Bypass gástrico de una anastomosis (OAGB) en ratas

Resumen

Este protocolo es para la realización de bypass gástrico de una anastomosis (OAGB) en rata. El operador realiza una larga y tubular con grapas bolsa gástrica seguida de anastomosis cosida a mano. Para este modelo, el operador reproduce la misma relación entre Biliopancreática y miembro común en los seres humanos; por lo tanto, la rama Biliopancreática mide 35 cm.

Resumen

El objetivo del presente Protocolo es establecer un modelo preclínico de cirugía bariátrica y, más específicamente, la OAGB en ratas obesas. Basado en este modelo preclínico, estudios longitudinales pueden llevarse a cabo para proporcionar una mejor comprensión de los mecanismos subyacentes a los resultados después de cirugía bariátrica en los seres humanos. Para este propósito, las ratas son operadas a través de una laparotomía bajo anestesia general con isoflurano. En primer lugar, el cirujano crea una bolsa gástrica tubular y larga: después de la curva mayor y disección hiatal, estómago nonglandular es con grapas y quitado. Luego, también es con grapas el estómago restante para crear un tubo gástrico y excluir el antro del estómago. Después de eso, el cirujano realiza una simple gastroyeyunostomía fin-a-lado 35 cm desde el ángulo del duodenojejunal. Esta longitud de extremidades ha sido elegida con el fin de reproducir la misma relación entre la rama Biliopancreática (BPL) y longitud de extremidad (CL) común en cirugía bariátrica humana. La operación termina por cierre aponeurótico y cutáneo. El tratamiento postoperatorio temprano consiste en hidratación subcutánea, una inyección intramuscular de antibióticos profiláctica, un parietal inyección de xilocaína, la administración de analgésicos y una reintroducción progresiva de la dieta.

Introducción

La obesidad mórbida es un problema de salud importante en el mundo occidental, con el aumento de la prevalencia¹. Cirugía bariátrica es el tratamiento eficaz a largo plazo sólo para obesidad mórbida², con claros beneficios en comorbilidades relacionadas con la obesidad³. Gástrico Roux-en-Y bypass (BGYR) sigue siendo el estándar de oro ya que es uno de los procedimientos más antiguos y una de las más realizadas en todo el mundo con el más largo de seguimiento⁴. OAGB es un procedimiento más reciente primero descrito en 2001 por Rutledge⁵. Se ha descrito como una alternativa eficaz a bgyr⁶ y tiene algunas ventajas. Primeros datos indican una eficacia similar a bgyr con respecto a la pérdida de peso y la resolución de comorbilidades relacionadas con la obesidad^6,7. Además, se evita los riesgos de la estenosis o la fuga de la anastomosis de jejunojejunal en bgyr y el riesgo de una hernia interna puede ser menor que con bgyr⁸.

Los mecanismos fisiológicos subyacentes a la pérdida de peso tras cirugía bariátrica siguen siendo polémicos y pueden ser difíciles de estudiar en los seres humanos⁹. Los modelos animales son útiles para entender cirugías bariátricas cómo puede afectar el metabolismo de la glucosa, las alteraciones neuroendocrinas y mecanismos de saciedad. Se carecen de datos comparativos entre los procedimientos y efectos a largo plazo de estas cirugías deben ser mejor entendidas¹⁰. No es posible estandarizar completamente cuidado clínico pre y postoperatorio y seguimiento satisfactorio puede ser difícil de alcanzar: algunos estudios Informe pérdida-de-seguimiento de precios tan alta como 30% para el primer año¹¹.

El concepto de bypass gástrico es una combinación de un procedimiento restrictivo, debido a la creación de una bolsa gástrica y un grado moderado de malabsorción, resultante de la exclusión del duodeno y el yeyuno proximal del tránsito gastrointestinal. Actualmente, longitud de la extremidad en cirugía bariátrica es todavía una cuestión de debate^12,13. Datos disponibles muestran que una gran variabilidad de procedimientos y ningún consenso todavía ha alcanzado la longitud óptima del miembro por la OAGB^14,15. Sin embargo, muchos autores han divulgado una longitud de 200 cm BPL como el estándar para la OAGB^16,17,18. La longitud promedio del intestino es de unos 700 cm¹⁹.

