Las investigaciones en el complejo Ga (III) de EOB-DTPA y su<sup&gt; 68</sup&gt; Ga radiomarcados analógica

Resumen

Un procedimiento para el aislamiento de EOB-DTPA y la posterior formación de complejos con Ga naturales (III) y ⁶⁸ Ga se presenta en este documento, así como un análisis exhaustivo de todos los compuestos y las investigaciones sobre el etiquetado de eficiencia, la estabilidad in vitro y el octanol / agua coeficiente de distribución del complejo radiomarcado.

Resumen

Se demuestra un método para el aislamiento de EOB-DTPA (3,6,9-triaza-3,6,9-tris (carboximetil) -4- (etoxibencil) ácido -undecanedioic) de su Gd (III) y los protocolos para la preparación de su novela no radiactivo, es decir, Ga naturales (III), así como radiactivo ⁶⁸ complejo Ga. El ligando así como el Ga (III) se caracterizaron por espectroscopia de resonancia magnética nuclear (NMR), espectrometría de masas y análisis elemental. ⁶⁸ Ga se obtuvo por un método de elución estándar de A / ⁶⁸ generador de Ga ⁶⁸ Ge. Los experimentos para evaluar la eficiencia de ⁶⁸ Ga-etiquetado de EOB-DTPA a pH 3,8-4,0 se llevaron a cabo. Establecido de radio técnicas de análisis de TLC (cromatografía en capa fina) y HPLC radio (cromatografía líquida de alto rendimiento) se utilizaron para determinar la pureza radioquímica del trazador. Como una primera investigación de lipofilia los ⁶⁸ Ga trazadores 'el octanol / agua distribution coeficiente de ⁶⁸ especies Ga presentes en una solución de pH 7,4 se determinó por un método de extracción. medidas de estabilidad in vitro del trazador en diversos medios a pH fisiológico se realizaron, revelando diferentes tasas de descomposición.

Introducción

Gadoxetato, un nombre común para el complejo de Gd (III) del ligando EOB-DTPA ^1, es un agente de contraste utilizado con frecuencia en la imagen hepatobiliar resonancia magnética (MRI). ^2,3 Debido a su captación específica por los hepatocitos del hígado y alto porcentaje de excreción hepatobiliar que permite la localización de las lesiones focales y los tumores hepáticos. ^2-5 Sin embargo, ciertas limitaciones de la técnica de resonancia magnética (por ejemplo, la toxicidad de los agentes de contraste, la aplicabilidad limitada en pacientes con claustrofobia o de metal implantes), invitan a una herramienta de diagnóstico alternativo .

La tomografía por emisión de positrones (PET) es un método de formación de imágenes molecular, en el que se administra una pequeña cantidad de una sustancia radiactiva (trazador), en la que su distribución en el cuerpo es registrada por un escáner de PET. ⁶ PET es un método dinámico que permite una alta resolución espacial y temporal de las imágenes, así como la cuantificación de los resultados, sin tener quehacer frente a los efectos secundarios de los agentes de contraste de MRI. El valor informativo de la información obtenida metabólica puede incrementarse aún más mediante la combinación con los datos anatómicos recibidas de los métodos de imagen adicionales, como más comúnmente alcanzada por híbrido de imágenes mediante tomografía computarizada (TC) en los escáneres PET / CT.

La estructura química de un trazador adecuado para el PET debe incluir un isótopo radiactivo que actúa como emisor de positrones. Los positrones tienen una corta vida, ya que casi inmediatamente se aniquilan con los electrones de las capas atómicas de los tejidos circundantes. Por aniquilación dos fotones gamma 511 keV con dirección opuesta de movimiento son emitidos, que se registran por el escáner de PET. ^7,8 Para formar un trazador, núclidos PET pueden estar unidos covalentemente a una molécula, como es el caso de 2-desoxi- 2- ^[18F] fluoroglucose (FDG), el trazador PET utilizado más ampliamente. ⁷ Sin embargo, un nucleido también puede formar enlaces de coordinación a uno o varios ligandos (por ejemplo,, ^[68 Ga] -DOTATOC ^9,10) o aplicarse en forma de sales inorgánicas disueltas (por ejemplo, ^[18 F] fluoruro de sodio ^11). En total, la estructura del trazador es crucial ya que determina su comportamiento biodistribución, metabolismo y excreción.

