Enquêtes sur le complexe Ga (III) de EOB-DTPA et son<sup&gt; 68</sup&gt; Ga radiomarqué analogique

Résumé

Une procédure pour l'isolement de EOB-DTPA et complexation ultérieure avec Ga naturel (III) et ⁶⁸ Ga est présenté ici, ainsi que d' une analyse approfondie de tous les composés et les enquêtes sur l' efficacité de l' étiquetage, de la stabilité in vitro et l'octanol / eau coefficient du complexe radiomarqué de distribution.

Résumé

Nous démontrons une méthode pour l'isolement de EOB-DTPA (3,6,9-triaza-3,6,9-tris- (carboxyméthyl) -4- (éthoxybenzyl) d'acide -undecanedioic) de son Gd (III) et les protocoles de la préparation de sa non-radioactive, à savoir, Ga naturel (III), ainsi que radioactifs ⁶⁸ complexes Ga roman. Le ligand, ainsi que la Ga (III) ont été caractérisés par résonance magnétique (RMN) , spectroscopie nucléaire, spectrométrie de masse et analyse élémentaire. ⁶⁸ Ga a été obtenue par un procédé d'élution à partir d' un étalon / ⁶⁸ Ga générateur ⁶⁸ Ge. Des expériences visant à évaluer l'efficacité ⁶⁸ Ga-étiquetage des EOB-DTPA à pH 3,8-4,0 ont été réalisées. Établi des techniques d'analyse de radio CCM (chromatographie sur couche mince) et HPLC radio (chromatographie en phase liquide à haute performance) ont été utilisés pour déterminer la pureté radiochimique du traceur. Comme une première enquête sur le caractère lipophile de ⁶⁸ Ga Traceurs le n- octanol / distributio d'eaun coefficient de ⁶⁸ espèces Ga présentes dans une solution à pH 7,4 a été déterminée par un procédé d'extraction. mesures in vitro de la stabilité du traceur dans divers milieux à pH physiologique ont été effectuées, révélant des taux de décomposition.

Introduction

L' acide Gadoxetic, un nom commun pour le complexe Gd (III) du ligand EOB-DTPA ^1, est un agent de contraste fréquemment utilisé dans l' imagerie hépatobiliaire par résonance magnétique (IRM). ^2,3 En raison de son absorption spécifique par les hépatocytes du foie et un pourcentage élevé de l' excrétion hépatobiliaire elle permet la localisation des lésions focales et des tumeurs hépatiques. ^2-5 Cependant, certaines limites de la technique IRM (par exemple, la toxicité des agents de contraste, applicabilité limitée chez les patients souffrant de claustrophobie ou de métal implants) appel à un outil de diagnostic alternatif .

La tomographie par émission de positons (TEP) est une méthode d'imagerie moléculaire, dans lequel une petite quantité d'une substance radioactive (traceur) est administré, sur lequel sa distribution dans le corps est enregistré par un scanner TEP. ⁶ Le PET est un procédé dynamique qui permet une grande la résolution spatiale et temporelle des images ainsi que la quantification des résultats, sans avoir àtraiter les effets secondaires des agents de contraste IRM. La valeur informative de l'information métabolique obtenu peut être encore accrue par combinaison avec des données anatomiques reçues des méthodes d'imagerie supplémentaires, comme le plus souvent réalisé par imagerie hybride à la tomodensitométrie (CT) dans les scanners TEP / CT.

La structure chimique d'un traceur approprié pour le PET doit comprendre un isotope radioactif servant émetteur de positrons. Les positrons ont une durée de vie courte, car ils annihilent presque immédiatement avec les électrons des coquilles d'atomes de tissu environnant. Par annihilation deux photons gamma 511 keV avec sens inverse de circulation sont émis, qui sont enregistrés par le scanner PET. ^7,8 Pour former un traceur, nucléides PET peuvent être liés de manière covalente à une molécule, comme cela est le cas dans 2-désoxy- 2- ^[18 F] fluoroglucose (FDG), le traceur de TEP les plus largement utilisés. ⁷ Toutefois, un nucléide peut également former des liaisons de coordination à un ou plusieurs des ligands (par exemple ,^[68 Ga] -DOTATOC ^9,10) ou être appliquée sous forme de sels minéraux dissous (par exemple, ^[18 F] fluorure de sodium ^11). Au total, la structure du traceur est cruciale car elle détermine son comportement biodistribution, le métabolisme et l'excrétion.