Se han desarrollado varios modelos de roedores de bgyr mundial²⁰, con grandes variaciones en cuanto a tamaño de la bolsa, longitud de la extremidad y la preservación del nervio vagal. Pero muy pocos autores informaron un modelo de experimental OAGB; por esta razón, theresearch equipo desarrolló un modelo de OAGB en colaboración con los cirujanos bariátricos. La lógica detrás del desarrollo del modelo era imitar bypass gástrico practicado en seres humanos. El modelo incorpora la construcción de una bolsa gástrica con la exclusión del antro y el cuerpo del estómago. Para él, el cirujano realiza una ablación del estómago nonglandular utilizando un dispositivo de grapado. En comparación con un anterior protocolo²⁰, el equipo decidido añadir un tratamiento antibiótico profiláctico per-operatorio para disminuir la morbilidad vinculada a anastomosis gastrointestinal, como es de rutina en cirugía humana²¹.

La longitud de la extremidad de rata utilizada en este modelo fue elegida para reproducir la relación de la BPL y el CL en los seres humanos. Las mediciones preliminares han demostrado la longitud total del intestino pequeño en ratas entre 90 y 120 cm²². Por lo tanto, la longitud de la BPL para OAGB fue de 35 cm. Además, este modelo es posible sin hacer cualquier ligadura vascular, evitando la isquemia de la bolsa gástrica.

Protocolo

Todo el uso animal se ajustó a las directrices de la Comunidad Europea y fue aprobado por el Comité de ética local (Comité d'éthique en expérimentation animale N ° 121) y el Ministerio de educación superior y la investigación (Ref #02285.03).

1. los animales y las dietas

1. Ratas
   1. Utilizar ratas Wistar macho pesa 260-320 g, iniciado en una dieta alta en grasas (HFD) 7 semanas de edad.
2. Dieta
   1. Inducir una obesidad inducida por dieta, por lo menos 12 semanas preoperatorias de la HFD. Dar a las ratas acceso libre al agua y el HFD.
      Nota: El HFD consiste en una dieta de roedores de hipercalórico de laboratorio purificado que contiene 45% de grasa (véase Tabla de materiales).
   2. Asegúrese de que las ratas son obesas en el momento de la cirugía, con un peso de entre 600-800 g.

2. material

1. Equipo quirúrgico
   1. Autoclave de los instrumentos quirúrgicos antes de la cirugía.
   2. Colocar todos los instrumentos quirúrgicos necesarios para el procedimiento (véase Tabla de materiales).
   3. Realizar la anastomosis con lupas, utilizando instrumentos convencionales y microcirugía.
   4. Asegúrese de que las ratas son colocadas en la placa de calentamiento a una temperatura de 37 ° C y bajo una lámpara de calor. Coloque el tablero eléctrico isotérmico según sea necesario.
2. Preparación anestesia y animal
   1. Anestesiar la rata con una inhalación de 3% vol isoflurano en aire para la inducción de la anestesia en el cuadro de roedor.
   2. La rata de transferencia en la placa de calentamiento y mantener la anestesia con la mascarilla a la misma velocidad de flujo del 3%. Asegúrese de que la anestesia es completa por pellizcar la cola del animal.
   3. Afeitarse la piel anterior, correspondiente a la zona de incisión de la laparotomía, una ~ 3 cm-zona amplia de la xifoides a la pelvis de animal, use una afeitadora eléctrica.
   4. Afeitarse una zona de 3 cm de ancho en la parte posterior del animal, centrada en el cuello del animal. Este paso facilita la conducción de energía monopolar.
   5. Rociar una solución desinfectante a base de alcohol sobre el sitio de la operación.

3. cirugía

1. Laparotomía
   1. Aplicar antiséptico local a base de alcohol sobre la piel afeitada.
   2. Abrir el abdomen con una incisión cutánea de la línea media del proceso del xiphoid de unos 3 cm de longitud con un bisturí. Abrir la fascia y peritoneo a lo largo de la linea alba con bisturí monopolar.
   3. Asegúrese de que la cavidad peritoneal se abre en toda la longitud de la incisión cutánea.
      Exponer la cavidad peritoneal con un retractor por cuenta propia.
2. Curva superior y disección hiatal
   1. Diseccionar la curva mayor gástrica de la unión entre el estómago glandular y nonglandular a la izquierda del esófago abdominal con tijeras quirúrgicas.
   2. Progresivamente coagular los vasos gastrosplénico con el bisturí monopolar, para liberar completamente la gran curva gástrica del ángulo. Luego exponer la zona hiatal por seccionamiento de ligamentos finos.
   3. Disecar el lado derecho del esófago abdominal, preservando la arteria gástrica izquierda y el nervio vago, usando un disector de manual.
3. Confección de la bolsa gástrica
   1. Ablación del estómago nonglandular
      1. Aplicar una grapa de 35 m m arma (véase Tabla de materiales) en la unión entre el estómago glandular y nonglandular a la izquierda de la ensambladura gastroesofágica. Asegúrese de que el estómago nonglandular está en el lado derecho de la grapadora.
      2. El arma de fuego y sacar el estómago resecado nonglandular.
   2. Bolsa gástrica
      1. Aplican a una grapadora segundo usando un thoraco-abdominal (TA) dispositivo (3-3,5 mm) (véase Tabla de materiales), paralelo al grapado de primera, en el lado derecho de la unión gastroesofágica para excluir el antro y una parte del cuerpo del estómago.
      2. Asegúrese de que el resultado de las dos líneas de grapas es una bolsa gástrica de alrededor de 0,5 cm de ancho.
4. OAGB
   1. Medición de intestino
      1. Localizar el ángulo del duodenojejunal. El yeyuno proximal es la porción de intestino situada debajo de la porción medial del colon; es la parte sólo estáticos del intestino de la rata.
      2. Con una cinta de 5 cm de largo, manualmente mida 35 cm desde el ángulo del duodenojejunal. Realizar un enterotomías punctiform del lado saculaciones del yeyuno.
   2. Anastomosis gastroyeyunal
      1. Realizar un gastrotomy puntiforme con bisturí monopolar en la mayor parte de la curva de la bolsa gástrica, precisamente entre los dos anteriores líneas de la grapa. Si la bolsa gástrica no está totalmente vacío, realizar presión manual suave en la bolsa gástrica para vaciarla.
      2. Realizar una anastomosis gastroyeyunal fin-a-lado con pinzas nontraumatic y un pequeño soporte de la aguja.
      3. Iniciar la sutura con dos puntos de la extremidad del polipropileno isotáctico de 7-0 (véase Tabla de materiales), sutura de las dos extremidades de la gastrotomy con las extremidades de las enterotomías.
      4. Luego, con el mismo hilos utilizados para las puntadas de dos extremidades, realizar dos suturas corrientes a cada lado de la anastomosis. Si es necesario, volver a la anastomosis para facilitar la maniobra. Asegurar la calidad de la anastomosis colocando cerca de puntos de sutura, por lo menos siete u ocho en cada lado de la anastomosis.
      5. Tomar 1 serosa mm de ancho en cada puntada. Evite tomar cualquier mucosa en la puntada para enterrar suavemente la mucosa gástrica y entérica dentro de la sutura.
         Nota: El resultado es una anastomosis gastroyeyunal de terminolateral con una rama Biliopancreática de la izquierda y una alimenticia /CL (AL) a la derecha. Asegurar que la anastomosis es permeable con una ligera presión en la bolsa gástrica.
5. Cierre y atención inmediata
   1. Enjuague de la cavidad peritoneal con solución de NaCl al 0,9% y manualmente cambiar los órganos abdominales en su posición fisiológica.
   2. Cerrar la pared abdominal con una sutura corriente de trenzado sutura de poliéster 2-0 (véase Tabla de materiales) con un soporte clásico de la aguja.
   3. Cierre la piel con una sutura corriente de 4-0 del polyglactin 910 (véase Tabla de materiales).
   4. Realizar dos inyecciones parietales de lidocaína 1% a cada lado de la laparotomía. Administrar una dosis total de 1 mL/kg de lidocaína 1% en la aponeurosis del músculo abdominal recto.

