As investigações sobre o Complexo Ga (III) de EOB-DTPA e sua<sup&gt; 68</sup&gt; Ga Radiolabeled Analogue

Resumo

Um procedimento para o isolamento de EOB-DTPA e complexação subsequente com Ga naturais (III) e ⁶⁸ Ga é aqui apresentado, bem como uma análise aprofundada de todos os compostos e investigações sobre a eficiência rotulagem, a estabilidade in vitro e o octanol / água coeficiente de distribuição do complexo marcado radioactivamente.

Resumo

Nós demonstramos um método para o isolamento de EOB-DTPA (3,6,9-triaza-f 3,6,9-tris (carboximetil) -4- (etoxibenzil) ácido -undecanedioic) a partir da sua Gd (III) e os protocolos para a preparação do seu novo não-radioactivos, isto é, singular Ga (III), bem como radioactivos ^68Ga complexo. O ligando, bem como o Ga (III) foram caracterizados por espectroscopia de ressonância magnética nuclear (RMN), espectrometria de massa e análise elementar. ^68Ga foi obtido por um método de eluição a partir de um padrão / ^68Ga gerador ⁶⁸ Ge. Experimentos para avaliar a eficiência ^{de 68} Ga-rotulagem de EOB-DTPA em pH 3,8-4,0 foram realizadas. técnicas de análise de rádio estabelecida TLC (cromatografia de camada fina) e HPLC de rádio (cromatografia líquida de alta eficiência) foram usadas para determinar a pureza radioquímica do traçador. Como uma primeira investigação de lipofilicidade dos ⁶⁸ Ga traçadores o n- octanol / água DISTRIBUTION coeficiente de Ga ⁶⁸ espécies presentes em uma solução de pH 7,4 foi determinada por um método de extracção. medições in vitro de estabilidade do marcador em vários meios a pH fisiológico foram realizadas, revelando diferentes taxas de decomposição.

Introdução

Ácido gadoxético, um nome comum para o complexo de Gd (III) do ligando EOB-DTPA ^1, é um agente de contraste utilizado em imagiologia hepatobiliar frequência de ressonância magnética (MRI). ^2,3 Devido à sua absorção específica do fígado por hepatócitos e elevada percentagem de excreção hepatobiliar que permite a localização das lesões focais e tumores hepáticos. ^2-5 no entanto, certas limitações da técnica de ressonância magnética (por exemplo, a toxicidade dos agentes de contraste, aplicabilidade limitada em pacientes com implantes claustrophobia ou de metal) para chamar uma ferramenta de diagnóstico alternativa .

A tomografia de emissão de positrões (PET) é um método de imagiologia molecular, em que uma pequena quantidade de uma substância radioactiva (traçador) é administrado, em que a sua distribuição no corpo é registado por um aparelho de PET. ⁶ O PET é um método dinâmico que permite alta a resolução espacial e temporal das imagens, bem como a quantificação dos resultados, sem ter delidar com os efeitos colaterais dos agentes de contraste de MRI. O valor informativo das informações metabólica obtida pode ser ainda aumentada pela combinação com dados anatômicos recebidos dos métodos de imagem adicionais, como mais comumente atingida por imagem híbrido com tomografia computadorizada (TC) em scanners de PET / CT.

A estrutura química de um marcador adequado para o PET deve incluir um isótopo radioactivo serve como emissor de positrões. Pósitrons têm um curto período de vida, uma vez que aniquilar quase imediatamente com os elétrons das conchas átomo de tecido circundante. Por aniquilação dois fotões gama 511 keV com direcção oposta de movimento são emitidos, que são registados pelo aparelho de PET ^7,8. Para formar um traçador, nuclidos animal de estimação pode ser ligado covalentemente a uma molécula, como é o caso em 2-desoxi- 2- ^[18F] fluoroglucose (FDG), o marcador PET mais amplamente utilizado. ⁷ no entanto, um nuclídeo também podem formar ligações coordenativas a um ou vários ligantes (por exemplo,, ^[68 Ga] -DOTATOC ^9,10) ou ser aplicado na forma de sais inorgânicos dissolvidos (por exemplo, ^[18F] fluoreto de sódio ^11). No seu conjunto, a estrutura do marcador é crucial, uma vez que determina o seu comportamento biodistribuição, metabolismo e excreção.