A nucleido PET adecuado debe combinar características favorables, como la energía de positrones conveniente y disponibilidad, así como una vida media adecuada para la investigación prevista. El ⁶⁸ Ga nucleido se ha convertido en una fuerza esencial en el campo de PET en las últimas dos décadas. ^12,13 Esto es principalmente debido a su disponibilidad a través de un sistema de generador, lo que permite el etiquetado en el lugar independientemente de la proximidad de un ciclotrón. En un generador, la madre nucleido ⁶⁸ Ge se absorbe en una columna de la que el nucleido hijo ⁶⁸ Ga se eluye y posteriormente la etiqueta a un quelante adecuado. ^6,14 Desde el ⁶⁸ Ga nucleido existe como un trivalcación ent al igual que Gd (III) ^10,13, quelantes EOB-DTPA con ⁶⁸ Ga vez produciría un complejo con la misma carga total negativa como gadoxetato. De acuerdo con ello, que el ⁶⁸ Ga trazador podría combinar una especificidad hepática característica similar con la idoneidad para la formación de imágenes PET. Aunque gadoxetato es comprado y administrado como sal disódica, en el siguiente contexto nos referiremos a ella como Gd [EOB-DTPA] y para el complejo no radiactivo Ga (III) como Ga [EOB-DTPA], o ⁶⁸ Ga [ EOB-DTPA] en el caso del componente radiomarcado en aras de la conveniencia.

Para evaluar su aplicabilidad como trazadores para PET, complejos de metales radiactivos deben ser examinados extensamente in vitro, in vivo o ex vivo experimentos primero. Para determinar la idoneidad para un problema médico respectivo, diversas características tales como el comportamiento de rastreo biodistribución y perfil de eliminación, la estabilidad, la especificidad de órgano y célula o tissue captación necesita ser investigado. Debido a su carácter no invasivo, determinaciones in vitro se realizan a menudo antes de los experimentos in vivo. En general se reconoce que DTPA y sus derivados son de la idoneidad limitada como quelantes para ⁶⁸ Ga debido a estos complejos que carecen de inercia cinética, lo que resulta en la descomposición comparativamente rápida cuando se administra in vivo. ^14-20 Esto es causado principalmente por apo- transferrina actúa como una competidor para ⁶⁸ Ga en el plasma. Sin embargo, se determinó este nuevo trazador en relación con su posible aplicación en imágenes hepatobiliar, en el que la información de diagnóstico puede proporcionarse en cuestión de minutos después de la inyección ^3,4,21-23, con lo que no necesariamente requieren estabilidad trazador a largo plazo. Con este fin hemos aislado EOB-DTPA de gadoxetato e inicialmente realizó la formación de complejos con Ga natural (III), que existe como mezcla de dos isótopos estables, ⁶⁹ Ga y ⁷¹ Ga. El complejo así obtenido sirvió como norma no radiactivo para el siguiente quelación de ⁶⁸ Ga. Se utilizaron los métodos elaborarse y evaluarse simultáneamente su idoneidad para determinar la eficiencia de ⁶⁸ Galabeling EOB-DTPA y para investigar la lipofilia del nuevo trazador ⁶⁸ Ga y su estabilidad en diferentes medios.

Protocolo

1. Preparación de EOB-DTPA y Ga [EOB-DTPA]

Precaución: Por favor, consulte a todas las hojas de datos de seguridad de materiales (MSDS) correspondientes de los disolventes orgánicos, ácidos y alcalinos utilizados antes de su uso. Realizar todos los pasos en una campana de extracción y el uso de equipo de protección personal (gafas de seguridad, guantes, bata de laboratorio).

