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Method Article
En este artículo se describe la cultura de los cortes de tejido de pacientes para estudios de administración de genes y el posterior análisis de la expresión génica mediante imágenes de bioluminiscencia IVIS.
Este vídeo describe el uso de tejido de un paciente como un modelo ex vivo para el estudio de la administración de genes. Tejido fresco obtenido del paciente en el momento de la cirugía se rebana y se mantienen en cultivo. El sistema vivo ex modelo permite la entrega física de los genes en el tejido del paciente intacto y la expresión de genes es analizado por imágenes de bioluminiscencia utilizando el sistema de detección de IVIS. El sistema de detección bioluminiscentes demuestra la cuantificación rápida y precisa de la expresión génica dentro de sectores individuales sin necesidad de sacrificar tejido. Este tejido rebanada sistema de cultivo puede ser utilizado en una variedad de tipos de tejidos incluyendo los tejidos normales y malignos, y nos permite estudiar los efectos de la naturaleza heterogénea del tejido intacto y el alto grado de variabilidad entre los pacientes individuales. Este modelo de sistema se podría utilizar en ciertas situaciones, como una alternativa a los modelos animales y como un modo complementario preclínicas antes de entrar en ensayos clínicos.
Preparación de medios y reactivos
I. colección de tejidos y de almacenamiento
Aprobación para la recolección de tejido del paciente se obtuvo de la Investigación Clínica del Comité de Ética de los hospitales de Cork enseñanza y se obtuvo el consentimiento de los pacientes el día antes de la cirugía. Tejido hepático se obtuvo de los pacientes sometidos a hepatectomía parcial de una enfermedad maligna.
II. Tejido rebanada preparación y la cultura
Rebanar se realizó con un vibratome (Leica, Alemania). El sistema de corte de tejido se utilizó de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Preparación de tejidos corte se llevó a cabo bajo una campana estéril utilizando instrumentos limpiados con un 70% 2-propanol. Grosor de corte se fija en 2.000 micrones y cortar con una cuchilla de vaivén a 22-26 rpm.
III. Gen de entrega de cortes de tejido
IV. Análisis de la expresión génica mediante el análisis bioluminiscente
V. Los resultados representativos
Figura 1. Imágenes bioluminiscentes de cortes de hígado de pacientes con sistema de detección de IVIS.
Se describe un paciente ex vivo de tejidos método de cultivo y sistema de detección de bioluminiscencia para la evaluación de la entrega de genes dentro de no fija el tejido humano. El método ofrece una forma simple y reproducible de los cortes de tejido de cultivo. Tiene un potencial significativo, ya que permite el estudio de la administración de genes en el tejido humano intacto, el análisis de la entrega de genes en una variedad de tejidos humanos, incluidos los tejidos malignos y pueden proporcionar ...
Este trabajo fue financiado a través del sur de Cork Hospital Victoria de fondos del Hospital Universitario de mama, la Sociedad del Cáncer de Irlanda (CRI07TAN) y el Centro de Investigación del Cáncer Cork. Replicación incompetente adenovirus recombinante partículas de 5 bajo el control transcripcional del promotor de CMV fue una especie de regalo del profesor Andrew Baker, de la Universidad de Glasgow.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
DMEM | Sigma-Aldrich | D6429 | |
PBS | Sigma-Aldrich | D8537 | |
Firefly Luciferin | Biosynth International, Inc | ||
Dermabond | Johnson & Johnson | ||
Vibrotome | Leica Microsystems | VT 1000 A |
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