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Method Article
Este artigo descreve a cultura de fatias de tecido de pacientes para estudos de genes de entrega e análise de expressão gênica utilizando IVIS imagem de bioluminescência.
Este vídeo descreve o uso de tecido do paciente como um modelo ex vivo para o estudo da entrega do gene. Tecido do paciente fresca obtida no momento da cirurgia é cortado e mantidas em cultura. O sistema modelo ex vivo permite a entrega física de genes em tecidos de pacientes intactos e expressão do gene é analisado por imagem de bioluminescência usando o sistema de detecção de IVIS. O sistema de detecção bioluminescentes demonstra quantificação rápida e precisa da expressão do gene dentro fatias individuais sem a necessidade de sacrificar tecido. Esta fatia do sistema de cultura de tecidos pode ser utilizado em uma variedade de tipos de tecidos, incluindo o tecido normal e maligno e nos permite estudar os efeitos da heterogeneidade do tecido intacto e do alto grau de variabilidade entre pacientes individuais. Este modelo de sistema poderia ser usado em determinadas situações como uma alternativa aos modelos animais e como um modo de pré-clínicos complementares antes de entrar em teste clínico.
Preparação de Mídia e Reagentes
I. coleção de tecidos e de armazenamento
Aprovação para a coleta do tecido do paciente foi obtida a partir da Clínica de Ética em Pesquisa dos Hospitais de Ensino Cork e consentimento informado foi obtido dos pacientes na véspera da cirurgia. Tecido hepático foi obtido de pacientes submetidos a hepatectomia parcial de doença maligna.
II. Preparação do tecido fatia e cultura
Corte foi realizado utilizando um vibratome (Leica, Alemanha). O sistema de corte de tecido foi usado de acordo com as instruções do fabricante. Preparação fatia de tecido foi realizada sob um capuz estéreis, utilizando instrumentos limpos com 70% 2-propanol. Espessura de corte é de 2.000 microns e cortados com uma lâmina alternativo em 22-26 rpm.
III. A entrega do gene em fatias de tecido
IV. Análise de expressão gênica por análise bioluminescentes
Representante Resultados V.
Figura 1. Bioluminescent imagem de fatias de fígado de pacientes, utilizando IVIS sistema de detecção.
Nós descrevemos um paciente vivo ex método de cultura de tecidos e sistema de detecção de bioluminescentes para a avaliação de entrega de genes no interior não fixa o tecido humano. O método oferece uma maneira simples e reprodutível de fatias de tecido de cultura. Ele tem um potencial significativo, pois permite o estudo da entrega do gene no tecido humano intacto, a análise da prestação de gene em uma variedade de tecidos humanos, incluindo tecido maligno e pode fornecer informações importantes ...
Este trabalho foi financiado através da Enfermaria Cork South Victoria University Hospital fundo do peito, a Sociedade do Câncer irlandês (CRI07TAN) e do Centro de Cork Cancer Research. Replicação incompetentes recombinante Adenovírus 5 partículas sob o controle transcricional do promotor CMV foi um presente amável do Prof Andrew Baker, da Universidade de Glasgow.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
DMEM | Sigma-Aldrich | D6429 | |
PBS | Sigma-Aldrich | D8537 | |
Firefly Luciferin | Biosynth International, Inc | ||
Dermabond | Johnson & Johnson | ||
Vibrotome | Leica Microsystems | VT 1000 A |
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