Isolierung und Kultivierung von primären Synovialmakrophagen und Fibroblasten aus murinem Arthritisgewebe

Zellbasierte Assays sind erforderlich, um molekulare Funktionen aufzuklären. In Arthritisstudien ist die Methode zur Isolierung von Primärzellen in synovialen Fibroblasten gut etabliert, jedoch nicht in synovialen Makrophagen. Daher haben wir ein Protokoll entwickelt, um sowohl Synovialmakrophagen als auch Synovialfibroblasten aus Arthritismodellen zu isolieren und zu expandieren.

Primäre synoviale Fibroblasten aus murinem Arthritisgewebe haben zur Aufklärung molekularer Mechanismen in der Arthritis-Pathogenese beigetragen. Auf der anderen Seite wurden Makrophagen aus dem Knochenmark, aus Blutmonozyten gewonnene Makrophagen und Makrophagenzelllinien häufig als Makrophagenressourcen für Arthritisstudien verwendet. Da Makrophagen Funktionen erwerben können, die mit ihrer Mikroumgebung verbunden sind, fehlen den allgemeinen Quellen von Makrophagen möglicherweise die spezifischen Reaktionen auf Arthritisgewebe.

Darüber hinaus ist es schwierig, durch Sortierung genügend Synovialzellen zu erhalten, da die murine Synovialflüssigkeit selbst in Arthritismodellen ein sehr kleines Gewebe ist. Bei der bisherigen Methode zur Isolierung synovialer Fibroblasten wurden Synovialmakrophagen verworfen. Darüber hinaus wurde über eine Methode zur Isolierung und Expansion residenter Makrophagen aus einigen Organen berichtet.

Daher wurden bestehende Protokolle in Kombination modifiziert, um sowohl Synovialmakrophagen als auch Synovialfibroblasten aus murinem Arthritisgewebe zu isolieren und zu expandieren. Diese Methode kann sowohl Makrophagen als auch Fibroblasten mit hoher Reinheit aus entzündlichen Synovialen isolieren, und sie ist einfach und reproduzierbar. Diese Methode ermöglicht die Expansion von Synovialmakrophagen unter Co-Kultur mit synovialen Fibroblasten.

Außerdem bietet die Methode den Vorteil, dass synoviale Fibroblasten mit weniger Durchgängen verwendet werden können. Das etablierte Protokoll wäre ein Vorteil für die Aufklärung pathologischer Mechanismen bei rheumatoider Arthritis.