Diese Arbeit wurde vom Jilin Provincial Department of Science and Technology (YDZJ202201ZYTS181) unterstützt.

Das Tierverfahren wurde von der Ethikkommission der Changchun University of Chinese Medicine genehmigt (Aktenzeichen: 2021214). Spezifische pathogenfreie C57BL/6J-Mäuse (8-10 Wochen, Gewicht 18-22 g), männlich und weiblich, wurden in unabhängig belüfteten Käfigen bei 22 °C und 65% relativer Luftfeuchtigkeit untergebracht. Die Mäuse begannen das Experiment nach 7 Tagen adaptiver Fütterung, während der sie freien Zugang zu Wasser und Nahrung hatten.
1. Arzneimittelvorbereitung
<ol><li>Vorbereitung von LJZD HINWEIS: Das verwendete chinesische Arzneimittel wurde vom angeschlossenen Krankenhaus der Changchun University of Chinese Medicine gekauft und als echte chinesische Medizin identifiziert (siehe Tabelle 1).<ol><li>Dangshen (12 g), Baizhu (12 g), Gancao (6 g), Chenpi (12 g), Jiangbanxia (9 g) in einen speziellen Keramiktopf geben (siehe Materialtabelle). 1000 ml destilliertes Wasser hinzufügen und 1 h bei Raumtemperatur einweichen (siehe Abbildung 1A).</li>
		<li>Pulver 12 g Mit einem Mahlwerk zu feinem Pulver verarbeiten und in 300 ml destilliertem Wasser in einem anderen Behälter 1 h bei Raumtemperatur einweichen.</li>
		<li>Mischen Sie die oben genannte chinesische Medizin in dem speziellen Keramiktopf. Kochen Sie die Mischung und halten Sie sie dann auf mittlerer Flamme, bis nur noch 300 ml Abkochung übrig sind. Verwenden Sie medizinische Gaze zum Filtern und bewahren Sie das Filtrat bei Raumtemperatur auf.</li>
		<li>Fügen Sie 1000 ml destilliertes Wasser hinzu und wiederholen Sie den obigen Abkochvorgang noch einmal. Filtern Sie erneut mit medizinischer Gaze. Kombinieren Sie das Filtrat und kochen Sie es, bis nur noch 150 ml übrig sind.</li>
		<li>Die konzentrierte Flüssigkeit wird 5 Minuten lang bei 10.000 x g zentrifugiert und der erhaltene Überstand bei mittlerer Hitze auf 30 ml weiter konzentriert. Das endgültige Konzentrat in eine Schüssel geben und mit einem elektrischen Trockenofen trocknen, bis nur noch der gelöste Stoff als Pulver übrig bleibt.</li>
		<li>Wiegen Sie den obigen Feststoff und lösen Sie ihn in sterilem destilliertem Wasser auf, um eine Lösung zu erhalten, die 22,85 mg Arzneimittel pro 0,2 ml (114,16 mg/ml) enthält, was der Tagesdosis von Mäusen entspricht.</li>
	</ol></li>
	<li>Herstellung von 5-Amino-Salicylsäure HINWEIS: 5-Amino-Salicylsäure (5-ASA; siehe Materialtabelle) hat eine gute vorbeugende Wirkung auf UC-CRC und wurde in dieser Studie als positives Medikament verwendet23.<ol><li>64 mg 5-ASA-Pulver in 200 ml sterilem destilliertem Wasser auflösen, um 1,82 mg/ml 5-ASA-Lösung zu erhalten. Die Tagesdosis für eine einzelne Maus betrug 0,2 ml.</li>
	</ol></li>
	<li>Herstellung der AOM-Injektionslösung<ol><li>2,5 ml steriles destilliertes Wasser in 25 mg AOM-Pulver geben (siehe Materialtabelle) und mit einem Vortex-Mischer (siehe Materialtabelle) mischen, um 10 mg/ml AOM-Stammlösung herzustellen, bis zur Verwendung bei -20 °C lagern.</li>
		<li>Bereiten Sie die AOM-Injektionslösung vor, indem Sie die AOM-Stammlösung mit sterilem destilliertem Wasser bei 10:1 (1 mg/ml) verdünnen.</li>
	</ol></li>
</ol>2. Etablierung des UC-CRC-Modells
HINWEIS: Das Experiment wurde in 4 Gruppen unterteilt: Kontroll-, Modell-, LJZD- und 5-ASA-Gruppe, 10 Mäuse in jeder Gruppe. Mit Ausnahme der Kontrollgruppe wurden die anderen Gruppen mit AOM und DSS behandelt.
<ol><li>Intraperitoneale Injektion von AOM-Injektionslösung HINWEIS: Nach adaptiver Fütterung für 7 Tage erhielten die Mäuse AOM-Injektionslösung (1 mg/ml) durch intraperitoneale Injektion (siehe Abbildung 1B).<ol><li>Halten Sie die Maus mit dem Bauch nach oben und dem Kopf leicht nach unten. Fassen Sie die Rückenhaut an, um die Bauchhaut zu straffen, und stechen Sie die Haut etwa 1 cm rechts vom Schnittpunkt der Wurzellinie beider Oberschenkel auf der Mittelbauchlinie mit einer 1-ml-Spritze ein (siehe Materialtabelle).</li>
		<li>Drücken Sie die 1-ml-Spritzennadel in einem Abstand von 3-5 mm unter die Haut, halten Sie sie parallel zur Bauchmittellinie und führen Sie die Nadel 0,3-0,5 mm in einem Winkel von 45° in die Bauchhöhle ein.</li>
