die Nadel der geladenen Spritze etwa zwei Millimeter in den erzeugten Trakt ein und injizieren Sie zwei Mikroliter der Zellsuspension.
Halten Sie die Nadel nach der Injektion zwei bis drei Sekunden lang fest, bis die gesamte Flüssigkeit verschwunden ist. Entfernen Sie die Nadel, indem Sie sie vorsichtig herausziehen, um ein Auslaufen aus dem Trakt zu vermeiden. Unmittelbar nach der Inokulation der Melanomzellen wird das injizierte Auge des Tieres mittels OCT-Scans beobachtet.
Klassifizieren Sie auf der Grundlage der Scans die Netzhautablösung oder die RD-Muster in drei Kategorien: lokale RD, Leckage in den Glaskörper oder erweiterte RD. Öffnen Sie eine OCT-Segmentierungsanalysesoftware, um die Tumorgröße basierend auf der RD-Höhe vorherzusagen. Messen Sie die Höhe der lokalen RD in den OCT-Scans und klassifizieren Sie sie in drei Gruppen. In der postoperativen Phase werden 0,3 % Ofloxacin topisch aufgetragen.
Die OCT-basierte Vorhersage des Tumorwachstums nach subchoroidaler Zellinjektion ist in dieser Abbildung dargestellt. Die Mäuse zeigten drei Muster von RD, Focal, Leakage To The Glaskörper und Extended RD. Es bestand ein Zusammenhang zwischen dem Muster der RD unmittelbar nach der Injektion und der Lokalisation der Tumore fünf Tage nach der Injektion. Die fokale RD war mit dem Tumorzellwachstum assoziiert, das auf die Aderhaut beschränkt war.
Die Beobachtung von Zellen im Glaskörper nach der Injektion bei Tieren mit fokaler RD deutete jedoch auf ein Tumorwachstum in der Glaskörperhöhle und der Aderhaut hin. Wenn nach der Injektion eine erweiterte RD beobachtet wurde, waren die Tumore nach fünf Tagen in der Aderhaut und im Glaskörper verteilt. Der Bereich der in diesem Modell induzierten Tumorgrößen kann in klein, mittel und groß unterteilt werden.
Gezeigt werden repräsentative Bilder der OCT-Messung der RD-Höhe nach der Injektion und das entsprechende Fundusbild, ein horizontaler OCT-Scan der Tumorhöhe und -breite am fünften Tag nach der Injektion und das entsprechende Fundusbild sowie der entsprechende H&E-gefärbte Augenschnitt, der vergleichbare Tumormessungen zeigt. Tumorvolumenmessungen von Mäusen, die unmittelbar nach der Zellinjektion eine kleine, mittlere oder große RD aufwiesen, werden hier vorgestellt. Die Anpassung der Injektionskraft kann sich auf die Größe und Lokalisation des Tumors auswirken.
Es ist wichtig, dies zu kalibrieren und das Muster der induzierten Netzhautablösung durch OCT nach der Injektion zu bewerten. Die Live-Bildgebung von Aderhauttumoren ist ein wichtiges experimentelles Werkzeug, das es ermöglicht, die Wirkung verschiedener Faktoren oder potenzieller Therapien auf die Tumorprogression zu untersuchen.
