Das Tumorrezidiv ist eine der Hauptursachen für das Versagen des Regimes bei der chirurgischen Resektion des GBM. Unser Protokoll bietet ein einzigartiges GBM-Rezidivmodell für effektive lokale Behandlungsstudien von Rückfällen nach der Forschung. Diese Technik bietet eine bequeme und praktikable Methode zur Konstruktion des GBM-Rezidiv-Post-Resektionsmodells und kann in verschiedenen Studien zum GBM-Rezidiv verwendet werden.
Beginnen Sie mit der Vorbereitung des Tieres. Schneiden Sie die Kopfhaut der Maus mit einer Augenschere etwa einen Zentimeter entlang der Mittellinie auf der rechten Stirn ab. Stellen Sie den stereotaktischen Apparat so ein, dass sich die Fischgrätnaht und die vordere Fontanelle-Spitze auf gleicher Höhe befinden.
Markieren Sie mit einem Wattestäbchen, das in Genianviolett getaucht ist, einen Punkt einen Millimeter nach vorne, 1,8 Millimeter nach rechts und drei Millimeter nach unten von der vorderen Fontanelle. Bohren Sie die Spitze mit einem Mini-Schädelbohrer mit einem Durchmesser von einem Millimeter. Erstellen Sie eine Pore von etwa einem Millimeter Durchmesser und einem Millimeter Tiefe.
Entfernen Sie die ausgeschiedene Gehirn-Rückenmarks-Flüssigkeit mit einem sterilen Wattestäbchen. Anschließend werden fünf Mikroliter Tumorzellsuspension mit einer Mikrospritze abgesaugt. Richten Sie die Nadelspitze der Mikrospritze senkrecht zum Schädelbohrloch aus und führen Sie sie ein, bis die Nadelspitze drei Millimeter in die Schädelebene eindringt.
Ziehen Sie dann die Nadel um 0,5 Millimeter zurück. Öffnen Sie die Mikrospritze und injizieren Sie die Lösung mit einer Geschwindigkeit von einem Mikroliter pro Minute. Bewahren Sie die Nadel nach der Injektion 10 Minuten lang auf.
Ziehen Sie dann die Mikrospritze langsam zurück und drücken Sie mit einem sterilen, trockenen Wattebausch auf die Injektionsstelle. Vernähen Sie die Kopfhaut mit einer nicht resorbierbaren chirurgischen 10-0-Naht und desinfizieren Sie den Einschnitt. Überwachen Sie die Gesundheit des Tieres und halten Sie es unter warmen Bedingungen.
Nachdem die Maus aufgewacht ist, bewegen Sie sie zurück in den Gehäusekäfig. 10 Tage nach der Tumortragung den transplantierten Tumor nachweisen. Dazu wird der Maus intraperitoneal Kaliumfluorescein injiziert und 11 Sekunden später die Maus mit einem biolumineszierenden In-vivo-Bildgebungssystem abgebildet.
Trennen Sie das Kopfhautgewebe und den Schädel und überprüfen Sie das Bohrloch, das zur Erstellung des orthotopen intrakraniellen GBM-Modells verwendet wurde. Wenn das Loch verheilt ist, identifizieren Sie das Loch mit einem stereotaktischen Gerät und bohren Sie das Loch wie zuvor gezeigt. Erweitern Sie den gesamten Durchmesser mit einem Schädelbohrer auf fünf Millimeter und entfernen Sie die ausgeschiedene Hirn-Rückenmarks-Flüssigkeit mit einem sterilen Wattestäbchen.
Fokussieren Sie das Mikroskop auf den Kopf der Maus und passen Sie die Einstellungen so an, dass sich das Bohrloch in der Mitte des Sichtfeldes befindet. Schneiden Sie die Hirnhäute mit einer Mikroschere ab. Anschließend wird ein Teil des Tumorgewebes mit einer Mikrokürette und einem Mikroskalpell unter dem Mikroskop entfernt.
Stoppen Sie die Blutung mit steriler Gaze und waschen Sie die Injektion mit steriler physiologischer Kochsalzlösung. Injizieren Sie mit einer Ein-Milliliter-Spritze 10 Mikroliter des handelsüblichen Hydrogels in den Resektionshohlraum. Mit diesem Protokoll wurden die GBM-Zellen in das Gehirn der Mäuse implantiert und das Tumorwachstum wurde an Tag 10 durch in vivo Biolumineszenz-Bildgebung getestet.
Die Resektion und die Hydrogel-Injektion wurden am 11. Tag durchgeführt. Die Größe der Tumoren im GBM-Rezidiv-Post-Resektions-Modell war signifikant kleiner als im orthotopen intrakraniellen GBM-Modell. Die Überwachung des Resttumorwachstums an Tag 25 zeigte das Wiederauftreten von Tumoren.
Die H&E-Färbung bestätigte, dass das GBM-Rezidivmodell nach der Resektion erfolgreich konstruiert wurde und dass Resttumoren nach der Resektion signifikant rezidivierten. Das Wichtigste, was bei diesem Verfahren zu beachten ist, ist, die Hirnhäute zu durchtrennen und einen Teil des Tumorgewebes unter dem Mikroskop zu entfernen.