		<li>Nachdem die Spitze den Bauchmuskel passiert hat, spürt der Bediener einen plötzlichen Widerstandsverlust. Ziehen Sie anschließend die Spritze nach außen und hinten, um zu beobachten, ob Flüssigkeit austritt. Wenn nicht, drücken Sie die AOM-Injektionslösung langsam mit 0,1 ml/10 g in die Mäuse.</li>
	</ol></li>
	<li>Zyklische Stimulation von 2% DSS-Lösung HINWEIS: Jede AOM-induzierte Maus erhielt in den Wochen 3, 6 und 9 500 ml DSS-Lösung, und die Mäuse tranken während dieses Zeitraums frei.<ol><li>Bereiten Sie eine 2%ige DSS-Lösung vor, indem Sie 500 ml steriles destilliertes Wasser zu 10 g DSS hinzufügen (siehe Materialtabelle). Mit einem Vortex-Mixer mischen und bis zur Verwendung bei 4 °C lagern.</li>
		<li>Jede AOM-induzierte Maus trinkt 500 ml 2%ige DSS-Lösung für 7 Tage in den Wochen 3, 6 und 9 nach der AOM-Induktion.</li>
	</ol></li>
</ol>3. Medikamentöse Behandlung
HINWEIS: Erwachsene Menschen benötigen 63 g LJZD pro Tag. Nach der Umrechnungsformel der experimentellen Arzneimitteldosis für Mäuse und Menschen, äquivalente experimentelle Dosis für Mäuse (mg/kg) = menschliche Dosis (mg/kg)/Körpergewicht (60 kg) x 9,1, betrug die Tagesdosis von Mäusen etwa 9,6 g/kg.
<ol><li>Behandeln Sie die LJZD- und 5-ASA-Gruppe mit 0,1 ml/10 g der vorbereiteten LJZD- und 5-ASA-Lösung durch Magensonde in Woche 7 bzw. Woche 15.<ol><li>Führen Sie für die intragastrische Verabreichung bei Mäusen das folgende Verfahren durch. Halten Sie die Maus in der linken Hand und in der rechten Hand das Magenperfusionsgerät. Führen Sie die Spritzennadel in den Mund ein und schieben Sie sie an der Rückwand des Rachens der Mäuse hinunter. Gleiten Sie den Rachen hinunter, während die Mäuse schlucken, und bewegen Sie sich weiter vorwärts. Wenn ein Gefühl des Widerstands vorhanden war und die Spritze in den Rachen geschoben werden konnte, ziehen Sie die Nadel heraus und beenden Sie die Injektion.</li>
	</ol></li>
	<li>Behandeln Sie die Kontroll- und Modellgruppe mit der gleichen Menge Kochsalzlösung (siehe Materialtabelle).</li>
	<li>Behandeln Sie die Mäuse in jeder Gruppe während des Verabreichungszeitraums einmal täglich zur gleichen Zeit mit einem geeigneten Medikament.</li>
</ol>4. Bewertung des UC-CRC-Modells und Wirksamkeit von LJZD
<ol><li>Krankheitsaktivitätsindex-Score HINWEIS: Gemäß Tabelle 2 wurde der Krankheitsaktivitätsindex (DAI) durch Kombination von Gewichtsverlust, Stuhlviskosität und Stuhlblutung der Mäuse bewertet.<ol><li>Zeichnen Sie das Gewicht der Mäuse täglich vom Beginn der adaptiven Fütterung bis zum Ende der medikamentösen Behandlung auf.</li>
		<li>Beobachten Sie die Kotkonsistenz jeder Versuchsmaus sorgfältig und notieren Sie den Stuhlgang als eine der drei Bedingungen: normaler, lockerer Stuhl und wässriger Durchfall.</li>
		<li>Zeichnen Sie die Kotblutungen von Versuchstieren als eine der drei Bedingungen auf: keine Blutung, geringe Blutung und sichtbares Blut im Stuhl.</li>
	</ol></li>
	<li>Nachweis des IL-6-Spiegels im Serum<ol><li>Behandeln Sie Mäuse 9 Wochen lang mit LJZD oder 5-ASS. Fixieren Sie die Mäuse, indem Sie mit der linken Hand die Halshaut der Maus greifen und leicht auf den Experimentiertisch drücken, um die seitliche Dekubitusposition einzunehmen. Schneiden Sie die Schnurrhaare der Mäuse mit einer Schere ab. Schneiden Sie die Schnurrhaare der Mäuse vorsichtig mit einer Schere ab (siehe Materialtabelle), um eine Blutkontamination zu vermeiden. HINWEIS: Mäuse, die nicht frei wackeln konnten, wurden als ordnungsgemäß fixiert angesehen. Geschieht dies nicht, sollten die Mäuse fixiert werden.</li>
		<li>Betäuben Sie die Maus durch Inhalation von 2% Isofluran. Sterilisieren Sie die Haut um den Augapfel mit Ethanol (siehe Materialtabelle). Drücken Sie die Augenhaut sanft auf die Seite, um den Augapfel zu verstopfen und hervorzustehen.</li>
		<li>Klemmen Sie den Augapfel mit einer Ellbogenpinzette fest und entfernen Sie die Augäpfel genau und schnell. Lassen Sie das Blut in das Zentrifugalröhrchen tropfen (siehe Materialtabelle). Tippen Sie dabei auf das Herz der Maus, um die Blutentnahme zu beschleunigen.</li>