Um nuclido PET adequado deve combinar as características favoráveis ​​de energia de positrões como conveniente e disponibilidade, bem como uma meia-vida adequadas para a investigação pretendida. O ^68Ga nuclídeo tornou-se uma força essencial no domínio do PET ao longo das últimas duas décadas. ^12,13 Isto é principalmente devido à sua disponibilidade através de um sistema de gerador, que permite rotulagem no local, independentemente, a partir da vizinhança de um ciclotrão. Em um gerador, o nuclido mãe ⁶⁸ Ge é absorvido numa coluna de onde o nuclídeo filha ^68Ga é eluída e, subsequentemente, rotulados com um agente quelante adequado. ^6,14 Uma vez que o ^68Ga nuclídeo existe como um TrivalPendientesent catião tal como Gd (III) ^10,13, quelantes EOB-DTPA com ^68Ga vez iria produzir um complexo com a mesma carga global negativa como ácido gadoxético. Assim, que ⁶⁸ Ga traçador pode combinar uma especificidade hepática característica semelhante com a aptidão para a imagem PET. Embora o ácido gadoxético é comprado e administrado como sal de sódio, no seguinte contexto vamos nos referir a ele como Gd [EOB-DTPA] e para o complexo não-radioativo Ga (III) como Ga [EOB-DTPA], ou ⁶⁸ Ga [ EOB-DTPA] no caso de o componente marcado radioactivamente por uma questão de conveniência.

Para avaliar a sua aplicabilidade como marcadores para PET, complexos de metais radioactivos têm de ser examinadas extensivamente in vitro, in vivo ou ex experiências in vivo em primeiro lugar. Para determinar a aptidão para o respectivo problema médico, várias características tracer como comportamento biodistribuição e perfil de apuramento, a estabilidade, a especificidade do órgão e célula ou tissue captação precisam ser investigadas. Devido ao seu caráter não-invasivo, in vitro determinações são muitas vezes realizados antes de experimentos in vivo. É geralmente reconhecido que o DTPA e os seus derivados são de aptidão limitada como quelantes para ^68Ga, devido a estes complexos de falta inércia cinética, resultando em decomposição comparativamente rápido, quando administrado in vivo. ^14-20 Isto é causado principalmente pela apo- transferrina actua como um concorrente por ⁶⁸ Ga no plasma. No entanto, nós investigamos este novo marcador relativa à sua eventual aplicação em imagiologia hepatobiliar, em que as informações de diagnóstico podem ser fornecidas dentro de minutos após a injecção ^3,4,21-23, assim, que não implica necessariamente a estabilidade traçador de longo prazo. Para este efeito foram isoladas EOB-DTPA a partir de ácido gadoxético e inicialmente realizado a complexação com Ga naturais (III), que existe como uma mistura de dois isótopos estáveis, ⁶⁹ Ga e ⁷¹ Ga. O complexo assim obtido serviu como padrão não radioactivo para o seguinte quelação de ⁶⁸ Ga. Usamos métodos estabelecidos e, simultaneamente, avaliada sua adequação para determinar a eficiência ⁶⁸ Galabeling de EOB-DTPA e investigar a lipofilicidade do novo ⁶⁸ Ga traçador e sua estabilidade em diferentes mídias.

Protocolo

1. Preparação de EOB-DTPA e Ga [EOB-DTPA]

Cuidado: Por favor, consulte todas as folhas de dados de segurança pertinentes (MSDS) dos utilizados solventes orgânicos, ácidos e alcalinos antes do uso. Execute todas as etapas em um exaustor e usar equipamentos de proteção individual (óculos de segurança, luvas, jaleco).

1. Isolamento de EOB-DTPA a partir de ácido gadoxético
   1. Coloque 3 ml de solução injectável gadoxético 0,25 M de ácido para um balão. Adicionar 500 mg (5,6 mmol) de ácido oxálico à solução agitada.
   2. Depois de se agitar durante 1 hora, filtrar a suspensão através de uma frita utilizando pressão reduzida. Lavar o resíduo três vezes com 3 ml de água, respectivamente.
   3. Combinar os filtrados aquosos e equipar a solução com um eléctrodo de pH. Adiciona-se ácido clorídrico 12 M para o filtrado até que o pH é de cerca de -0,1.
   4. Remover o solvente in vácuo para se obter um resíduo incolor. Armazenar sob gás inerte.
   5. Lavar o resíduo cuidadosamente (pelo menos trêsvezes) com acetato de etilo para remover o excesso de ácido oxálico. Secar o resíduo em vácuo.
   6. Redissolve-se o resíduo em 2 ml de água à temperatura ambiente e depois arrefece-se a solução num banho de gelo. Sem remover o banho de gelo, adicionar 0,5 M de hidróxido de sódio aquoso a solução gota a gota, até que a formação de um sólido incolor é observado pegajosa.
   7. Remover a água por decantação. Lavar os sólidos mais duas vezes com 1 ml de água fria. Seca-se o sólido in vácuo para se obter a primeira fracção do produto.
   8. Isolar uma segunda fracção de produto a partir das fracções combinadas de água decantada por meio de cromatografia em coluna (sílica, metanol / água 01/04). ²⁴ Remover o solvente em vácuo.
   9. Se o sólido assim obtido não é puro branco, dissolvê-la em 1 ml de água, adicionar 10 ml de etanol e subsequentemente 10 ml de éter dietílico para precipitar o produto. Filtra-se através de um filtro poroso utilizando pressão reduzida e seca in vácuo.
   10. Combinarambas as frações sólidas de EOB-DTPA e realizar espectroscopia de RMN, ²⁵ de espectrometria de massa ²⁶ e elementares ²⁷ análises.
2. Síntese de Ga [EOB-DTPA]
   CUIDADO: Loja cloreto de sólido Ga (III) sob uma atmosfera inerte seca, uma vez que ao entrar em contato com o ar, humidade ou a decomposição da graxa ocorre, resultando em vapores corrosivos e formação de impurezas amarelos, castanhos ou pretos.
   1. Prepara-se uma solução de estoque de 0,11 M por dissolução de 1,94 g (11,0 mmol) de Ga (III) cloreto em 100 ml de água. Dilui-se 1 ml de solução de amoníaco aquoso a 25% com 4 ml de água.
   2. Dissolve-se 80 mg (0,15 mmol) de EOB-DTPA num balão de 10 ml de água. Se necessário, aquecer o solvente para se conseguir a dissolução completa.
   3. Adicionar 1,4 ml (0,15 mmol) da solução de cloreto de Ga (III). Equipar o frasco com um agitador e pH-eletrodo. Adicionar gota a gota uma solução de amoníaco diluído aquoso até que o pH da solução é de aproximadamente 4,1. Agita-se à rotemperatura om durante 30 minutos.
   4. Remover o solvente em vácuo. Colocar o resíduo num balão, equipado com um stillhead com uma tubuladura lateral central e paralela. Equipar a central do pescoço com um dedo de arrefecimento e do pescoço lado com uma saída da bomba de vácuo
   5. Aquece-se o resíduo sob pressão reduzida (125 ° C, 0,6 mbar). Periodicamente remover o cloreto de amónio sublimado (visível como revestimento branco da superfície de vidro) a partir do dedo de refrigeração e ainda cabeça, bem como a partir das partes superiores do frasco com um pano ligeiramente molhado. Continuar o processo até que não há formação visível de novo sublimado.
   6. Para remover os vestígios finais de cloreto de amónio lavar o resíduo três vezes com 0,5 ml de metanol quente, respectivamente. Seca-se o resíduo incolor em vácuo. Execute NMR espectroscópica, ²⁵ de massa por espectrometria de ²⁶ e elementares ²⁷ análises.

2. Procedimento Geral Labeling

ATENÇÃO: Todos os exexperi- incluindo contato direto ou indireto com substâncias radioactivas devem ser realizadas apenas por pessoal treinado. Por favor, use equipamento de proteção adequado. Recolher quaisquer resíduos radioactivos separadamente e armazenar e descartar de acordo com os regulamentos válidos.

1. A eluição do gerador
   Nota: A 40 mCi ⁶⁸ Ge / ^68Ga gerador com o nuclido mãe ligado como óxido sobre sílica dodecil-3,4,5-trihydroxybenzoate foi usada. A eluição e a purificação pode ser realizada manualmente ou, como foi o caso no presente processo, tal como um processo automatizado combinada utilizando uma bomba peristáltica e unidade de distribuição.
   1. Preparar soluções de 5,5 M, 1,0 M e ácido clorídrico 0,05 M. Prepara-se uma solução de cloreto de sódio 5,0 M contendo 25 uL de ácido clorídrico 5,5 M por ml. Prepara-se uma solução tampão de pH 4,6 através da combinação de 4,1 g de acetato de sódio, 1 mL de HCl (30%) e 2,5 ml de ácido acético glacial e diluindo a mistura com água até 50 ml.
   2. precondition o PS-H ⁺ cartucho enxaguando-o devagar com 1 ml de ácido clorídrico 1,0 M e, subsequentemente, 5 ml de água.
   3. Elui-se a coluna de sílica do gerador com 4 ml de 0,05 M de HCl. ¹² Carregar o ^68Ga eluato para o PS-H ⁺ cartucho.
   4. Passar o cartucho com 5 ml de água e subsequentemente secá-lo com 5 ml de ar. Eluir a ⁶⁸ Ga a partir do cartucho com 1 ml de 5,0 M de solução de cloreto de sódio acidificada. ²⁸
2. Etiquetagem de EOB-DTPA com ^68Ga
   1. Dissolve-se 1 mg (1,9 umol) de EOB-DTPA em 1 ml de água. A partir desta solução ter 100 uL (0,19 nmol) e diluí-los com 9,9 ml de água para preparar um 19 uM (10 ug / ml) da solução de EOB-DTPA.
   2. Remover 50 pi (equivalentes a 22-29 MBq) da solução contendo ⁶⁸ Ga e colocado num frasco. Adicionam-se 50 ul (0,5 ug) de uma solução de estoque 19 mM de EOB-DTPA e 300 ul óf tampão para elevar o pH a 4,0. Agitar rapidamente e incubar a solução à temperatura ambiente durante 5 min. Retirar uma alíquota de 1-5 ul e colocar a HPLC ou análise TLC.
   3. Realizar a análise por HPLC de rádio em um de fase inversa (RP) C18 ²⁹ Uso da seguinte fase móvel:. A - água ácido trifluoroacético / (99,9% / 0,1%), B - acetonitrilo / ácido trif luoroacético (99,9% / 0,1%), gradiente : 06 min 80% de A → 0% de A (0,5 ml / min), 610 min 0% de A (0,5 ml / min).
   4. Determinar as intensidades dos picos dos sinais de rádio HPLC, como área sob a curva. Calcular o rendimento da marcação de pureza radioquímica (RCP) do traçador como se segue:
      RCP = A _Ga-EOB-DTPA / (A _Ga + A _Ga-EOB-DTPA) ∙ 100%
      A _Ga-EOB-DTPA: área sob a curva de ⁶⁸ Ga [EOB-DTPA]
      A _Ga: área sob a curva de livre ⁶⁸ Ga

Eficiência 3. Rotulagem

1. Realizar procedimentos de rotulagem como descreverd na seção 2. Use uma gama consistente de iniciar a atividade de ⁶⁸ Ga fluido, por exemplo, 22-29 MBq (40-140 ul, dependendo da frescura do eluato).
2. Adicionar a quantidade necessária de solução tampão para ajustar o pH a 3,8-4,0 (40-190 ul, dependendo do volume de fluido ⁶⁸ Ga). Adicionar a quantidade necessária de solução de reserva de ligando (10-70 ul de uma solução a 19 mM).
3. Adicionar as quantidades necessárias de água para ajustar o volume global de cada sonda rotulagem para 1,75 ml. Misturar completamente e deixar a amostra repousar durante 5 min à temperatura ambiente. Realizar análise HPLC como descrito na seção 2 para determinar o rendimento de marcação.
4. Realizar procedimentos de rotulagem com quantidades de ligante entre 0,1 mg e 0,7 mg em intervalos de 0,1 g. Realizar experiências em triplicado para cada concentração de ligando. Calcule o rendimento de média e desvio padrão.

4. Vitro estabilidade na

1. p geralROCEDIMENTO e preparações
   1. Dissolve-se um comprimido de tampão fosfato salino (PBS) em 200 ml de água desionizada para se preparar uma solução stock de PBS com uma concentração de fosfato de 10 mM.
   2. Realizar etiquetagem de 22-29 MBq ^68Ga com 0,5 ml de solução de estoque EOB-DTPA, como descrito na secção 2. Dependendo do volume do eluato ^68Ga, ajustar a quantidade de tampão, como descrito na secção 3. Retirar amostras de solução de rotulagem contendo 6-12 MBq de traçador para realizar medições de estabilidade.
   3. Realizar a análise TLC rádio sobre gel de sílica placas de alumínio revestidas de 80 mm utilizando citrato de sódio 0,1 M aquoso como eluente e analisar as placas com um leitor de radioactividade TLC. ³⁰ Determinar as intensidades dos sinais de TLC como a área sob a curva. Calcula-se a RCP do traçador como se segue:
      RCP = A _Ga-EOB-DTPA / (A _Ga-livre + A _Ga-EOB-DTPA + A _Ga-coloidal) ∙ 100%
      A _Ga-EOB-DTPA: área sob a curva de ⁶⁸ Ga [EOB-DTPA]
      A _Ga-livre: área sob a curva de livre ⁶⁸ Ga
      A _Ga-coloidal: área sob a curva de coloidal ⁶⁸ Ga
   4. Calcule RCP _t / RCP ₀ para cada ponto de tempo. Traçar a RCP assim padronizado vs. diferença de tempo desde o ponto de partida t = 0 min.
      RCP _t = RCP de ⁶⁸ Ga [EOB-DTPA] no ponto de tempo t.
      RCP ₀ = RCP de ⁶⁸ Ga [EOB-DTPA] em t = 0 min.
2. Estabilidade em tampão fosfato salino (A)
   1. A 65 ul de solução de etiquetagem adicionar 150 ul de solução de reserva de PBS e 60 ul de solução de hidróxido de sódio (0,1 M) para elevar o pH para 7,4. Homogeneizar.
   2. Retirar uma alíquota de 1-5 ul para realizar a análise TLC ( 'ponto de partida'). armazenar imediatamente a solução numa incubadora a 37 ° C e remover aliquotas para realizar a análise de cromatografia em camada fina representamAtivE pontos de tempo ao longo de 3 h.
3. Estabilidade no sentido excesso de apo -transferrin em PBS (B)
   1. A 120 ul de solução de etiquetagem adicionar 50 ul de solução de reserva de PBS e 430 ul de uma solução de hidróxido de sódio (0,1 M) para elevar o pH para 7,4. Adicionar 40 ul de uma solução de Apo -transferrin (25 mg / ml). Homogeneizar.
   2. Retirar uma alíquota de 1-5 ul para realizar a análise TLC ( 'ponto de partida'). armazenar imediatamente a solução numa incubadora a 37 ° C e remover aliquotas para realizar a análise de TLC em pontos temporais representativos ao longo de 3 h.
4. Estabilidade no soro humano (C)
   1. A 500 ul de soro humano adicionar 25 ul de solução de etiquetagem e 45 ul de solução de hidróxido de sódio (0,1 M) para elevar o pH para 7,4. Homogeneizar.
   2. Retirar uma alíquota de 1-5 ul para realizar a análise TLC ( 'ponto de partida'). armazenar imediatamente a solução em uma incuBator a 37 ° C e remover aliquotas para realizar a análise de TLC em pontos temporais representativos ao longo de 3 h.

