Быстрый продовольственно-преференциальный анализ в Дрозофиле

Резюме

Представляем протокол для анализа кормления мух по два выбора. Это кормление анализ быстро и легко работать и подходит не только для небольших лабораторных исследований, но и для высокой пропускной способности поведенческих экранов у мух.

Аннотация

Чтобы выбрать пищу с питательной ценностью, избегая при этом потребления вредных веществ, животные нуждаются в сложной и надежной системе вкуса для оценки их пищевой среды. Плодовая муха, Drosophila меланогастер, является генетически урочищенных модель организма, который широко используется для расшифровки молекулярных, клеточных и нейронных основ пищевых предпочтений. Для анализа предпочтений мухи питания необходим надежный метод кормления. Описано здесь два выбора кормления анализ, который является строгим, экономия средств, и быстро. Анализ на основе Петри-блюдо и включает в себя добавление двух различных продуктов, дополненных синим или красным красителем на две половинки блюда. Затем, 70 фунтов стерлингов prestarved, 2-4-дневные мухи помещаются в блюдо и разрешено выбирать между синими и красными продуктами в темноте около 90 минут. Изучение брюшной полости каждой мухи сопровождается расчетом индекса предпочтений. В отличие от многоэлеберных пластин, каждое блюдо Петри занимает всего 20 с, чтобы заполнить и экономит время и усилия. Это кормление анализ может быть использован для быстрого определения того, мухи, как или не нравится конкретной пищи.

Введение

Несмотря на значительные различия в анатомической структуре вкусовых органов между мухами и млекопитающими, поведенческие реакции мух на многие вкусные вещества поразительно похожи на реакцию млекопитающих. Например, мухи предпочитают^{сахар 1,2,3,4,5,6,7,8,аминокислоты 9,10и}низкую соль^11,которые указывают на питательные вещества, но

протокол

1. Сборка камер анализа

ПРИМЕЧАНИЕ: В то время как этот протокол описывает использование 35 мм чашки Петри(рисунок 1A), желаемый эффект может быть достигнут с помощью любого водонепроницаемого, гладкого дна судна, которые могут быть разделены и покрыты.

1. Во-первых, раздекните крышкой 35 мм чашку Петри, зафиксировав длину пластика (5 мм в ширину и 3 мм в высоту) вниз по средней линии с водонепроницаемым клеем, образуя два водонепроницаемых отсека. Подтвердите, что уплотнение завершено, чтобы избежать утечки, которая может привести к смешиванию двух пищевых субстратов время анализа.
   ПРИМЕЧАНИЕ: После ....

Результаты

В этом анализе, 35 мм блюдо было разделено на два равных отсеков кормления, с каждой половиной блюдо, содержащее пищу агарозы в сочетании с синим или красным красителем (Рисунок 1A). Чтобы исключить необъективность красителя, концентрации синего и красного красителей были .......

Обсуждение

Этот метод включает в себя несколько важных шагов, где проблемы могут возникнуть. Во-первых, убедитесь, что мухи ingest достаточное количество пищи, чтобы обеспечить стабильные данные. Если мухи едят плохо, убедитесь, что мухи были мокрые голодали, по крайней мере 24 ч, и что экспериментальны.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
35 mm Petri dish	Fisher Scientific	08-772E
Agarose	Thomas Scientific	C756P56
Clear adhesive	Fisher Scientific	NC9884114
Conical centrifuge tubes	Fisher Scientific	05-527-90
Dissection microscope	Amscope	SM-2T-6WB-V331
FCF Brilliant Blue	Wako Chemical	3844-45-9
Fly CO2 anesthesia setup	Genesee Scientfic	59-114/54-104M
Fly incubator with programmable day/night cycle	Powers Scientific Inc.	IS33SD
Fly lines
Glass dish (microwave-safe)
Kimwipes	Fisher Scientific	06-666A
Media storage bottle	Fisher Scientific	50-192-9998
Plastic divider cut to fit the dish from a sheet no thicker than 5 mm
Plastic fly vials	Genesee Scientific	32-116
Sucrose	Millipore Sigma	S9378
Sulforhodamine B	Millipore Sigma	S9012
Tastant compound of interest
Vortex mixer	Benchmark Scientific	BV1000
Water bath	Fisher Scientific	FSGPD05