		<li>Das gesammelte Blut 30 min bei Raumtemperatur aufbewahren und 10 min bei 3.500 x g zentrifugieren. Sammeln Sie den Überstand und erkennen Sie den IL-6-Füllstand gemäß den Anweisungen des IL-6-Inhaltserkennungskits (siehe Materialtabelle).</li>
	</ol></li>
	<li>Trennung von kolorektalem Gewebe<ol><li>Euthanasieren Sie die Mäuse nach der Blutentnahme durch Einatmen von 5% überdosiertem Isofluran und Gebärmutterhalsluxation (siehe Materialtabelle) in Übereinstimmung mit der Tierethik.</li>
		<li>Halten Sie die Mäuse in einer kryogenen anatomischen Umgebung. Immobilisieren Sie die Mäuse in Rückenlage. Schneiden Sie die Unterbauchhaare mit einer Schere ab und sterilisieren Sie sie mit Ethanol.</li>
		<li>Drücken Sie den Schnittpunkt zwischen den beiden Oberschenkelwurzeln und der Bauchmittellinie mit einer Augenlidzange zusammen (siehe Materialtabelle). Schneiden Sie mit einer Schere einen Querschnitt von ca. 1-1,5 cm.</li>
		<li>Schneiden Sie einen Längsschnitt entlang der Mittellinie des Abdomens vom Mittelpunkt des Querschnitts in Richtung des Processus xiphoideus.</li>
		<li>Entfernen Sie das perikolorektale Gewebe in Richtung des Anus, um das Kolorektum vom umgebenden Gewebe zu trennen. Achten Sie darauf, den Darm nicht zu beschädigen.</li>
		<li>Drücken Sie die Haut des Bauches zur Seite, um den Darm vollständig freizulegen. Entfernen Sie den Darm mit einer Augenlidzange aus der Bauchhöhle und schneiden Sie die Segmente vom Anus bis zum Blinddarm ab (ausgenommen). Die Gesamtlänge beträgt ca. 10 cm. Lagern Sie das erhaltene kolorektale Gewebe in Kochsalzlösung bei 4 °C.</li>
	</ol></li>
	<li>Beurteilung der Länge und des Gewichts des Enddarms<ol><li>Extrahieren Sie die Kochsalzlösung bei 4 °C mit einer 5-ml-Nadel (siehe Materialtabelle), um das Innere des Darms zu spülen. Legen Sie dann den Darm auf saugfähiges Papier, um die Feuchtigkeit des Gewebes aufzunehmen.</li>
		<li>Wiegen Sie die kolorektalen Gewebe und legen Sie sie dann auf A4-Papier, um ihre Länge zu messen.</li>
	</ol></li>
	<li>Messen Sie die Anzahl der Tumoren im Darm<ol><li>Schneiden Sie den Darm der Länge nach ab, um ihn vollständig zu entfalten, und beobachten Sie die Anzahl und Größe der Tumoren im Darm.</li>
	</ol></li>
	<li>Pathologische Analyse des Kolorektums<ol><li>Fixieren Sie das Colorectum 24 h lang in 4% Paraformaldehyd. Das fixierte rektale Gewebe in geschmolzenes Paraffin einbetten und kontinuierlich mit einer Dicke von 5 μm durch ein Gewebegefriermikrotom schneiden.</li>
		<li>Nach dem Verfahren von Hou et al.24 werden die Abschnitte in Xylol entwachst und dann mit seriellen Ethanolkonzentrationen dehydriert. Spülen Sie die Abschnitte nach 5 Minuten Färbung mit Hämatoxylinlösung mit reinem Wasser ab. Danach 1 Minute lang mit 0,5% iger Eosinlösung färben (siehe Materialtabelle).</li>
		<li>Führen Sie erneut eine Gradientendehydrierung und eine transparente Xylolbehandlung durch. Versiegeln Sie die Schnitte und betrachten Sie sie unter dem Lichtmikroskop (siehe Materialtabelle) und fotografieren Sie, wie von Xie et al.25 beschrieben.</li>
	</ol></li>
	<li>Immunhistochemische Analyse des Kolorektums<ol><li>Entwachse und dehydriere die Schnitte nach der obigen Methode. Reparieren Sie das Antigen in den Schnitten mit thermischer Hochdruckreparaturtechnik, wie von Gök et al. beschrieben26.</li>
		<li>Die Schnitte 15 min bei Raumtemperatur in endogenen Peroxidaseblockern einweichen. Versiegeln Sie die Abschnitte mit Ziegenserum (siehe Materialtabelle).</li>
		<li>Die primären Antikörper ZO-1 (1:1000), Occludin (1:1000) und KI67 (1:500; siehe Materialtabelle) werden in die Schnitte gegeben und über Nacht bei 4 °C inkubiert. Spülen Sie die Schnitte mit PBS-Puffer (siehe Materialtabelle), fügen Sie Allzweck-Sekundärantikörper (1:5000; siehe Materialtabelle) hinzu und inkubieren Sie 30 Minuten lang bei 37 °C.</li>
		<li>Fügen Sie die DAB-Lösung (siehe Materialtabelle) zu den Abschnitten für die Farbentwicklung hinzu. Färben Sie die Abschnitte mit Hämatoxylinlösung.</li>
		<li>Entwässern, transparentisieren und versiegeln Sie die Abschnitte erneut. Beobachten Sie die Expression von Proteinen mit dem Lichtmikroskop.</li>
	</ol></li>
</ol>