4. posoperatorio cuidado

1. Realizar una inyección intramuscular de 20.000 unidades/kg penicilina G.
2. Realizar una inyección subcutánea de 10 mL de potasio de la solución isotónica polyionic (2 g de KCl/L, 4 g de NaCl/L y 50 g de glucosa/L). En esta inyección, es posible mezclar con analgésicos adecuados tales como buprenorfina (0.1 mg/kg) y meloxicam (2 mg/kg).
3. Coloca las ratas en jaulas individuales, calentados por una lámpara hasta que estén completamente despiertos.
4. Inspeccione con frecuencia los animales con el fin de administrar el tratamiento postoperatorio con adecuada analgesia e hidratación (solución isotónica polyionic).
5. Inyectar analgésico adecuado, buprenorfina (0.1 mg/kg) y meloxicam (2 mg/kg) por vía subcutánea desde el inmediato postoperatorio período hasta el día 4, cada 12 h.
6. Mantener a las ratas con acceso libre al agua durante el día 1. Día 2/3, dan ellos libre acceso a una dieta líquida. El día 4, darles acceso ad libitum a una dieta normal.

Resultados

Este protocolo es reproducible e imita OAGB como se practica en los seres humanos. La seguridad de este protocolo es compatible con datos publicados^23,24 con una tasa de mortalidad baja entre 12% y 25%. Diferentes cirujanos en el equipo de investigación con una tasa de mortalidad similar han practicado este protocolo.

Sin embargo, cirugía roedores aprendizaje es comple...

Discusión

Este protocolo tiene la ventaja de mímico OAGB practica rutinariamente en los seres humanos. Su seguridad y reproducibilidad en ratas han demostrado en los resultados clínicos y metabólicos.

La anastomosis en este protocolo representa una dificultad técnica y es el principal paso crítico. Para ello, es necesario utilizar herramientas específicas de microcirugía, un Portaagujas de microcirugía como lupas. Para realizar una anastomosis hermética sin cualquier estenosis, es necesario rea...

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
High-Fat Diet, 45 % fat	Genestil, Royaucourt, France	C 1090-45	http://www.genestil.com/
Metzenbaum Scissors	World Precision instrument, Sarasota, US	501739	https://www.wpi-europe.com
Dumont Tweezers	World Precision instrument, Sarasota, US	14098	https://www.wpi-europe.com
Iris Forceps	World Precision instrument, Sarasota, US	15915	https://www.wpi-europe.com
Iris Scissors 10cm	World Precision instrument, Sarasota, US	14218	https://www.wpi-europe.com
Needle Holder	World Precision instrument, Sarasota, US	14110	https://www.wpi-europe.com
Alm Self Retaining Retractor	World Precision instrument, Sarasota, US	14240	https://www.wpi-europe.com
Baby Mixter Hemostatic Forceps,  Right Angle	World Precision instrument, Sarasota, US	501240	https://www.wpi-europe.com
Non woven sterile swabs	LCH Medical Products, Paris, France	SN40-0755	www.lch-medical.com
Galilean Binocular Loupe 2.5x	World Precision instrument, Sarasota, US	504056	https://www.wpi-europe.com
Digestive thread: Isotactic polypropylene, monofil Prolene 7-0	Ethicon, Issy les  Moulineaux, France	EH7813E	www.ethicon.com
Parietal thread : Coated Braided Polyester Ti-Cron 2-0	Covidien, Mannsfield, MA, USA	3003-52	www.covidien.com
Cutaneous thread : Polyglactin, VICRYL RAPIDE 4-0	Ethicon, Issy les  Moulineaux, France	VR3100	www.ethicon.com
ETS-Flex 35- mm staple gun	Ethicon, Issy les  Moulineaux, France	ATS45	www.ethicon.com
Proximate Reloadable Staplers	Ethicon, Issy les  Moulineaux, France	XR30V	www.ethicon.com
TA-DST 30mm-3.5mm	Ethicon, Issy les  Moulineaux, France	TX30B	www.ethicon.com
Alcoholic 5% Betadine	MEDA Pharma, Merignac, France	41085	www.medapharma.fr
LIDOCAINE AGUETTANT 20 mg/ml	LABORATOIRE AGUETTANT, Lyon, France	3400940000000.0	https://www.aguettant.fr
Penicillin G 5MUI	Panpharma, Luitre, France	3.40E+12	https://www.panpharma.eu/fr
Bionolyte G5 ; Sodium chloride 0.4%, glucose 5%, potassium chloride 0.2%)	Baxter, Maurepas, France
Liquid diet	Genestil, Royaucourt, France	C-0200T	http://www.genestil.com/
Isoflurane 100%	Centravet, Plancoet, France	ISO007	http://cooperative.centravet.net