Un ensayo rápido de preferencia alimentaria en Drosophila

Resumen

Presentamos un protocolo para un ensayo de alimentación de dos opciones para moscas. Este ensayo de alimentación es rápido y fácil de ejecutar y es adecuado no sólo para la investigación de laboratorio a pequeña escala, sino también para pantallas de comportamiento de alto rendimiento en moscas.

Resumen

Para seleccionar alimentos con valor nutricional evitando al mismo tiempo el consumo de agentes dañinos, los animales necesitan un sistema de sabor sofisticado y robusto para evaluar su entorno alimentario. La mosca de la fruta, Drosophila melanogaster, es un organismo modelo genéticamente tractable que se utiliza ampliamente para descifrar los fundamentos moleculares, celulares y neuronales de la preferencia alimentaria. Para analizar la preferencia de los alimentos con mosca, se necesita un método de alimentación robusto. Aquí se describe un ensayo de alimentación de dos opciones, que es riguroso, que ahorra costos y es rápido. El ensayo es a base de placa de Petri e implica la adición de dos alimentos diferentes complementados con tinte azul o rojo a las dos mitades del plato. A continuación, ~ 70 precediendo, 2-4 días de edad moscas se colocan en el plato y se les permite elegir entre alimentos azules y rojos en la oscuridad durante unos 90 minutos. El examen del abdomen de cada mosca es seguido por el cálculo del índice de preferencias. A diferencia de las placas multiwell, cada placa Petri toma sólo ~ 20 s para llenar y ahorra tiempo y esfuerzo. Este ensayo de alimentación se puede emplear para determinar rápidamente si a las moscas les gusta o no un alimento en particular.

Introducción

A pesar de las diferencias dramáticas en la estructura anatómica de los órganos gustativos entre moscas y mamíferos, las respuestas conductuales de las moscas a muchas sustancias tástricas son sorprendentemente similares a las de los mamíferos. Por ejemplo, las moscas prefieren el azúcar^{1,2,3,4,5,6,7,8,}aminoácidos^9,10y baja sal^1....

Protocolo

1. Montaje de las cámaras de ensayo

NOTA: Si bien este protocolo describe el uso de una placa Petri de 35 mm(Figura 1A),el efecto deseado se puede lograr utilizando cualquier recipiente estanco y de fondo liso que pueda ser bisectado y cubierto.

1. En primer lugar, bisect una placa Petri tapada de 35 mm fijando una longitud de plástico (5 mm de ancho y 3 mm de altura) por la línea media con adhesivo impermeable, formando dos compartimentos estancos. Confirme que el sello está completo para evitar fugas que puedan llevar a la mezcla de los dos sustratos alimentarios que se están probando.
   NOTA: Después....

Resultados

En este ensayo, un plato de 35 mm se dividió en dos compartimentos de alimentación iguales, con cada mitad del plato que contenía alimentos agarose junto con tinte azul o rojo(Figura 1A). Para excluir el sesgo de tinte, las concentraciones de tinte azul y rojo se refinaron cuidadosamente para producir un PI aproximado "0" cuando sólo se añadieron estos dos tintes (Figura 1B). Una vez que la placa de Petri fue cargada con alimentos probados, ~ 70 moscas adul.......

Discusión

Este método implica varios pasos cruciales donde pueden producirse problemas. En primer lugar, asegúrese de que las moscas ingieren una cantidad suficiente de alimentos para proporcionar datos estables. Si las moscas comen mal, asegúrese de que las moscas hayan estado hambrientas durante al menos 24 h, y que el medio experimental contenga al menos una concentración mínima de sacarosa (2 mM). Para estimular aún más el consumo de alimentos, prolongue el período de inanición húmeda más allá de las 24 h, dependie.......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
35 mm Petri dish	Fisher Scientific	08-772E
Agarose	Thomas Scientific	C756P56
Clear adhesive	Fisher Scientific	NC9884114
Conical centrifuge tubes	Fisher Scientific	05-527-90
Dissection microscope	Amscope	SM-2T-6WB-V331
FCF Brilliant Blue	Wako Chemical	3844-45-9
Fly CO2 anesthesia setup	Genesee Scientfic	59-114/54-104M
Fly incubator with programmable day/night cycle	Powers Scientific Inc.	IS33SD
Fly lines
Glass dish (microwave-safe)
Kimwipes	Fisher Scientific	06-666A
Media storage bottle	Fisher Scientific	50-192-9998
Plastic divider cut to fit the dish from a sheet no thicker than 5 mm
Plastic fly vials	Genesee Scientific	32-116
Sucrose	Millipore Sigma	S9378
Sulforhodamine B	Millipore Sigma	S9012
Tastant compound of interest
Vortex mixer	Benchmark Scientific	BV1000
Water bath	Fisher Scientific	FSGPD05