Liujunzi-Abkochung: Eine wirksame Behandlung zur Vorbeugung von UC-CRC

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Darmkrebs ist eine der häufigsten Krebsarten weltweit, mit etwa 1.148.000 neuen Fällen und mehr als 576.000 Todesfällen pro Jahr. CRC kann nach unterschiedlichen Ursachen in drei Typen unterteilt werden, darunter erbliche, sporadische und UC-CRC31. Die Inzidenz von Darmkrebs bei Patienten mit entzündlichen Darmerkrankungen wie UC ist deutlich höher als in der Allgemeinbevölkerung. UC stimuliert die Entwicklung von Darmkrebs über den entzündlichen Krebsweg, der sich vom typischen Adenom-Ade...

Darmkrebs (CRC) ist eine häufige gastrointestinale Malignität, die dritthäufigste Malignität und die zweithäufigste Todesursache der Welt, die 10 % der weltweiten Krebsinzidenz und 9,4 % der gesamten krebsbedingten Todesfälle ausmacht 1,2. Genetische Faktoren, chronische Entzündungen, fettreiche Ernährung, Diabetes und eine abnormale Darmflora sind Risikofaktoren für den Darmkrebs 3,4. Unter ihnen ist eine entzündliche Darmerkrankung, insbesondere die Cololoproktitis ulcerosa (UC), ein klarer Risikofaktor für den Darmkrebs 5,6. UC-assoziiertes CRC (UC-CRC) ist ein Übergangsprozess von Entzündungen, atypischer Hyperplasie und Krebs, der auf einer chronischen Entzündung des Dickdarms beruht und sich vom typischen Adenom-Adenokarzinom-Entwicklungsmodell des SFB 7,8 unterscheidet. Im Vergleich zur Allgemeinbevölkerung ist das Risiko für Darmkrebs bei Patienten mit entzündlichen Darmerkrankungen etwa 10-40-mal höher9.
Derzeit ist eine Operation immer noch die Standardbehandlung für Darmkrebs, und je nach Ort und Stadium des Tumors sind eine Strahlentherapie, eine systemische medikamentöse Therapie oder eine Kombination aus beidem möglich10. Obwohl diese traditionellen Behandlungsmodalitäten aufgrund der hohen Heterogenität und Rezidivrate von Darmkrebs große Fortschritte gemacht haben, ist die Prognose schlecht und der Behandlungseffekt nicht ideal11,12. Daher sind Früherkennung, Früherkennung und umfassende Behandlung der Schlüssel zur Verbesserung der Überlebensrate von Darmkrebspatienten, und es ist besonders wichtig, auf die Umwandlung von UC in Darmkrebs zu achten. Im Laufe der Jahre hat die Traditionelle Chinesische Medizin (TCM) aufgrund ihrer begrenzten Nebenwirkungen und ihrer signifikanten Wirksamkeit viel Aufmerksamkeit bei der Behandlung von UC-CRC oder chronischer Gastritis auf sich gezogen. Basierend auf der dialektischen Behandlung haben berühmte chinesische Mediziner verschiedener Generationen eine große Anzahl klassischer Rezepte erstellt, wie z. B. Huangqi Jianzhong Abkochung13, Sijunzi Abkochung14 und Sishen Pille15.
Der Liujunzi-Sud (LJZD) stammt aus den Werken von Yi Xue Zheng Zhuan, die in der Ming-Dynastie zusammengestellt wurden, und ist eine klassische Verschreibung in TCM16. Wie in Tabelle 1 gezeigt, besteht LJZD aus sechs traditionellen Kräutern, darunter Codonopsis pilosula (Franch.) Nannf. (Dangshen), Poria cocos (Schw.) Wolf (Fuling), Atractylodes macrocephala Koidz. (Baizhu), Glycyrrhiza uralensis Fisch. (Gancao), Citrus reticulata Blanco (Chenpi) und Pinellia ternata (Thunb.) Breit (Banxia), das die Wirkung hat, das Qi wieder aufzufüllen und die Milz zu stärken, Feuchtigkeit zu trocknen und Schleim aufzulösen. In der modernen klinischen Praxis wird es häufig zur Behandlung von chronischer Gastritis, Magengeschwüren und Zwölffingerdarmgeschwüren eingesetzt. Moderne pharmakologische Forschung hat gezeigt, dass LJZD und modifiziertes LJZD einen hohen Anwendungswert bei der adjuvanten Behandlung von UC und Krebs des Verdauungstrakts haben 17,18,19.
