Muitos detalhes do processo de modelagem da ferida do diabetes tipo 1 são propensos a erros. É um desafio difícil para pesquisadores experientes. Como resultado, faz-se necessária a utilização deste protocolo.
Da maneira mais simples possível, essa técnica pode efetivamente replicar algumas características das feridas diabéticas crônicas, como ausência de cicatrização, retardo na reepitelização e redução da angiogênese. A solução de estreptozotocina deve ser utilizada imediatamente após a preparação. Ao criar a ferida, procure que o tamanho e a localização da ferida devem ser regulados.
Comece dissolvendo o pó de estreptozotocina em uma quantidade apropriada de 0,1 moles por litro de tampão citrato de sódio para atingir uma concentração de 1% e agite-o por 30 segundos usando um oscilador de drogas antes de colocá-lo em uma caixa agradável. Para injeção intraperitoneal de solução de estreptozotocina a 1%, segure o rato e exponha a pele abdominal no local da injeção. Desinfete o local da injeção duas vezes usando uma bola de algodão embebida em álcool a 75% e coloque a cabeça do rato abaixo do abdômen.
Insira a agulha paralela à linha média abdominal a 45 graus. Em seguida, reduza o ângulo da agulha para 30 graus e insira de dois a três milímetros. Puxe suavemente o tampão da agulha, injete a solução de estreptozotocina e puxe a agulha antes de aplicar um cotonete.
Para medir os níveis causais de glicose no sangue às 9:00 da manhã do dia 3 e do dia 7, encontre a localização da veia caudal. Desinfetar a cauda do rato duas vezes usando álcool a 75% antes de puncionar a veia caudal para induzir sangramento e medir a glicemia usando um glicosímetro. Uma vez feito, pare o sangramento com um cotonete.
Faça a barba da área de 5 por 5 centímetros no dorso do rato com uma navalha elétrica um dia antes da modelagem da ferida. Limpe a área raspada com uma bola de algodão salina normal morna e deixe secar para aplicar creme depilatório por cinco minutos. Limpe a área com gaze e lave qualquer creme depilatório residual com soro fisiológico normal morno.
Em seguida, desinfetar a pele dorsal duas vezes usando bolas de algodão embebidas em iodo e álcool 75% nas rodadas alternativas. Após a secagem, corte a pele com um punch de biópsia circular de 20 milímetros de diâmetro. Cuide da pele com pinças e, em seguida, use tesouras cirúrgicas para remover toda a espessura da pele ao longo das marcas de corte de perfuração.
Uma vez feito, pare o sangramento com uma bola de algodão salina normal. Cubra a ferida com gaze de vaselina. O diabetes foi induzido em todos os ratos após três dias da injeção de estreptozotocina, com glicemia superior a 16,7 milimoles por litro.
O nível glicêmico foi estabilizado cinco semanas após a indução. O peso do grupo diabético aumentou gradualmente após a injeção de estreptozotocina. O peso diminuiu na semana 3 e aumentou lentamente novamente a partir da semana 4.
Em contraste, o peso do rato do grupo normal aumentou de forma constante. A média de peso após os três dias de indução do diabetes foi maior do que a do grupo diabético. A análise macroscópica realizada nos dias 7 e 14 após o ferimento revelou que a reepitelização foi mais pronunciada nos ratos do grupo normal do que no grupo diabético.
Os resultados quantitativos do dia 7 e do dia 14 revelaram que a taxa de cicatrização de feridas foi significativamente menor no grupo diabético do que no grupo normal. No entanto, no 14º dia, a taxa de cicatrização de feridas estava acima de 90% no grupo diabético. As feridas diabéticas apresentaram perda parcial dos folículos pilosos e glândulas sebáceas com menor número de capilares visíveis.
Na angiogênese da ferida analisada pela imunomarcação para CD31, a densidade óptica média da expressão de CD31 mostrou que a angiogênese no local da ferida foi significativamente maior no grupo normal do que no grupo diabético. Ao modelar a ferida, certifique-se de que a pele da espessura anterior seja removida, incluindo a epiderme, derme e tecido subcutâneo.