Un nucléide PET approprié devrait combiner des caractéristiques favorables comme l'énergie de positons pratique et la disponibilité ainsi qu'une demi-vie adéquate pour l'enquête prévue. ⁶⁸ Ga nucléide est devenue une force essentielle dans le domaine du PET au cours des deux dernières décennies. ^12,13 Ceci est principalement dû à sa disponibilité à travers un système de générateur, ce qui permet l' étiquetage sur place indépendamment dans le voisinage d'un cyclotron. Dans un générateur, la mère nucléide ⁶⁸ Ge est absorbée sur une colonne à partir de laquelle la fille nucléide ⁶⁸ Ga est élue et ensuite marqué à un chélateur approprié. ^6,14 Depuis le ⁶⁸ Ga nucléide existe en tant que trivalent cation comme Gd (III) ^10,13, chélateurs EOB-DTPA avec ⁶⁸ Ga à la place donnerait un complexe avec la même charge globale négative que l' acide gadoxetic. Par conséquent, que ⁶⁸ Ga traceur peut combiner une spécificité similaire du foie caractéristique avec l'aptitude à l' imagerie TEP. Bien que l' acide gadoxetic est acheté et administré sous forme de sel disodique, dans le contexte suivant nous allons nous référer à lui comme D.ieu [EOB-DTPA] et au complexe Ga non radioactif (III) comme Ga [EOB-DTPA], ou ⁶⁸ Ga [ EOB-DTPA] dans le cas du composant radiomarqué pour des raisons de commodité.

Pour évaluer leur applicabilité comme traceurs pour le PET, les complexes métalliques radioactifs doivent être examinées en détail dans in vitro, in vivo ou ex vivo des expériences en premier. Pour déterminer l'aptitude à un problème médical respectif, diverses caractéristiques de traçage comme le comportement de biodistribution et le profil de jeu, la stabilité, la spécificité d'organe et cellule ou tissue absorption doivent être étudiées. En raison de leur caractère non invasif, des déterminations in vitro sont souvent effectuées avant les expériences in vivo. Il est généralement admis que DTPA et ses dérivés sont des qualités limitées comme chélateurs pour ⁶⁸ Ga en raison de ces complexes dépourvus d' inertie cinétique, ce qui entraîne une décomposition rapide comparable lorsqu'il est administré in vivo. ^14-20 Ceci est principalement causé par apo- transferrine agissant en tant que concurrent pour ⁶⁸ Ga dans le plasma. Néanmoins, nous avons étudié ce nouveau traceur concernant son application possible dans l' imagerie hépatobiliaire, dans lequel des informations de diagnostic peut être fourni en quelques minutes après l'injection ^3,4,21-23, ce qui ne nécessite pas nécessairement la stabilité du traceur à long terme. A cet effet , nous avons isolé EOB-DTPA à partir d' acide gadoxetic et initialement réalisé la complexation avec Ga naturel (III), qui existe en tant que mélange de deux isotopes stables, ⁶⁹ Ga et ⁷¹ Ga. Le complexe ainsi obtenu a servi en tant que norme non radioactif pour la chélation suivante de ⁶⁸ Ga. Nous avons utilisé des méthodes établies et évalué simultanément leur aptitude à déterminer l'efficacité de ⁶⁸ Galabeling de EOB-DTPA et d'enquêter sur la lipophilie de la nouvelle ⁶⁸ Ga traceur et sa stabilité dans différents médias.

Protocole

1. Préparation de EOB-DTPA et Ga [EOB-DTPA]

Attention: S'il vous plaît consulter toutes les fiches de données de sécurité des matériaux pertinents (MSDS) des solvants organiques, les acides et alcalins utilisés avant utilisation. Effectuez toutes les étapes dans une hotte et utiliser l'équipement de protection individuelle (lunettes de sécurité, gants, blouse de laboratoire).

1. L' isolement de EOB-DTPA à partir d' acide gadoxetic
   1. Mettez 3 ml de 0,25 M solution injectable gadoxetic acide dans un ballon. Ajouter 500 mg (5,6 mmol) d'acide oxalique à la solution agitée.
   2. Après agitation pendant 1 heure, on filtre la suspension à travers un élément fritte en utilisant une pression réduite. Laver le résidu à trois reprises avec 3 ml d'eau, respectivement.
   3. Combinez les filtrats aqueux et équiper la solution avec une électrode de pH. Ajouter l'acide chlorhydrique 12 M au filtrat jusqu'à ce que le pH est environ -0,1.
   4. On élimine le solvant sous vide pour obtenir un résidu incolore. Stocker sous gaz inerte.
   5. Laver le résidu à fond (au moins troisfois) avec de l'acétate d'éthyle pour éliminer l'excès d'acide oxalique. Sécher le résidu sous vide.
   6. Redissoudre le résidu dans 2 ml d'eau à température ambiante, puis refroidir la solution dans un bain de glace. Sans enlever le bain de glace, ajouter 0,5 M d'hydroxyde de sodium aqueux à une solution goutte à goutte jusqu'à la formation d'un solide incolore, on observe gluante.
   7. Retirer l'eau par décantation. On lave les solides deux fois de plus avec 1 ml d'eau froide. Sécher le solide sous vide pour obtenir la première fraction du produit.
   8. Isoler une seconde fraction de produit à partir des fractions combinées de l' eau décantée par Chromatographie sur colonne (silice, méthanol / eau 4/1). ²⁴ On élimine le solvant sous vide.
   9. Si le solide ainsi obtenu est blanc pur, on redissout dans 1 ml d'eau, ajouter 10 ml d'éthanol et ensuite 10 ml d'éther diéthylique pour précipiter le produit. Filtrer à travers un fritte en utilisant une pression réduite et sèche sous vide.
   10. Combinerles deux fractions solides de EOB-DTPA et effectuer RMN spectroscopique, ²⁵ spectrométrie de masse ²⁶ et élémentaires ²⁷ analyses.
2. Synthèse de Ga [EOB-DTPA]
   ATTENTION: Magasin solide Ga (III) le chlorure sous une atmosphère inerte sèche, car au contact de l'air, l'humidité ou la graisse décomposition a lieu, ce qui entraîne des vapeurs corrosives et formation d'impuretés jaunes, brunes ou noires.
   1. Préparer une solution de 0,11 M en dissolvant 1,94 g (11,0 mmol) de Ga (III) chlorure dans 100 ml d'eau. Diluer 1 ml d'une solution aqueuse d'ammoniac à 25% avec 4 ml d'eau.
   2. Dissoudre 80 mg (0,15 mmol) de EOB-DTPA dans un ballon dans 10 ml d'eau. Si nécessaire, chauffer le solvant pour obtenir une dissolution complète.
   3. Ajouter 1,4 ml (0,15 mmol) de la Ga (III) solution de chlorure de stock. Equiper le flacon d'un agitateur et électrode de pH. Ajouter goutte à goutte aqueuse diluée de la solution d'ammoniaque jusqu'à ce que le pH de la solution est d'environ 4,1. Agiter à room température pendant 30 min.
   4. On élimine le solvant sous vide. Placer le résidu dans un flacon, équipé d'une tête de distillation avec un col central et parallèle côté. Équiper le col central avec un doigt de refroidissement et le col latéral avec une sortie de pompe à vide,
   5. Chauffer le résidu sous pression réduite (125 ° C, 0,6 mbar). Retirez régulièrement sublimées chlorure d'ammonium (visible comme revêtement blanc de la surface du verre) du doigt de refroidissement et toujours à la tête, ainsi que des parties supérieures du ballon avec un chiffon légèrement humide. Poursuivre le processus jusqu'à ce qu'il n'y a pas de formation visible de nouveau sublimé.
   6. Pour éliminer les traces finales de chlorure d'ammonium laver le résidu trois fois avec 0,5 ml de méthanol chaud, respectivement. Sécher le résidu incolore sous vide. Effectuer RMN spectroscopique, ²⁵ masse spectrométrique ²⁶ et élémentaires ²⁷ analyses.

2. Procédure générale d'étiquetage

ATTENTION: Tous les exexperiences y compris le contact direct ou indirect avec des substances radioactives doivent être effectuées par du personnel qualifié seulement. S'il vous plaît utiliser l'équipement de protection approprié. Collecter les déchets radioactifs séparément et stocker et éliminer conformément aux réglementations en vigueur.

1. L' élution du générateur
   Note: A 40 mCi ⁶⁸ Ge / ⁶⁸ Ga générateur avec le nucléide mère lié sous forme d' oxyde de silice dodécyl-3,4,5-trihydroxybenzoate a été utilisé. Elution et la purification peuvent être effectués manuellement ou, comme cela a été le cas dans cette procédure, comme un processus automatisé combinée à l'aide d'une pompe péristaltique et l'unité de distribution.
   1. Préparer des solutions de 5,5 M, 1,0 M et de l'acide chlorhydrique 0,05 M. Préparer une solution de 5,0 M de chlorure de sodium contenant 25 pi de 5,5 M d'acide chlorhydrique par ml. Préparer une solution tampon à pH 4,6 en combinant 4,1 g d'acétate de sodium, 1 ml de HCl (30%) et 2,5 ml d'acide acétique glacial et en diluant le mélange avec de l'eau jusqu'à 50 ml.
   2. precondition le PS-H ⁺ cartouche en le rinçant lentement avec 1 ml de 1,0 M d' acide chlorhydrique, puis 5 ml d'eau.
   3. Éluer la colonne de silice du générateur avec 4 ml de 0,05 M de HCl. ¹² Charger le ^68Ga éluat sur ​​le PS-H ⁺ cartouche.
   4. Rincer la cartouche avec 5 ml d'eau et ensuite sécher avec 5 ml d'air. Éluer le ⁶⁸ Ga à partir de la cartouche avec 1 ml de 5,0 M acidifie une solution de chlorure de sodium. ²⁸
2. Étiquetage des EOB-DTPA avec ⁶⁸ Ga
   1. Dissoudre 1 mg (1,9 umol) de EOB-DTPA dans 1 ml d'eau. De cette solution prendre 100 pi (0,19 pmol) et les diluer avec 9,9 ml d'eau pour préparer un 19 uM (10 pg / ml) de solution mère de EOB-DTPA.
   2. Retirer 50 ul (équivalant à 22-29 MBq) de la solution contenant ⁶⁸ Ga et mis dans un flacon. Ajouter 50 pi (0,5 ug) d'une solution mère 19 mM de EOB-DTPA et 300 pi of tampon pour élever le pH à 4,0. Agiter brièvement et incuber la solution à la température ambiante pendant 5 min. Retirer une aliquote de 1-5 ul et mis à HPLC ou analyse par CCM.
   3. Effectuer une analyse HPLC radio sur une phase inversée (RP) C18 colonne ²⁹ Utiliser la phase mobile suivante:. A - eau / acide trifluoroacétique (99,9% / 0,1%), B - acide acétonitrile / trifluoroacétique (99,9% / 0,1%), gradient : 06 min 80% A → 0% de A (0,5 ml / min), 610 min 0% de A (0,5 ml / min).
   4. Déterminer les intensités de pic des signaux radio HPLC comme aire sous la courbe. Calculez le rendement de marquage que la pureté radiochimique (RCP) du traceur comme suit:
      RCP = Une _Ga-EOB-DTPA / (A _Ga + A _Ga-EOB-DTPA) ∙ 100%
      Une _Ga-EOB-DTPA: aire sous la courbe de ⁶⁸ Ga [EOB-DTPA]
      A _Ga: aire sous la courbe de droits ⁶⁸ Ga