Gegenwärtig gibt es viele Möglichkeiten, UC-CRC-Mausmodelle zu konstruieren, aber das Azoxymethan (AOM)/Dextransulfat-Natrium (DSS)-induzierte Mausmodell ist das am weitesten verbreitete UC-CRC-Modell; Die klinischen Symptome, morphologischen und pathologischen Beobachtungen haben gezeigt, dass das Modell dem menschlichen UC-CRC sehr ähnlichist 20,21. Das Grundprinzip besteht darin, zunächst die Karzinogenese mit dem chemisch karzinogenen AOM zu induzieren und dann Mäuse kontinuierlich der entzündlichen Stimulationsumgebung von DSS auszusetzen, um die kontinuierliche Schädigung und Reparatur des Darmschleimhautepithels zu simulieren und so ein UC-CRC-Mausmodellzu konstruieren 22. Ziel dieser Arbeit ist es, ein Mausmodell von UC-CRC durch intraperitoneale Injektion von AOM und zyklische Stimulation von DSS kurzfristig zu etablieren und die Wirkung des Medikaments und den molekularen Mechanismus von LJZD auf UC-CRC zu bewerten, um eine wissenschaftliche Grundlage für die Behandlung von UC-CRC zu schaffen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Azoxymethane</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A5486</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-amino salicylic acid</td>
			<td>Kuihua Pharmaceuticals Group Jiamusi Luling Pharmaceutical Co., Ltd</td>
			<td>3819413</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J mice</td>
			<td>Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>NO 210726210100853716</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover slip</td>
			<td>Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd</td>
			<td>10212432C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAB color development kit</td>
			<td>Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd</td>
			<td>2005289</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dewatering machine&#160;</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JJ-12J</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran sulfate sodium</td>
			<td>Dalian Meilun Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>MB5535</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding machine</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JB-P5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin-eosin dye</td>
			<td>Wuhan Hundred Degree Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>B1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-6</td>
			<td>Jiangsu Meimian Industrial Co., Ltd</td>
			<td>MM-0163M2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD Life Science Co., Ltd</td>
			<td>R510-22-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KI67 primary antibody</td>
			<td>Google Biotechnology Inc</td>
			<td>GB121141</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral gum</td>
			<td>Wuhan Hundred Degree Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>10004160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Object slide</td>
			<td>Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co., Ltd</td>
			<td>10212432A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Occludin primary antibody</td>
			<td>Affnity</td>
			<td>DF7504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orthostatic optical microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Nikon Eclipse CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pathological microtome</td>
			<td>Shanghai Leica Instrument Co., Ltd</td>
			<td>RM2016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ZO-1 primary antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab221547</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of coloproctitis cancer model in mice and evaluation of therapeutic effect of chinese medicine