1. Aislamiento de EOB-DTPA de gadoxetato
   1. Ponga 3 ml de solución inyectable gadoxetic ácido 0,25 M en un matraz. Añadir 500 mg (5,6 mmol) de ácido oxálico a la solución agitada.
   2. Después de agitar durante 1 h, se filtra la suspensión a través de una frita usando presión reducida. Lavar el residuo tres veces con 3 ml de agua, respectivamente.
   3. Combinar los filtrados acuosos y equipar la solución con un electrodo de pH. Añadir ácido clorhídrico 12 M al filtrado hasta que el pH es de aproximadamente -0,1.
   4. Se elimina el disolvente a vacío para dar un residuo incoloro. Almacenar en atmósfera de gas inerte.
   5. Lavar el residuo a fondo (al menos tresveces) con acetato de etilo para eliminar el exceso de ácido oxálico. Secar el residuo al vacío.
   6. Se vuelve a disolver el residuo en 2 ml de agua a temperatura ambiente y después enfriar la solución en un baño de hielo. Sin retirar el baño de hielo, añadir 0,5 M de hidróxido de sodio acuoso gota a gota solución hasta la formación de un sólido incoloro que se observa pegajosa.
   7. Eliminar el agua por decantación. Se lava el sólido dos veces más con 1 ml de agua fría. Se seca el sólido al vacío para producir la primera fracción de producto.
   8. Aislar una fracción de segundo producto de las fracciones combinadas de agua decantada a través de cromatografía en columna (sílice, metanol / agua 4/1). ²⁴ Se elimina el disolvente a vacío.
   9. Si el sólido así obtenido no es blanco puro, disolver en 1 ml de agua, añadir 10 ml de etanol y, posteriormente, 10 ml de éter dietílico para precipitar el producto. Se filtra a través de una frita usando presión reducida y se seca al vacío.
   10. Combinarambas fracciones sólidas de EOB-DTPA y realizar espectroscopia NMR, ²⁵ de espectrometría de masas ²⁶ y ²⁷ elementales análisis.
2. Síntesis de Ga [EOB-DTPA]
   PRECAUCIÓN: sólido cloruro de tienda Ga (III) en una atmósfera inerte seca, ya que al contacto con el aire, la humedad o la descomposición de grasa se lleva a cabo, lo que resulta en vapores corrosivos y formación de impurezas de color amarillo, marrón o negro.
   1. Preparar una solución 0,11 M de stock de la disolución de 1,94 g (11,0 mmol) de cloruro de Ga (III) en 100 ml de agua. Diluir 1 ml de solución de amoniaco acuoso al 25% con 4 ml de agua.
   2. Disolver 80 mg (0,15 mmol) de EOB-DTPA en un matraz en 10 ml de agua. Si es necesario, calentar el disolvente para lograr la disolución completa.
   3. Añadir 1,4 ml (0,15 mmol) de la solución de cloruro de stock Ga (III). Equipar el matraz con un agitador y electrodo de pH. Añadir una solución de amoníaco diluido gota a gota acuosa hasta que el pH de la solución es de aproximadamente 4,1. Se agita a rotemperatura om para 30 min.
   4. Se elimina el disolvente a vacío. Coloque el residuo en un matraz, equipado con un stillhead con un cuello lateral central y paralelo. Equipar el cuello central con un dedo de refrigeración y la del lateral del cuello con una salida de la bomba de vacío
   5. Calentar el residuo bajo presión reducida (125 ° C, 0,6 mbar). Periódicamente eliminar el cloruro de amonio sublimada (visible como revestimiento blanco de la superficie de cristal) del dedo de refrigeración y todavía cabeza, así como de las partes superiores del matraz con un paño ligeramente húmedo. Continuar el proceso hasta que no hay formación visible de nuevo sublimado.
   6. Para eliminar las trazas finales de cloruro de amonio lavar el residuo tres veces con 0,5 ml de metanol caliente, respectivamente. Se seca el residuo incoloro a vacío. Realizar espectroscópicos de RMN, espectrometría de masas ^{25 26} y ²⁷ elementales análisis.

2. Procedimiento general de etiquetado

PRECAUCIÓN: Todas las exexperimentos que incluyen el contacto directo o indirecto con sustancias radiactivas deben llevarse a cabo únicamente por personal capacitado. Por favor, utilice el equipo de protección adecuado. Recoger los residuos radiactivos por separado y almacenar y disponer de acuerdo con la normativa vigente.

1. La elución del generador
   Se utilizó un Ge / ⁶⁸ Ga generador de 40 mCi ⁶⁸ con el nucleido madre obligado como óxido de sílice en dodecil-3,4,5-trihidroxibenzoato: Nota. La elución y purificación pueden llevarse a cabo manualmente o, como fue el caso en este procedimiento, como un proceso automatizado combinado usando una bomba peristáltica y la unidad de dispensador.
   1. Se preparan soluciones de 5,5 M, 1,0 M y ácido clorhídrico 0,05 M. Preparar una solución de cloruro de 5,0 M de sodio que contiene 25 l de ácido clorhídrico 5,5 M por ml. Preparar una solución tampón de pH 4,6 mediante la combinación de 4,1 g de acetato de sodio, 1 ml de HCl (30%) y 2,5 ml de ácido acético glacial y diluyendo la mezcla con agua hasta 50 ml.
   2. precondition A la PS-H ⁺ cartucho por lavado lentamente con 1 ml de ácido clorhídrico 1,0 M y posteriormente 5 ml de agua.
   3. Eluir la columna de sílice del generador con 4 ml 0,05 M HCl. ¹² carga el ⁶⁸ Ga eluato en el PS-H ⁺ cartucho.
   4. Enjuague el cartucho con 5 ml de agua y posteriormente se seca con 5 ml de aire. Eluir el ⁶⁸ Ga desde el cartucho con 1 ml de 5,0 M solución acidificada de cloruro de sodio. ²⁸
2. Etiquetado de EOB-DTPA con ⁶⁸ Ga
   1. Disolver 1 mg (1,9 mmol) de EOB-DTPA en 1 ml de agua. A partir de esta solución llevará 100 l (0,19 mmol) y se diluye con 9,9 ml de agua para preparar una 19 M (10 mg / ml) solución madre de EOB-DTPA.
   2. Retire 50 l (que equivale a 22-29 MBq) de la solución que contiene ⁶⁸ Ga y poner en un vial. Añadir 50 l (0,5 g) de una solución madre 19 mM de EOB-DTPA y 300 l of tampón para elevar el pH a 4,0. Agitar brevemente y se incuba la solución a temperatura ambiente durante 5 min. Retirar una alícuota de 1-5 l y poner a HPLC o análisis de TLC.
   3. Realizar análisis de HPLC de radio en una fase inversa (RP) C18 columna ²⁹ Usar la siguiente fase móvil:. A - agua / ácido trifluoroacético (99,9% / 0,1%), B - acetonitrilo / ácido trifluoroacético (99,9% / 0,1%), gradiente : 06 min 80% A → 0% A (0,5 ml / min), 610 min 0% A (0,5 ml / min).
   4. Determinar las intensidades de los picos de las señales de radio de HPLC como área bajo la curva. Calcular el rendimiento de marcado como la pureza radioquímica (RCP) del trazador como sigue:
      RCP = A _Ga-EOB-DTPA / (A + A _{Ga Ga-EOB-DTPA)} ∙ 100%
      Un _Ga-EOB-DTPA: área bajo la curva de ⁶⁸ Ga [EOB-DTPA]
      Un _Ga: área bajo la curva de la libertad de ⁶⁸ Ga

3. Eficiencia de etiquetado

1. Realizar procedimientos de etiquetado tal como se described en la sección 2. Uso de un rango consistente de inicio de la actividad de ⁶⁸ Ga eluato, por ejemplo, 22 a 29 MBq (40 a 140 l, dependiendo de la frescura del eluido).
2. Añadir la cantidad requerida de solución tampón para ajustar el pH a 3,8 hasta 4,0 (40 a 190 l, dependiendo del volumen de ⁶⁸ Ga eluato). Añadir la cantidad requerida de solución de ligando (10 a 70 l de una solución 19 mM).
3. Añadir las cantidades necesarias de agua para ajustar el volumen general de cada sonda de etiquetado de 1,75 ml. Mezclar bien y dejar reposar la muestra durante 5 min a temperatura ambiente. Realizar análisis de HPLC como se describe en la sección 2 para determinar el rendimiento de marcaje.
4. Realizar procedimientos de etiquetado con cantidades de ligando entre 0,1 mg y 0,7 mg en intervalos de 0,1 g. Realizar experimentos por triplicado para cada concentración de ligando. Calcular el rendimiento medio y la desviación estándar.

4. Estabilidad In Vitro

1. p generalrocedimiento y preparaciones
   1. Disolver una tableta de tampón fosfato salino (PBS) en 200 ml de agua desionizada para preparar una solución de PBS con una concentración de fosfato de 10 mM.
   2. Realizar un etiquetado de 22-29 MBq ⁶⁸ Ga con 0,5 l de EOB-DTPA solución de reserva, tal como se describe en la sección 2. En función del volumen del eluato ⁶⁸ Ga, ajustar la cantidad de tampón, como se describe en la sección 3. Se toman muestras de solución de etiquetado que contiene 6-12 MBq de trazador para la realización de medidas de estabilidad.
   3. Realizar análisis de TLC de radio en placas de aluminio recubiertas de gel de sílice 80 mm usando citrato de sodio acuoso 0,1 M como eluyente y analizar las placas con un escáner de radioactividad TLC. ³⁰ determinar las intensidades de las señales de TLC como área bajo la curva. Calcular la RCP del trazador como sigue:
      RCP = A _Ga-EOB-DTPA / _{(A-Ga Ga libre} + _A-EOB-DTPA + A _Ga-coloidal) ∙ 100%
      Un _Ga-EOB-DTPA: área bajo la curva de ⁶⁸ Ga [EOB-DTPA]
      Un _Ga-libre: área bajo la curva de la libertad de ⁶⁸ Ga
      Un _Ga-coloidal: área bajo la curva de ⁶⁸ Ga coloidal
   4. Calcula RCP _t / RCP ₀ para cada punto de tiempo. Trazar la RCP por lo tanto normalizada vs diferencia de tiempo desde el punto de partida t = 0 min.
      RCP _t = RCP de ⁶⁸ Ga [EOB-DTPA] en el punto de tiempo t.
      RCP = ₀ RCP de ⁶⁸ Ga [EOB-DTPA] en t = 0 min.
2. Estabilidad en solución salina tamponada con fosfato (A)
   1. A 65 l de solución de etiquetado añadir 150 l de PBS solución madre y 60 l de solución de hidróxido de sodio (0,1 M) para elevar el pH a 7,4. Mezclar bien.
   2. Retirar una alícuota de 1-5 l para realizar el análisis de TLC ( "punto de partida"). Inmediatamente almacenar la solución en una incubadora a 37 ° C y retirar alícuotas para realizar análisis de TLC en representarAtive puntos de tiempo durante 3 horas.
3. Estabilidad frente a un exceso de apo transferrina en PBS (B)
   1. A 120 l de solución de etiquetado añadir 50 l de PBS solución madre y 430 l de solución de hidróxido de sodio (0,1 M) para elevar el pH a 7,4. Añadir 40 l de una solución de apo transferrina (25 mg / ml). Mezclar bien.
   2. Retirar una alícuota de 1-5 l para realizar el análisis de TLC ( "punto de partida"). Inmediatamente almacenar la solución en una incubadora a 37 ° C y retirar alícuotas para realizar análisis de TLC en puntos de tiempo representativos sobre 3 hr.
4. Estabilidad en suero humano (C)
   1. Para 500 l de suero humano añadir 25 l de solución de etiquetado y 45 l de solución de hidróxido de sodio (0,1 M) para elevar el pH a 7,4. Mezclar bien.
   2. Retirar una alícuota de 1-5 l para realizar el análisis de TLC ( "punto de partida"). Inmediatamente almacenar la solución en una incubator a 37 ° C y retirar alícuotas para realizar análisis por TLC en puntos de tiempo representativos sobre 3 hr.

5. Determinación del coeficiente de distribución LÖGD

1. Realizar procedimientos de etiquetado tal como se describe en el apartado 2. 50 l de solución de etiquetado añadir 20 l de PBS solución de reserva y 170 l de solución de hidróxido de sodio (0,1 M) para elevar el pH a 7,4.
2. Retirar 200 l de esta solución y ponerla en un frasco de plástico-V. Añadir 200 l de n- octanol. Cerrar el vial y agitar durante 2 min. Centrifugar a continuación la muestra a 1600 xg durante 5 min.
3. Retire triplicados de 40 l de la fase de n-octanol y la fase acuosa cada uno y ponerlos en V-viales separados. Tenga cuidado de no mezclar las capas.
4. Medir la actividad de cada muestra en un contador gamma bien durante 30 segundos. Para cada muestra de repetir inmediatamente la medición de la misma dos veces y calcular la actividad Ᾱ media _t en cuentas por minuto (cpm). Listar la así obtenida Ᾱ _{t, W1,} Ᾱ _{t, W2} y Ᾱ _{t, W3} (tipo de actividades en muestras acuosas) y Ᾱ _{t, O1,} Ᾱ _{T, O2, T Ᾱ, O3} (actividades en octanol) a lo largo de las respectivas punto de tiempo t de su determinación.
5. Definir el punto de la medición de la última muestra como t ₀ tiempo. Determinar y hacer una lista? T en min calculando? T = ₀ tt. Realizar la corrección de la descomposición de Ᾱ _t, utilizando la siguiente fórmula:
   Ᾱ ₀ = Ᾱ _t · 2 ^{(Dt / 68 min).}
6. Calcular Ᾱ _{0, W} como la media de Ᾱ _{0, W1,} Ᾱ _{0, W2} y Ᾱ _{0, W3,} así como Ᾱ _{0, O} como la media de Ᾱ _{0, O1,} Ᾱ _{0, O2} y Ᾱ _{0, O3.} Calcular logD utilizando la siguiente fórmula:
   logD = log [(Ᾱ _{0, O · 40 g) / (Ᾱ 0, W · 33 g)].}
7. Realizar todo el experimento por triplicado y calcular la media logD junto con su desviación estándar.

Resultados

El ligando EOB-DTPA y Ga no radiactivo (III) se analizaron a través de ¹ H y ¹³ C ^{1} H espectroscopía de RMN, espectrometría de masas y análisis elemental. Los resultados enumerados en la Tabla 1 y representadas en las figuras 1-6 verificar la pureza de las sustancias.

La elución del generador Ga Ge ^68/68 proporcionó soluci...

Discusión

EOB-DTPA es accesible a través de una síntesis de múltiples pasos ^33, pero puede muy bien ser aislado a partir de agentes de contraste que contienen disponibles gadoxetato. Para este propósito, el ion central Gd (III) se puede precipitar con un exceso de ácido oxálico. Después de retirar Gd oxalato (III) y ácido oxálico el ligando puede ser aislado mediante precipitación en agua fría a pH 1,5. Sin embargo, con el fin de mejorar los rendimientos de cromatografía en columna del filtrado se puede rea...

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
primovist	Bayer	-	0.25 M
gallium(III) chloride	Sigma-Aldrich Co.	450898
water (deionized)	-	-	tap water deionizing equipment by Auma-Tec GmbH
hydrochloric acid 12 M	VWR	20252.29
sodium hydroxide	Polskie Odczynniki Chemiczne S.A.	810925429
oxalic acid	Sigma-Aldrich Co.	75688
ethyl acetate	Brenntag GmbH	10010447
silica gel	Merck KGaA	1.10832.9025	Geduran Si 60 0.063-0.2 mm
TLC silica gel 60 F254	Merck KGaA	1.16834.0001
methanol	VWR	20903.55
ethanol	Brenntag GmbH	10018366
eiethylether	VWR	23807.468	stored over KOH plates
ammonia solution (25%)	VWR	1133.1
pH electrode	VWR	662-1657
stirring and heating unit	Heidolph	505-20000-00
pump	Ilmvac GmbH	322002
frit	-	custom design
NMR spectrometer	Bruker Coorporation	-	Ultra Shield 400
mass spectrometer	Thermo Fisher Scientific Inc.	-
elemental analyser	Hekatech GmbH Analysentechnik	-	EuroVector EA 3000 CHNS
deuterated water D2O	euriso-top	D214	99.90% D
Material/Equipment required for labeling procedures
68Ge/68Ga generator	ITG Isotope Technologies Garching GmbH	A150
pump and dispenser system	Scintomics GmbH	-	Variosystem
hydrochloric acid 30% (suprapur)	Merck KGaA	1.00318.1000
water (ultrapur)	Merck KGaA	1.01262.1000
sodium chloride (suprapur)	Merck KGaA	1.06406.0500
sodium acetate (suprapur)	Merck KGaA	1.06264.0050
glacial acetic acid (suprapur)	Merck KGaA	1.00066.0250
sodium citrate dihydrate	VEB Laborchemie Apolda	10782	>98.5%
PS-H+ Cartridge (S)	Macherey-Nagel	731867	Chromafix
apo-Transferrin	Sigma-Aldrich Co.	T2036
PBS buffer (tablets)	Sigma-Aldrich Co.	79382
human serum	Sigma-Aldrich Co.	H4522	from human male AB plasma
flasks, columns, etc.		custom design
pH electrode	Knick Elektronische Messgeräte GmbH & Co. KG	765-Set
binary pump (HPLC)	Hewlett-Packard	G1312A (HP 1100)
UV Vis detector (HPLC)	Hewlett-Packard	G1315A (HP 1100)
radioactive detector (HPLC)	EGRC Berthold
HPLC C-18-PFP column	Advanced Chromatography Technologies Ltd.	ACE-1110-1503/A100528
HPLC glass vials	GTG Glastechnik Graefenroda GmbH	8004-HP-H/i3µ
pipette	Eppendorf	-
plastic vials	Sarstedt AG & Co.	6542.007
plastic vials	Greiner Bio-One International GmbH	717201
activimeter	MED Nuklear-Medizintechnik Dresden GmbH	-	Isomed 2010
tweezers		custom design
incubator	Heraeus Instruments GmbH	51008815
vortex mixer	Fisons	-	Whirlimixer
centrifuge	Heraeus Instruments GmbH	75003360
gamma well counter	MED Nuklear-Medizintechnik Dresden GmbH	-	Isomed 2100
water for chromatography	Merck KGaA	1.15333.2500
acetonitrile for chromatography	Merck KGaA	1.00030.2500
trifluoroacetic acid	Sigma-Aldrich	91707
TLC radioactivity scanner	raytest Isotopenmessgeräte GmbH	B00003875	equipped with beta plastic detector