5. Determinação do coeficiente de distribuição LoGD

1. Executar procedimentos de marcação, tal como descrito na secção 2. 50 ul de solução de etiquetagem adicionar 20 ul de solução de reserva de PBS e 170 ul de uma solução de hidróxido de sódio (0,1 M) para elevar o pH para 7,4.
2. Retirar 200 ul a partir dessa solução e colocá-la em um plástico V-frasco. Adicionar 200 ul de n-octanol. Fechar o frasco e agitar com vortex durante 2 min. Em seguida centrifugar a amostra a 1600 xg durante 5 min.
3. Remover triplicatas de 40 ul da fase n -octanol e a fase aquosa cada um e colocá-los em V-frascos separados. Tenha cuidado para não misturar as camadas.
4. Medir a actividade de cada uma das amostras num contador gama bem durante 30 segundos. Para cada amostra imediatamente repetir a medição e duas vezes da mesma calcular a actividade Ᾱ _t significativo em contagens por minuto (cpm). Listar o, assim, ganhou Ᾱ _{t, W1,} Ᾱ _{t, W2} e Ᾱ _{t, W3} (atividades em amostras aquosas) e Ᾱ _{t, O1,} Ᾱ _{t, O2,} Ᾱ _{t, O3} (atividades em n- octanol), juntamente com o respectivo ponto de tempo t de sua determinação.
5. Definir o ponto de tempo da medição da última amostra, tal como t _0. Determinar e listar Dt em min calculando Dt = tt _0. Realizar correcção de decaimento Ᾱ _t, usando a seguinte fórmula:
   Ᾱ ₀ = Ᾱ _T · 2 ^{(Dt / 68 min).}
6. Calcular Ᾱ _{0, W} como a média de Ᾱ _{0, W1,} Ᾱ _{0, W2} e Ᾱ _{0, W3,} bem como Ᾱ _{0, O} como a média de Ᾱ _{0, O1,} Ᾱ _{0, O2} e Ᾱ _{0, O3.} Calcular logD usando a seguinte fórmula:
   logD = log [(Ᾱ _{0, S · 40 ug) / (Ᾱ 0, W · 33 ug)].}
7. Executar toda a experiência em triplicado e calcular a média de logD, juntamente com o seu desvio padrão.

Resultados

O ligando EOB-DTPA e o Ga não radioactivo (III) foram analisados ​​por meio de ¹ H e ¹³ C ^{1 H} espectroscopia de RMN, espectrometria de massa e análise elementar. Os resultados listados na Tabela 1 e ilustrados nas Figuras 1-6 verificar a pureza das substâncias.

A eluição da Ga gerador de ⁶⁸ Ge / ⁶⁸ produziu soluções d...

Discussão

EOB-DTPA é acessível através de uma síntese de múltiplos passos ^33, mas pode muito bem ser isolado a partir de agentes de contraste que contêm ácido disponíveis gadoxético. Para este propósito, o ião central, Gd (III) pode ser precipitado com um excesso de ácido oxálico. Depois de remover o oxalato Gd (III) e ácido oxálico o ligando pode ser isolado por precipitação em água fria a um pH de 1,5. No entanto, a fim de aumentar os rendimentos de cromatografia em coluna do filtrado pode ser reali...

