Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Method Article
Bu makale, gen teslimat çalışmaları ve IVIS biyoparlaklık görüntüleme kullanarak gen ekspresyonu sonraki analiz için hasta doku dilim kültür açıklar.
Bu video ex vivo gen teslim çalışması için bir model olarak hasta doku kullanımı anlatılmaktadır. Taze hasta doku cerrahi sırasında elde dilimlenmiş ve kültür tutulur. Ex vivo model sistem sağlam hasta doku ve gen ekspresyonu biyoparlaklık görüntüleme IVIS algılama sistemi kullanılarak analiz genlerin fiziksel teslimat için sağlar. Bioluminescent algılama sistemi doku kurban için ihtiyaç olmadan hızlı ve doğru tek tek dilimler içinde gen ekspresyonu kantifikasyon göstermektedir. Bu dilim doku kültürü sistemi normal ve malign doku da dahil olmak üzere çeşitli doku tiplerinin kullanılan ve bize sağlam doku heterojen doğası ve yüksek derecede bireysel hastalar arasında değişkenlik etkilerini incelemek sağlar. Bu model sistemi ve klinik araştırmaya girmeden önce bir tamamlayıcı preklinik modu olarak hayvan modellerinde bir alternatif olarak bazı durumlarda kullanılabilir.
Medya ve Reaktifler hazırlanması
I. Doku toplama ve depolama
Hasta doku toplanması için Onay Klinik Araştırmalar Etik Kurulu Cork Hastaneler Öğretim elde edildi ve hastalar operasyondan bir gün önce bilgilendirilmiş onam alınmıştır. Malign hastalık için kısmi hepatektomi uygulanan hastalarda karaciğer dokusu elde edildi.
II. Doku dilim hazırlanması ve kültür
Dilimleme bir vibratome (Leica, Almanya) kullanılarak yapıldı. Üreticinin talimatlarına göre doku dilimleme sistemi kullanılmıştır. Doku dilim hazırlanması% 70 2-propanol ile temizlenmelidir aletler kullanılarak steril bir başlık altında yapıldı. Dilim kalınlığı 2000 mikron ve pistonlu 22-26 rpm'de bıçak kullanılarak kesilir.
III. Gen teslim doku dilimleri
IV. Bioluminescent analizi ile gen ekspresyon analizi
V. Temsilcisi Sonuçlar
Şekil 1 IVIS algılama sistemi kullanarak hastanın karaciğer dilim Bioluminescent görüntüleme.
Biz ex vivo olarak hasta doku kültürü yöntemi ve insan doku içinde sabit olmayan gen teslim değerlendirilmesi için bioluminescent algılama sistemi açıklanmaktadır. Bu yöntem basit ve tekrarlanabilir bir kültür dokusu dilim bir şekilde sunmaktadır. Malign doku da dahil olmak üzere çeşitli insan doku içine bozulmamış insan dokusu içine gen teslim çalışmada, gen teslim analizini sağlar ve saygı ile bireysel hastalar arasında değişkenlik derecesi yüksek olan etkileri ile ilgili önem...
Bu çalışma, Cork Güney Revir Victoria Üniversitesi Hastanesi Göğüs fonu, İrlanda Kanser Derneği (CRI07TAN) ve Cork Kanser Araştırma Merkezi ile finanse edildi. CMV organizatörü transkripsiyonel kontrol altında çoğaltma beceriksiz rekombinant Adenovirüs 5 parçacıklar Glasgow Üniversitesi Prof. Andrew Baker, bir tür hediye edildi.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
DMEM | Sigma-Aldrich | D6429 | |
PBS | Sigma-Aldrich | D8537 | |
Firefly Luciferin | Biosynth International, Inc | ||
Dermabond | Johnson & Johnson | ||
Vibrotome | Leica Microsystems | VT 1000 A |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır