Dieses Protokoll wird die Zugänglichkeit der Forschung über das uterosakrale Band und Beckenbodenerkrankungen, wie z. B. den Beckenorganprolaps oder POP, erweitern und die Dissektion von spiegelndem Beckenbodengewebe erleichtern. Diese Technik ermöglicht es, beide uterosakralen Bänder von einer Maus zu isolieren, während die anatomischen Befestigungen erhalten bleiben und die umgebenden Beckenbodenorgane entnommen werden. Unsere Methode etabliert ein präklinisches Modell, das es ermöglicht, zu untersuchen, wie Schwangerschaft oder Krankheit das mechanische Verhalten des Gewebes beeinflussen.
Diese Methode etabliert ein neues Instrument für die gesundheitsbezogene Forschung von Frauen. Die Hauptherausforderung besteht darin, das uterosakrale Band zu identifizieren und zu handhaben. Mein Rat ist, sich ausreichend Zeit und Sorgfalt zu nehmen, da diese Gewebe klein und zerbrechlich sind.
Beginnen Sie damit, eine eingeschläferte Maus auf ein Pad zu legen und die vier Gliedmaßen festzunageln. Machen Sie mit einer Schere einen ein bis 1,5 Zentimeter langen Schnitt am Bauch. Trennen Sie die Haut vorsichtig an der kranialen, kaudalen und lateralen Seite des Schnitts.
Drehen Sie die Maus mit der Rückenseite nach oben und ziehen Sie die Haut vorsichtig in Richtung der Hinterbeine ab. Stecken Sie die Gliedmaßen fest und machen Sie einen einen Zentimeter langen Schnitt in den Bauch vom Brustkorb bis zum Becken. Schieben Sie die Organe sanft in Richtung Brustkorb, um eine klare Sicht zu erhalten.
Nach der Spülung mit PBS mit einer Pinzette ziehen und reinigen Sie das Beckenfettgewebe. Identifiziere die Gebärmutterhörner und schneide sie dann aus den Eierstöcken ab. Ziehen Sie sie nun aus dem Sichtfeld und durchtrennen Sie die zervikale Verbindung.
Durchtrennen Sie die Harnleiter von der Blasenverbindung. Schneiden Sie den Dickdarm so nah wie möglich am Gebärmutterhals ab. Legen Sie die Maus mit dem Pad unter ein Präparierfernrohr, um die uterosakralen Bänder zu visualisieren.
Verwenden Sie eine Pinzette, um das umgebende Fett vorsichtig von den uterosakralen Bändern zu entfernen. Binden Sie eine 5-0-Naht um das zervikale Ende beider Bänder. Schneiden Sie das zervikale Ende des uterosakralen Bandes ab und lassen Sie ein Stück des Gebärmutterhalses hängen.
Schneiden Sie nun ein Stück Muskel von der Unterseite des Bandes ab. Legen Sie das präparierte Gewebe in ein Bad, das PBS enthält, um die Hydratation des Gewebes aufrechtzuerhalten. Schneiden Sie das zervikale Ende des restlichen Gewebes ab und lassen Sie ein Stück Gebärmutterhals für mechanische Tests und Bildgebung haften.
Sobald das Fett entfernt ist, halten Sie die Blase mit einer Pinzette fest und heben Sie sie vorsichtig in einem Winkel von etwa 40 Grad an. Schneiden Sie die Blase mit einer Schere an der distalen Seite direkt über dem Gebärmutterhals auf. Legen Sie die Blase in ein Bad mit PBS, um die Flüssigkeitszufuhr aufrechtzuerhalten.
Heben Sie nun mit der Pinzette den Gebärmutterhals in einem ungefähren Winkel von 40 Grad an. Identifiziere die rektovaginale Faszie, die das Rektum und den Gebärmutterhals verbindet, und durchschneide die Verbindung mit dem Skalpell. Verwenden Sie eine Schere, um das Schambein an der Schambeinsynthese zu durchtrennen.
Erweitern Sie den Beckenboden sanft, um die Sichtbarkeit der Gewebeansätze zu erhöhen. Halten Sie den Gebärmutterhals mit einer Pinzette fest und schneiden Sie ihn so nah wie möglich an der Vulva ab. Legen Sie das Gewebe in PBS, um die Hydratation aufrechtzuerhalten.
Verwenden Sie die Pinzette, um das Rektum sanft in Richtung Brustkorb zu ziehen. Identifiziere das Rektum und schneide es am Anus durch. Legen Sie das Rektum in PBS, um die Hydratation aufrechtzuerhalten.
Sobald alle interessierenden Gewebe entnommen sind, werden die Oberschenkelknochen aus dem Becken ausgerenkt. Schneiden Sie den Beckenknochen an den distalen und proximalen Enden ab. Legen Sie das präparierte Gewebe in PBS.
Die Enzymbehandlung schien den durchschnittlichen axialen Peak zu reduzieren und Stressoren zu reduzieren, die das uterosakrale Ligament bei vorgeschriebenen globalen Verschiebungen erfährt, was darauf hindeutet, dass Kollagen und Glykosaminoglykane zur axialen Steifigkeit der Bänder beitragen. Die durchschnittlichen axialen Dehnungen für jede mechanisch getestete Probe deuten darauf hin, dass die globale axiale Dehnung in den mit Enzymen behandelten Proben ähnlich oder größer als in der kontrollierten Probe war, was darauf hindeutet, dass die Verringerung der makroskopischen Belastung eher auf die Enzymbehandlung als auf kleinere Stämme zurückzuführen ist. Die Raman-Spektroskopie des intermediären Bandes des uterosakralen Bandes deutet darauf hin, dass Enzymbehandlungen die biochemische Zusammensetzung der uterosakralen Bänder der Maus verändert haben.
Die mit Kollagenase behandelten uterosakralen Bänder wiesen einen verringerten Kollagengehalt sowie eine Abnahme von Wasser und Hyaluronsäure auf. Mit Chondroitinase behandelte uterosakrale Bänder wiesen weniger Hyaluronsäure sowie einen geringeren Wasser- und Kollagengehalt auf. Die Liebe zum Detail ist sehr wichtig, insbesondere wenn es darum geht, die Tatsache zu beseitigen, dass hier Ablagerungen um die USL und die Beckenorgane herum erforderlich sind, um eine Schädigung der USL und des umgebenden Gewebes zu vermeiden.
Weitere Untersuchungen können an der USL und anderen Beckenbodengeweben mit Mäusen durchgeführt werden, die genetische Variationen aufweisen, von denen angenommen wird, dass sie POP beeinflussen. Unser Protokoll ermöglicht bereits eine Reihe neuer Studien, einschließlich der Untersuchung, wie das mechanische Verhalten von USLs eine Funktion der Schwangerschaft verändert, die ein wichtiger Risikofaktor für POP ist.
