JoVE Logo
저자
연락처

로그인

JoVE 비디오를 활용하시려면 도서관을 통한 기관 구독이 필요합니다. 전체 비디오를 보시려면 로그인하거나 무료 트라이얼을 시작하세요.

기사 소개

  • 요약
  • 초록
  • 서문
  • 프로토콜
  • 결과
  • 토론
  • 공개
  • 감사의 말
  • 자료
  • 참고문헌
  • 재인쇄 및 허가

요약

우리는 파리에 대한 두 선택 먹이 분석에 대한 프로토콜을 제시한다. 이 수유 분석은 빠르고 실행하기 쉬우며 소규모 실험실 연구뿐만 아니라 파리의 고처리량 행동 스크린에도 적합합니다.

초록

유해 한 에이전트의 소비를 피하면서 영양가가있는 음식을 선택하려면 동물은 식품 환경을 평가하기 위해 정교하고 견고한 맛 시스템이 필요합니다. 과일 파리, Drosophila 멜라노가스터,널리 음식 취향의 분자, 세포, 신경 기초를 해독하는 데 사용되는 유전 적 인 기관 모델 유기체입니다. 플라이 푸드 선호도를 분석하려면 강력한 급식 방법이 필요합니다. 여기에 설명된 2가지 선택 식용 분석은 엄격하고 비용 절감적이며 빠릅니다. 분석법은 페트리 접시에 기반을 두고 있으며, 요리의 두 반쪽에 파란색 또는 빨간색 염료로 보충된 두 가지 식품을 첨가하는 것을 포함합니다. 그런 다음~ 70개의 프리스타드, 2-4일 된 파리를 접시에 넣고 어둠 속에서 파란색과 붉은 음식 중에서 약 90분 동안 선택할 수 있습니다. 각 비행의 복부에 대한 검사다음에는 기본 설정 지수의 계산이 뒤따릅니다. 멀티웰 플레이트와는 달리, 각 페트리 요리는 채우기 위해 ~ 20 s만 소요되며 시간과 노력을 절약합니다. 이 수유 분석은 파리가 특정 음식을 좋아하거나 싫어하는지 여부를 신속하게 결정하기 위해 사용될 수 있습니다.

서문

파리와 포유류 사이의 맛 기관의 해부학 적 구조에 극적인 차이에도 불구하고, 많은 맛 물질에 대한 파리의 행동 반응은 포유류와 현저하게 유사합니다. 예를 들어, 파리는 설탕1,2,3,4,5,6,7,8,아미노산9,10, 및저염(11)을선호하며, 이는 영양소를 나타내지만, 쓴식품(12,13,14,15)을 거부한다. 지난 2년 동안 파리는 맛감각과 음식 소비와 관련된 많은 근본적인 질문에 대한 이해를 증진시키는 매우 귀중한 모델 유기체로 입증되었으며, 여기에는 맛 의 검출, 미각 감연, 미각 가소성, 먹이 조절16,17,18,19,20. 놀랍게도, 많은 연구는 맛 인식의 근본적인 맛 변환 및 신경 회로 메커니즘이 과일 파리와 포유동물 사이에 유사하다는 것을 보여주었습니다. 따라서 과일 파리는 이상적인 실험 유기체 역할을하므로 연구자들은 동물 왕국에서 식품 탐지 및 소비를 제어하는 진화적으로 보존된 개념과 원칙을 발견할 수 있습니다.