3. Étiquetage efficacité

1. Exécuter les procédures d'étiquetage décrired dans la section 2. Utiliser une gamme cohérente de départ activité de ⁶⁸ Ga éluat, par exemple, 22-29 MBq (40-140 ul, en fonction de la fraîcheur de l'éluat).
2. Ajouter la quantité requise de solution tampon pour ajuster le pH à 3,8-4,0 (40-190 ul, en fonction du volume de ⁶⁸ Ga éluat). Ajouter la quantité requise de solution de ligand stock (10-70 pi d'une solution 19 mM).
3. Ajouter les quantités requises d'eau pour régler le volume global de chaque sonde de marquage à 1,75 ml. Bien mélanger et laisser l'échantillon reposer pendant 5 min à température ambiante. Effectuer une analyse HPLC comme décrit dans la section 2 pour déterminer le rendement de l'étiquetage.
4. Exécuter les procédures d'étiquetage avec des quantités de ligand entre 0,1 pg et 0,7 pg par pas de 0,1 pg. Effectuer des expériences en triple pour chaque concentration de ligand. Calculer le rendement moyen et l'écart type.

4. Stabilité in vitro

1. p généralrocédure et préparations
   1. Dissoudre un comprimé de tampon phosphate salin (PBS) dans 200 ml d'eau déminéralisée pour préparer une solution mère de PBS avec une concentration de phosphate de 10 mM.
   2. Effectuer l' étiquetage des 22-29 MBq ⁶⁸ Ga avec 0,5 pi de EOB-DTPA solution mère, comme décrit dans la section 2. En fonction du volume des ⁶⁸ Ga éluat, ajuster la quantité de tampon, tel que décrit dans la section 3. Retirer les échantillons de solution d'étiquetage contenant 6-12 MBq de traceur pour effectuer des mesures de stabilité.
   3. Effectuer une analyse par CCM de radio sur gel de silice 80 mm des plaques d'aluminium revêtues en utilisant du citrate de sodium 0,1 M comme éluant aqueux et d' analyser les plaques avec un scanner de radioactivité CCM. ³⁰ Déterminer les intensités des signaux TLC comme aire sous la courbe. Calculer le RCP du traceur comme suit:
      RCP = Une _Ga-EOB-DTPA / (A _Ga-free + A _Ga-EOB-DTPA + A _{Ga-colloïdal)} ∙ 100%
      Une _Ga-EOB-DTPA: aire sous la courbe de ⁶⁸ Ga [EOB-DTPA]
      Une _Ga-libre: aire sous la courbe de droits ⁶⁸ Ga
      Une _{Ga-colloïdal:} aire sous la courbe de ⁶⁸ Ga colloïdales
   4. Calculer RCP _t / RCP ₀ pour chaque point de temps. Tracer la RCP ainsi normalisée par rapport à la différence de temps depuis le point de départ t = 0 min.
      RCP _t = RCP de ⁶⁸ Ga [EOB-DTPA] au moment t.
      RCP ₀ = RCP de ⁶⁸ Ga [EOB-DTPA] à t = 0 min.
2. La stabilité dans une solution saline tamponnée au phosphate (A)
   1. Pour 65 pi de solution d'étiquetage ajouter 150 pi de PBS solution mère et 60 pi de solution d'hydroxyde de sodium (0,1 M) pour élever le pH à 7,4. Bien mélanger.
   2. Retirer une aliquote de 1-5 pi pour effectuer une analyse TLC ( «point de départ»). stocker immédiatement la solution dans un incubateur à 37 ° C et retirer aliquotes pour effectuer une analyse TLC à représenterative points de temps de plus de 3 heures.
3. Stabilité à l' excès de apo -transferrin dans du PBS (B)
   1. Pour 120 pi de solution d'étiquetage ajouter 50 pi de PBS solution mère et 430 pi de solution d'hydroxyde de sodium (0,1 M) pour élever le pH à 7,4. Ajouter 40 ul d'une solution d'apo -transferrin (25 mg / ml). Bien mélanger.
   2. Retirer une aliquote de 1-5 pi pour effectuer une analyse TLC ( «point de départ»). stocker immédiatement la solution dans un incubateur à 37 ° C et retirer aliquotes pour effectuer une analyse TLC à des moments représentatifs de plus de 3 heures.
4. Stabilité dans le sérum humain (C)
   1. 500 pi de sérum humain, ajouter 25 pi de solution de marquage et de 45 ul d'une solution d'hydroxyde de sodium (0,1 M) pour élever le pH à 7,4. Bien mélanger.
   2. Retirer une aliquote de 1-5 pi pour effectuer une analyse TLC ( «point de départ»). stocker immédiatement la solution dans un incubator à 37 ° C et retirer aliquotes d'effectuer une analyse TLC à des moments représentatifs de plus de 3 heures.

5. Détermination du coefficient de distribution LogD

1. Exécuter les procédures d'étiquetage décrites à la section 2. 50 pi de solution d'étiquetage ajouter 20 pi de PBS solution mère et 170 pi de solution d'hydroxyde de sodium (0,1 M) pour élever le pH à 7,4.
2. Retirer 200 pi de cette solution et le mettre dans un V-flacon en plastique. Ajouter 200 pi de octanol. Fermez le flacon et vortex pendant 2 min. Ensuite, centrifuger l'échantillon à 1 600 g pendant 5 min.
3. Retirer triplicats de 40 ul de la phase n octanol et la phase aqueuse chacun et les mettre dans V-flacons séparés. Veillez à ne pas mélanger les couches.
4. Mesurer l'activité de chaque échantillon dans un compteur gamma à puits pendant 30 sec. Pour chaque échantillon , répéter immédiatement la mesure deux fois et calculer la moyenne de celle - ci l' activité Ᾱ _t en coups par minute (cpm). Énumérer les Ᾱ ainsi gagné _{t, W1,} Ᾱ _{t, W2} et Ᾱ _{t, W3} (activités dans les échantillons aqueux) et Ᾱ _{t, O1,} Ᾱ _{t, O2,} Ᾱ _{t, O3} (activités en octanol) ainsi que le respectif temps t de leur détermination.
5. Définir le point de la mesure du dernier échantillon t ₀ fois. Déterminer et la liste en min At en calculant t = tt _0. Effectuer la correction de désintégration de Ᾱ _t, en utilisant la formule suivante:
   Ᾱ ₀ = Ᾱ _t · 2 ^{(At / 68 min).}
6. Calculer Ᾱ _{0, W} comme la moyenne des Ᾱ _{0, W1,} Ᾱ _{0, 0} Ᾱ _W2 et _W3 ainsi que Ᾱ _{0, O} comme la moyenne des Ᾱ _{0, O1,} Ᾱ _{0, O2} et Ᾱ _{0, O3.} Calculer logD en utilisant la formule suivante:
   logD = log [(Ᾱ _{0, O · 40 ug) / (0 Ᾱ, W · 33 ug)].}
7. Effectuer toute l'expérience en triple et calculer la moyenne logD ainsi que son écart-type.

Résultats

Le ligand EOB-DTPA et du Ga non radioactif (III) ont été analysés par ¹ H et ¹³ C ^{1 H} spectroscopie RMN, spectrométrie de masse et analyse élémentaire. Les résultats figurant au tableau 1 et représentés sur les figures 1-6 vérifier la pureté des substances.

Elution du générateur Ga ⁶⁸ Ge / ⁶⁸ a abouti à des solutio...

Discussion

EOB-DTPA est accessible par une synthèse multi-étape ³³ , mais peut tout aussi bien être isolé disponibles agents de contraste contenant de l' acide gadoxetic. A cet effet, le Gd (III), l'ion central peut être précipité avec un excès d'acide oxalique. Après élimination de Gd (III), l'oxalate et l'acide oxalique le ligand peut être isolé par précipitation dans l'eau froide à un pH de 1,5. Toutefois, afin d'améliorer la Chromatographie du filtrat sur une colonne de ren...

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
primovist	Bayer	-	0.25 M
gallium(III) chloride	Sigma-Aldrich Co.	450898
water (deionized)	-	-	tap water deionizing equipment by Auma-Tec GmbH
hydrochloric acid 12 M	VWR	20252.29
sodium hydroxide	Polskie Odczynniki Chemiczne S.A.	810925429
oxalic acid	Sigma-Aldrich Co.	75688
ethyl acetate	Brenntag GmbH	10010447
silica gel	Merck KGaA	1.10832.9025	Geduran Si 60 0.063-0.2 mm
TLC silica gel 60 F254	Merck KGaA	1.16834.0001
methanol	VWR	20903.55
ethanol	Brenntag GmbH	10018366
eiethylether	VWR	23807.468	stored over KOH plates
ammonia solution (25%)	VWR	1133.1
pH electrode	VWR	662-1657
stirring and heating unit	Heidolph	505-20000-00
pump	Ilmvac GmbH	322002
frit	-	custom design
NMR spectrometer	Bruker Coorporation	-	Ultra Shield 400
mass spectrometer	Thermo Fisher Scientific Inc.	-
elemental analyser	Hekatech GmbH Analysentechnik	-	EuroVector EA 3000 CHNS
deuterated water D2O	euriso-top	D214	99.90% D
Material/Equipment required for labeling procedures
68Ge/68Ga generator	ITG Isotope Technologies Garching GmbH	A150
pump and dispenser system	Scintomics GmbH	-	Variosystem
hydrochloric acid 30% (suprapur)	Merck KGaA	1.00318.1000
water (ultrapur)	Merck KGaA	1.01262.1000
sodium chloride (suprapur)	Merck KGaA	1.06406.0500
sodium acetate (suprapur)	Merck KGaA	1.06264.0050
glacial acetic acid (suprapur)	Merck KGaA	1.00066.0250
sodium citrate dihydrate	VEB Laborchemie Apolda	10782	>98.5%
PS-H+ Cartridge (S)	Macherey-Nagel	731867	Chromafix
apo-Transferrin	Sigma-Aldrich Co.	T2036
PBS buffer (tablets)	Sigma-Aldrich Co.	79382
human serum	Sigma-Aldrich Co.	H4522	from human male AB plasma
flasks, columns, etc.		custom design
pH electrode	Knick Elektronische Messgeräte GmbH & Co. KG	765-Set
binary pump (HPLC)	Hewlett-Packard	G1312A (HP 1100)
UV Vis detector (HPLC)	Hewlett-Packard	G1315A (HP 1100)
radioactive detector (HPLC)	EGRC Berthold
HPLC C-18-PFP column	Advanced Chromatography Technologies Ltd.	ACE-1110-1503/A100528
HPLC glass vials	GTG Glastechnik Graefenroda GmbH	8004-HP-H/i3µ
pipette	Eppendorf	-
plastic vials	Sarstedt AG & Co.	6542.007
plastic vials	Greiner Bio-One International GmbH	717201
activimeter	MED Nuklear-Medizintechnik Dresden GmbH	-	Isomed 2010
tweezers		custom design
incubator	Heraeus Instruments GmbH	51008815
vortex mixer	Fisons	-	Whirlimixer
centrifuge	Heraeus Instruments GmbH	75003360
gamma well counter	MED Nuklear-Medizintechnik Dresden GmbH	-	Isomed 2100
water for chromatography	Merck KGaA	1.15333.2500
acetonitrile for chromatography	Merck KGaA	1.00030.2500
trifluoroacetic acid	Sigma-Aldrich	91707
TLC radioactivity scanner	raytest Isotopenmessgeräte GmbH	B00003875	equipped with beta plastic detector