Viele Details der Typ-1-Diabetes-Wundmodellierung sind fehleranfällig. Für erfahrene Forscher ist das eine schwierige Herausforderung. Daher ist es notwendig, dieses Protokoll zu verwenden.
Auf einfachste Weise kann diese Technik einige Merkmale chronischer diabetischer Wunden effektiv replizieren, wie z. B. keine Wundheilung, verzögerte Reepithelisierung und reduzierte Angiogenese. Die Streptozotocin-Lösung sollte sofort nach der Zubereitung verwendet werden. Achten Sie beim Anlegen der Wunde darauf, dass die Größe und Lage der Wunde reguliert werden muss.
Beginnen Sie damit, das Streptozotocin-Pulver in einer angemessenen Menge von 0,1 Mol pro Liter Natriumcitratpuffer aufzulösen, um eine Konzentration von 1% zu erreichen, und schütteln Sie es 30 Sekunden lang mit einem Medikamentenoszillator, bevor Sie es in eine schöne Schachtel geben. Für die intraperitoneale Injektion von 1%iger Streptozotocin-Lösung fassen Sie die Ratte und legen Sie die Bauchhaut an der Injektionsstelle frei. Desinfizieren Sie die Injektionsstelle zweimal mit einem in 75%igem Alkohol getränkten Wattebausch und legen Sie den Kopf der Ratte unter den Bauch.
Führen Sie die Nadel parallel zur Bauchmittellinie in einem Winkel von 45 Grad ein. Reduzieren Sie dann den Nadelwinkel auf 30 Grad und führen Sie zwei bis drei Millimeter ein. Ziehen Sie vorsichtig am Nadelstopfen, injizieren Sie die Streptozotocin-Lösung und ziehen Sie die Nadel heraus, bevor Sie ein Wattestäbchen anlegen.
Um den ursächlichen Blutzuckerspiegel um 9:00 Uhr an Tag 3 und Tag 7 zu messen, finden Sie die Lage der Schwanzvene. Desinfizieren Sie den Rattenschwanz zweimal mit 75%igem Alkohol, bevor Sie die Schwanzvene punktieren, um Blutungen auszulösen, und messen Sie den Blutzucker mit einem Blutzuckermessgerät. Wenn Sie fertig sind, stoppen Sie die Blutung mit einem Wattestäbchen.
Rasieren Sie den 5 mal 5 Zentimeter großen Bereich auf der Rückenseite der Ratte einen Tag vor der Wundmodellierung mit einem Elektrorasierer. Wischen Sie die rasierte Stelle mit einem warmen, normalen Kochsalz-Wattebausch ab und lassen Sie ihn fünf Minuten lang trocknen, um Enthaarungscreme aufzutragen. Reinigen Sie den Bereich mit Gaze und waschen Sie eventuelle Enthaarungscremereste mit warmer normaler Kochsalzlösung.
Desinfizieren Sie dann die Rückenhaut zweimal mit in Jod getränkten Wattebällchen und in den alternativen Runden mit 75 % Alkohol. Schneiden Sie die Haut nach dem Trocknen mit einer zirkulären Biopsiestanze mit einem Durchmesser von 20 Millimetern auf. Pflegen Sie die Haut mit einer Pinzette und verwenden Sie dann eine chirurgische Schere, um die gesamte Hautdicke entlang der Stanzschnittspuren zu entfernen.
Wenn Sie fertig sind, stoppen Sie die Blutung mit einem normalen Kochsalz-Wattebausch. Bedecken Sie die Wunde mit Vaselinegaze. Diabetes wurde bei allen Ratten nach dreitägiger Streptozotocin-Injektion induziert, wobei der Blutzuckerspiegel über 16,7 Millimol pro Liter lag.
Der Glukosespiegel wurde fünf Wochen nach der Induktion stabilisiert. Das Gewicht der Diabetesgruppe nahm nach der Streptozotocin-Injektion allmählich zu. Das Gewicht nahm in Woche 3 ab und nahm ab Woche 4 langsam wieder zu.
Im Gegensatz dazu nahm das Gewicht der Ratte der Normalgruppe stetig zu. Ihr Durchschnittsgewicht nach den drei Tagen der Diabetes-Induktion war höher als das der Diabetikergruppe. Die makroskopische Analyse, die an den Tagen 7 und 14 nach der Verwundung durchgeführt wurde, ergab, dass die Reepithelialisierung bei Ratten in der Normalgruppe stärker ausgeprägt war als in der Diabetikergruppe.
Die quantitativen Ergebnisse von Tag 7 und Tag 14 zeigten, dass die Wundheilungsrate in der Diabetikergruppe signifikant niedriger war als in der Normalgruppe. Am 14. Tag lag die Wundheilungsrate jedoch bei über 90% in der Diabetikergruppe. Die diabetischen Wunden zeigten einen teilweisen Verlust der Haarfollikel und Talgdrüsen mit weniger sichtbaren Kapillaren.
In der Wundangiogenese, die mittels CD31-Immunfärbung analysiert wurde, zeigte die durchschnittliche optische Dichte der CD31-Expression, dass die Angiogenese an der Wundstelle in der normalen Gruppe signifikant höher war als in der diabetischen Gruppe. Achten Sie bei der Modellierung der Wunde darauf, dass die vordere Haut einschließlich der Epidermis, der Dermis und des Unterhautgewebes entfernt wird.