Darmkrebs (CRC) ist eine häufige bösartige Erkrankung des Verdauungssystems und hat sich zur dritthäufigsten bösartigen Erkrankung weltweit und zur zweithäufigsten Ursache für malignitätsbedingte Todesfälle entwickelt. Die ulzerative Koloproktitis (UC) ist eine präkanzeröse Läsion, und UC-assoziiertes CRC (UC-CRC) ist der häufigste Subtyp von CRC. Daher ist ein vernünftiges UC-CRC-Modell der Eckpfeiler und Garant für die Entwicklung neuer Medikamente. Die Traditionelle Chinesische Medizin (TCM) ist aufgrund ihrer guten Wirksamkeit bei der Behandlung von UC-CRC weit verbreitet. Als klassisches Tonikum der TCM ist die Liujunzi-Abkochung (LJZD) bei der Behandlung von UC-CRC weit verbreitet. In dieser Studie wurde ein UC-CRC-Modell durch Kombination von Azomethan und Dextransulfat-Natrium etabliert und das LJZD verabreicht. Die Daten bestätigten, dass LJZD den Krebsübergang bei UC-CRC wirksam hemmen kann, indem es das Körpergewicht der Maus, die kolorektale Länge, pathologische und entzündliche Faktoren, die kolorektale Barrierefunktion und Krebsmarker verwendet. Dieses Protokoll bietet ein System zur Bewertung der Wirksamkeit von TCM bei der Prävention und Behandlung von UC-CRC.

Colorectal cancer (CRC) is a common gastrointestinal malignancy, the third most common malignancy, and the second most common cause of death in the world, accounting for 10% of the global cancer incidence and 9.4% of the total cancer-related death1,2. Genetic factors, chronic inflammation, high-fat diet, diabetes, and abnormal intestinal flora are risk factors for CRC3,4. Among them, inflammatory bowel disease, especially ulcerative coloproctitis (UC), is a clear risk factor for CRC5,6. UC-associated CRC (UC-CRC) is a transition process of inflammation, atypical hyperplasia, and cancer based on chronic inflammation of the colorectum, which is different from the typical adenoma-adenocarcinoma development model of CRC7,8. Compared with the general population, the risk of CRC is approximately 10-40 times higher in patients with inflammatory bowel disease9.
Currently, surgery is still the standard treatment for CRC, and depending on the location and stage of the tumor, radiation therapy, systemic drug therapy, or a combination of both are possible10. Although these traditional treatment modalities have made great progress, due to the high heterogeneity and recurrence rate of CRC, the prognosis is poor, and the treatment effect is not ideal11,12. Therefore, early detection, early diagnosis, and comprehensive treatment are key to improving the survival rate of CRC patients, and it is particularly important to pay attention to the transformation of UC to CRC. Over the years, traditional Chinese medicine (TCM) has attracted much attention in the treatment of UC-CRC or chronic gastritis due to its limited side effects and significant efficacy. Based on dialectical treatment, famous Chinese medicine practitioners of various generations have created a large number of classic prescriptions, such as Huangqi Jianzhong decoction13, Sijunzi decoction14, and Sishen pill15.
Liujunzi decoction (LJZD) originated from the works of Yi Xue Zheng Zhuan compiled in the Ming Dynasty and is a classic prescription in TCM16. As shown in Table 1, LJZD consists of six traditional herbs, including Codonopsis pilosula (Franch.) Nannf. (Dangshen), Poria cocos (Schw.) Wolf (Fuling), Atractylodes macrocephala Koidz. (Baizhu), Glycyrrhiza uralensis Fisch. (Gancao), Citrus reticulata Blanco (Chenpi) and Pinellia ternata (Thunb.) Breit (Banxia), which has the effect of replenishing qi and strengthening the spleen, drying dampness, and resolving phlegm. In modern clinical practice, it is often used to treat chronic gastritis, gastric ulcers, and duodenal ulcers. Modern pharmacological research has shown that LJZD and modified LJZD have high application value in the adjuvant treatment of UC and digestive tract cancer17,18,19.
At present, there are many ways to construct UC-CRC mouse models, but the azoxymethane (AOM)/dextran sulfate sodium (DSS) induced mouse model is the most widely used UC-CRC model; the clinical symptoms, morphological, and pathological observations have proved that the model is very similar to human UC-CRC20,21. The basic principle is to first induce carcinogenesis with chemical carcinogen AOM and then continuously expose mice to the inflammatory stimulation environment of DSS to simulate the continuous damage and repair of intestinal mucosal epithelium, thereby constructing a UC-CRC mouse model22. The aim of this study is to establish a mouse model of UC-CRC by intraperitoneal injection of AOM and cyclic stimulation of DSS in the short term and to evaluate the effect of the drug and the molecular mechanism of LJZD on UC-CRC in order to provide a scientific basis for the treatment of UC-CRC.