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
primovist	Bayer	-	0.25 M
gallium(III) chloride	Sigma-Aldrich Co.	450898
water (deionized)	-	-	tap water deionizing equipment by Auma-Tec GmbH
hydrochloric acid 12 M	VWR	20252.29
sodium hydroxide	Polskie Odczynniki Chemiczne S.A.	810925429
oxalic acid	Sigma-Aldrich Co.	75688
ethyl acetate	Brenntag GmbH	10010447
silica gel	Merck KGaA	1.10832.9025	Geduran Si 60 0.063-0.2 mm
TLC silica gel 60 F254	Merck KGaA	1.16834.0001
methanol	VWR	20903.55
ethanol	Brenntag GmbH	10018366
eiethylether	VWR	23807.468	stored over KOH plates
ammonia solution (25%)	VWR	1133.1
pH electrode	VWR	662-1657
stirring and heating unit	Heidolph	505-20000-00
pump	Ilmvac GmbH	322002
frit	-	custom design
NMR spectrometer	Bruker Coorporation	-	Ultra Shield 400
mass spectrometer	Thermo Fisher Scientific Inc.	-
elemental analyser	Hekatech GmbH Analysentechnik	-	EuroVector EA 3000 CHNS
deuterated water D2O	euriso-top	D214	99.90% D
Material/Equipment required for labeling procedures
68Ge/68Ga generator	ITG Isotope Technologies Garching GmbH	A150
pump and dispenser system	Scintomics GmbH	-	Variosystem
hydrochloric acid 30% (suprapur)	Merck KGaA	1.00318.1000
water (ultrapur)	Merck KGaA	1.01262.1000
sodium chloride (suprapur)	Merck KGaA	1.06406.0500
sodium acetate (suprapur)	Merck KGaA	1.06264.0050
glacial acetic acid (suprapur)	Merck KGaA	1.00066.0250
sodium citrate dihydrate	VEB Laborchemie Apolda	10782	>98.5%
PS-H+ Cartridge (S)	Macherey-Nagel	731867	Chromafix
apo-Transferrin	Sigma-Aldrich Co.	T2036
PBS buffer (tablets)	Sigma-Aldrich Co.	79382
human serum	Sigma-Aldrich Co.	H4522	from human male AB plasma
flasks, columns, etc.		custom design
pH electrode	Knick Elektronische Messgeräte GmbH & Co. KG	765-Set
binary pump (HPLC)	Hewlett-Packard	G1312A (HP 1100)
UV Vis detector (HPLC)	Hewlett-Packard	G1315A (HP 1100)
radioactive detector (HPLC)	EGRC Berthold
HPLC C-18-PFP column	Advanced Chromatography Technologies Ltd.	ACE-1110-1503/A100528
HPLC glass vials	GTG Glastechnik Graefenroda GmbH	8004-HP-H/i3µ
pipette	Eppendorf	-
plastic vials	Sarstedt AG & Co.	6542.007
plastic vials	Greiner Bio-One International GmbH	717201
activimeter	MED Nuklear-Medizintechnik Dresden GmbH	-	Isomed 2010
tweezers		custom design
incubator	Heraeus Instruments GmbH	51008815
vortex mixer	Fisons	-	Whirlimixer
centrifuge	Heraeus Instruments GmbH	75003360
gamma well counter	MED Nuklear-Medizintechnik Dresden GmbH	-	Isomed 2100
water for chromatography	Merck KGaA	1.15333.2500
acetonitrile for chromatography	Merck KGaA	1.00030.2500
trifluoroacetic acid	Sigma-Aldrich	91707
TLC radioactivity scanner	raytest Isotopenmessgeräte GmbH	B00003875	equipped with beta plastic detector