Многие детали процесса моделирования ран диабета 1 типа подвержены ошибкам. Это сложная задача для опытных исследователей. В результате необходимо использовать этот протокол.
Простейшим способом этот метод может эффективно воспроизвести некоторые характеристики хронических диабетических ран, такие как отсутствие заживления ран, отсроченная реэпителизация и снижение ангиогенеза. Раствор стрептозотоцина следует использовать сразу после приготовления. При создании раны следите за тем, чтобы размер и расположение раны были регламентированы.
Начните с растворения порошка стрептозотоцина в соответствующем количестве 0,1 моль на литр буфера цитрата натрия для достижения концентрации 1% и встряхните его в течение 30 секунд с помощью осциллятора препарата, прежде чем поместить его в красивую коробку. Для внутрибрюшинной инъекции 1% раствора стрептозотоцина захватите крысу и обнажьте кожу живота в месте инъекции. Дважды продезинфицируйте место инъекции, используя ватный тампон, смоченный в 75% спирте, и поместите голову крысы ниже живота.
Введите иглу параллельно средней линии живота под углом 45 градусов. Затем уменьшите угол иглы до 30 градусов и вставьте два-три миллиметра. Аккуратно вытащите игольчатую пробку, введите раствор стрептозотоцина и вытащите иглу перед нанесением ватного тампона.
Чтобы измерить причинный уровень глюкозы в крови в 9:00 утра на 3-й и 7-й день, найдите местоположение каудальной вены. Дважды продезинфицируйте крысиный хвост с использованием 75% спирта, прежде чем проколоть каудальную вену, чтобы вызвать кровотечение, и измерьте уровень глюкозы в крови с помощью глюкометра. После этого остановите кровотечение ватным тампоном.
Побрейте область размером 5 на 5 сантиметров на спинной стороне крысы электрической бритвой за день до моделирования раны. Протрите выбритый участок теплым ватным тампоном с физиологическим раствором и дайте ему высохнуть для нанесения крема для депиляции в течение пяти минут. Очистите область марлей и смойте остатки крема для депиляции теплым физиологическим раствором.
Затем продезинфицируйте кожу спины два раза, используя ватные тампоны, смоченные в йоде, и 75% спирт в альтернативных раундах. После высыхания срежьте кожу круглым биопсийным пуансоном диаметром 20 миллиметров. Обработайте кожу щипцами, а затем хирургическими ножницами удалите всю толщину кожи вдоль следов порезов.
После этого остановите кровотечение с помощью обычного солевого ватного тампона. Закройте рану вазелиновой марлей. Диабет был индуцирован у всех крыс после трех дней инъекции стрептозотоцина, при этом уровень глюкозы в крови превышал 16,7 миллимолей на литр.
Уровень глюкозы стабилизировался через пять недель после индукции. Вес диабетической группы увеличивался постепенно после инъекции стрептозотоцина. Вес снизился на 3-й неделе и медленно снова увеличился с 4-й недели.
Напротив, вес крысы нормальной группы неуклонно увеличивался. Их средний вес после трех дней индукции диабета был выше, чем в группе диабетиков. Макроскопический анализ, проведенный на 7-й и 14-й день после ранения, показал, что реэпителизация была более выражена у крыс в нормальной группе, чем в группе диабетиков.
Количественные результаты 7-го и 14-го дней показали, что скорость заживления ран была значительно ниже в группе диабетиков, чем в группе с нормальным возрастом. Однако на 14-й день скорость заживления ран была выше 90% в группе диабетиков. Диабетические раны показали частичную потерю волосяных фолликулов и сальных желез с меньшим количеством видимых капилляров.
При раневом ангиогенезе, проанализированном с помощью иммуноокрашивания CD31, средняя оптическая плотность экспрессии CD31 показала, что ангиогенез в месте раны был значительно выше в норме, чем в группе диабетиков. При моделировании раны убедитесь, что кожа передней толщины удалена, включая эпидермис, дерму и подкожную клетчатку.