Autor im Rampenlicht: Liujunzi-Abkochung als traditionelle chinesische Behandlung von Koloproktitis-Krebs

Etablierung eines Koloproktitis-Krebsmodells bei Mäusen und Bewertung der therapeutischen Wirkung der chinesischen Medizin

This study was on the prevention and treatment of coloproctitis cancer with traditional Chinese medicine. We aim to establish a mouse model for coloproctitis cancer and evaluate traditional Chinese medicine indicators. We confirmed that the Chinese medicine Liujunzi decoction is a effective treatment for coloproctitis cancer prevention.In the future, we will work to identify more sensitive biomarkers for colon and rectal cancer and screen Liujunzi decoction for therapeutic targets.

Die Abkochung von LJZD wurde gemäß dem Zusammensetzungsverhältnis der Arzneimittel in Tabelle 1 und der Abkochmethode der TCM in Abbildung 1A hergestellt. Gemäß dem in Abbildung 1B angegebenen Zeitpunkt wurden Mäusen am 7. Tag intraperitoneal 1 mg/ml AOM injiziert, und Mäuse erhielten in der 3., 6. und 9. Woche freien Zugang zu Trinkwasser mit 2% DSS. Das UC-CRC-Mausmodell wurde in der 15.<...

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Dieses Protokoll bietet ein Mausmodell für ulzerativen Koloproktitis-assoziierten Darmkrebs, der durch Azomethan in Kombination mit Dextransulfat-Natrium induziert wird. Das Modell wurde verwendet, um die Wirksamkeit von Verbindungen der traditionellen chinesischen Medizin bei der Prävention und Behandlung von Darmkrebs zu bewerten.

Colorectal cancer (CRC) is a common malignancy of the digestive system and has become the third most common malignancy worldwide and the second leading ...

Diese Studie befasste sich mit der Prävention und Behandlung von Koloproktitis-Krebs mit traditioneller chinesischer Medizin. Unser Ziel ist es, ein Mausmodell für Koloproktitis-Krebs zu etablieren und Indikatoren der traditionellen chinesischen Medizin zu bewerten. Wir haben bestätigt, dass die chinesische Medizin Liujunzi Abkochung eine wirksame Behandlung zur Prävention von Koloproktitis-Krebs ist.In Zukunft werden wir daran arbeiten, empfindlichere Biomarker für Dickdarm- und Rektumkrebs zu identifizieren und die Liujunzi-Abkochung auf therapeutische Ziele zu untersuchen.

establishment-coloproctitis-cancer-model-mice-evaluation-therapeutic

Research

JoVE Journal

Medicine

Establishment of Coloproctitis Cancer Model in Mice and Evaluation of Therapeutic Effect of Chinese Medicine

596 Aufrufe.  Changchun University of Chinese Medicine. Diese Studie befasste sich mit der Prävention und Behandlung von Koloproktitis-Krebs mit traditioneller chinesischer Medizin. Unser Ziel ist es, ein Mausmodell für Koloproktitis-Krebs zu etablieren und Indikatoren der traditionellen chinesischen Medizin zu bewerten. Wir haben bestätigt, dass die chinesische Medizin Liujunzi Abkochung eine wirksame Behandlung zur Prävention von Koloproktitis-Krebs ist.In Zukunft werden wir daran arbeiten, empfindlichere Biomarker für Dickdarm- und ...

Serie: Autor im Rampenlicht: Liujunzi-Abkochung als traditionelle chinesische Behandlung von Koloproktitis-Krebs

Colorectal cancer (CRC) is a common malignancy of the digestive system and has become the third most common malignancy worldwide and the second leading cause of malignancy-related death. Ulcerative coloproctitis (UC) is a precancerous lesion, and UC-associated CRC (UC-CRC) is the most common subtype of CRC. Therefore, a reasonable UC-CRC model is the cornerstone and guarantee of new drug development. Traditional Chinese medicine (TCM) has been widely used in the treatment of UC-CRC due to its good efficacy. As a classic tonic prescription of TCM, Liujunzi decoction (LJZD) has been widely used in the treatment of UC-CRC. In this study, a UC-CRC model was established by combining azomethane and dextran sulfate sodium, and the LJZD was administered. The data confirmed that LJZD can effectively inhibit cancer transition in UC-CRC by using mouse body weight, colorectal length, pathological and inflammatory factors, colorectal barrier function, and cancer markers. This protocol provides a system for evaluating the efficacy of TCM in the prevention and treatment of UC-CRC.

This protocol provides a mouse model of ulcerative coloproctitis-associated colorectal cancer induced by azomethane combined with dextran sulfate sodium. The model was used to evaluate the efficacy of traditional Chinese medicine compounds in the prevention and treatment of colorectal cancer.

Forschung

Medizin

Preparation of Liujunzi Decoction (LJZD) for the Treatment of Ulcerative Coloproctitis-Colorectal Cancer  (UC-CRC)

To begin place Dang Shen, Bai Zhu, into a specialized ceramic pot. Add 1000 milliliters of distilled water and let it soak at room temperature for one hour. Using a grinder, grind 12 grams of Fu ling into a fine powder.Then, soak the powdered Fu ling in 300 milliliters of distilled water in a separate container for one hour at room temperature. Mix the prepared Chinese herbal mixture in the specialized ceramic pot. Boil the mixture and maintain it over medium heat until the decoction volume reduces to 300 milliliters.Combine the filtrate obtained from the decoction and continue boiling until the volume reduces to 150 milliliters. Then centrifuge the concentrated liquid at 10, 000 G for five minutes. Concentrate the obtained supernatant to 30 milliliters over medium heat.Transfer the final concentrate to a dish and dry it using an electric drying oven until only the solute remains as a powder. Now, weigh the obtained powder, and dissolve it in sterile distilled water to create the daily dosage for mice. To prepare five amino salicylic acid, weigh 64 milligrams of five amino salicylic acid powder, and dissolve it in 200 milliliters of sterile distilled water.

Herstellung von Liujunzi-Sudung (LJZD) zur Behandlung von Cololoproktitis ulcerosa-Darmkrebs (UC-CRC)

Establishment of an Ulcerative Coloproctitis-Colorectal Cancer (UC-CRC) Model to Evaluate the Therapeutic Effect of Chinese Medicine

To begin, gently position the mouse with its belly up and the head slightly down. Grasp the back skin to secure the abdominal area and insert a one milliliter syringe needle, one centimeter to the right of the midline of the abdomen at the intersection of the line, connecting both thighs. Gradually insert the one milliliter syringe needle to a depth of three to five millimeters under the skin.Insert the needle approximately 0.3 to 0.5 millimeters into the abdominal cavity at a 45 degree angle. Once the needle tip passes through the abdominal muscle, notice a sudden decrease in resistance. Slowly inject 0.1 milliliters of the azoxymethane injection solution per 10 grams of body weight into the mice.Subsequently, retract the syringe gently. Then add 500 milliliters of sterile distilled water to 10 grams of DSS. To prepare a 2%DSS solution.Mix the solution with a vortex mixer and store at four degrees Celsius until use, administer the prepared LJZD and five amino salicylic acid solution daily at a consistent time via gastric gavage to the respective groups at week seven and week 15.

Etablierung eines ulzerativen Koloproktitis-Darmkrebs-Modells (UC-CRC) zur Bewertung der therapeutischen Wirkung der chinesischen Medizin

Evaluation of an Ulcerative Coloproctitis-Colorectal Cancer (UC-CRC) Model and Efficacy of Liujunzi Decoction (LJZD)

To begin, establish the UC-CRC mouse model and administer the prepared LJZD and 5-ASA solution to the respective groups. After the drug treatment, monitor the weight of mice daily from the beginning of adaptive feeding until the end of drug treatment. Diligently observe and document the fecal consistency of each experimental mouse, categorizing it as normal, loose stools or watery diarrhea.Carefully document any fecal bleeding observed in the experimental animals, categorizing it into no bleeding, minimal bleeding, or visible blood in the stool. To separate the colorectal tissue, maintain the euthanized mice within a cryogenic anatomical environment. Secure the mice in a supine position.Using scissors, trim the lower abdominal hair and sterilize the area with ethanol. Using eyelid forceps, gently grasp the intersection point between the two thigh roots and the abdominal midline. Then use scissors to create a one to 1.5 centimeters long transverse incision.Perform a longitudinal incision along the median line of the abdomen, starting from the midpoint of the transverse incision to the xiphoid process. Carefully detach the peri-colorectal tissues in the direction towards the anus, separating the colorectum rom the surrounding tissue. Gently push aside the abdominal skin to fully expose the colorectum.Using eyelid forceps, extract the colorectum from the abdominal cavity and section it from the anus to the cecum. Preserve the collected colorectal tissues in saline at four degrees Celsius. The UC-CRC model group had a significant weight loss compared to the control group which was alleviated by LJZD treatment.LJZD treatment improved the disease activity index compared with the UC-CRC model group.