파리의 맛 감각을 조사하기 위해 식품 선호도를 객관적으로 측정하기 위해 빠르고 엄격한 분석서를 설정하는 것이 중요합니다. 수년에 걸쳐 다양한 먹이 방법,염료 계분석제(11,12,13,21,22,23,플라이 프로보시스 연장 응답 분석24,모세관 피더(CAFE) 분석25,26,플라이리액트-푸드 상호작용카운터(FLIC)분석27및 기타 조합방법은28,29,30,31의과일 사료에 대한 식품 선호도 및/또는 식품 섭취를 정량적으로 측정하기 위해 개발되었다. 인기 있는 급식 패러다임 중 하나는 다중웰 마이크로티터플레이트(12,21,32)를 이용한 염료 계 의 2선택 먹이 분석체이며, 여기에 설명된 바와 같이, 작은 페트리접시(11,22)를 먹이챔버로 한다. 이 분석은 플라이의 복부의 투명성을 기반으로 설계되었습니다. 이 분석 하는 동안, 파리 먹이 챔버에 배치 하 고 붉은 염료 또는 블루 염료와 혼합 된 두 가지 음식 옵션 제시. 분석이 완료되면, 비행 복부는 그들이 소비 한 음식에 따라 빨간색 또는 파란색 나타납니다.

페트리 접시와 멀티웰 플레이트 염료 기반 공급 에세이는 매우 견고하며 거의 동일한 결과를 얻을 수 있습니다. 이 두 가지 애서를 사용하여 음식 맛과 음식 질감을 감지하는 매우 다양한 수용체 및 세포를 해독하는 방향으로 많은 중요한 발견과 돌파구가 만들어졌습니다11,12,21,22,32,33. 염료 기반 분석에서 상당한 시간과 노력이 필요한 실험 단계는 음식을 먹이실에 준비하고 적재하는 것입니다. 식품 준비 및 적재 시간을 줄이기 위해 이 분석은 멀티웰 마이크로티터 플레이트를 두 개의 동일한 구획으로 나누어 작은 페트리 접시로 대체하여 수정되었습니다. 페트리 접시 기반 분석에서 파란색 또는 빨간색 염료로 보충된 두 가지 식품이 요리의 두 반쪽에 추가됩니다. 그런 다음~ 70개의 프리스타드, 2-4일 된 파리를 접시에 넣고 어둠 속에서 파란색과 붉은 음식 중에서 약 90분 동안 선택할 수 있습니다. 각 플라이의 복부를 검사하고 기본 설정 지수(PI)가 계산됩니다.

페트리 접시를 기반으로 하는 2가지 식용 분석지는 저렴하고 간단하며 빠릅니다. 하나의 멀티웰 플레이트는 채우기 위해 약 110s가 필요한 반면, 각 페트리 요리는 ~20s만 소요됩니다. 또한, 멀티웰 플레이트는 소량의 음식을 소량의 작은 우물(예: 접시당 60개 이상의 우물)으로 파이프팅해야 하며, 이는 상당한 정밀도와 주의를 필요로 합니다. 반대로 페트리 접시 기반 분석법은 접시당 두 가지 작업만 필요합니다. 먹이 분석이 많은 수의 복제를 포함할 수 있기 때문에 페트리 접시 기반 분석은 사소한 시간과 노력을 절약합니다. 이 분석은 다중웰 기반 분석기의 것과 동등한 결과를 제공하며 소금 맛코딩(11),식품체험(22)에의해 변형된 맛 가소성, 식품 감도감각(33)의분자 기초 등 맛 감각에 대한 많은 근본적인 질문을 해결하는 데 성공한 것으로 입증되었습니다. 요약하면, 이 페트리 접시 기반의 두 선택 분석은 파리가 적절한 먹이 행동을 유도하기 위해 외부 및 내부 영양소 milieus를 인식하는 방법을 조사하는 강력한 도구입니다.

프로토콜

1. 분석 챔버 조립

참고: 이 프로토콜은 35mm 페트리접시(그림 1A)의사용을 설명하지만, 양분및 커버할 수 있는 방수, 매끄러운 바닥 의 용기를 사용하여 원하는 효과를 얻을 수 있다.

  1. 먼저, 방수 접착제로 미드라인 아래로 플라스틱 길이(너비 5mm, 높이 3mm)를 고정하여 뚜껑이 달린 35mm 페트리 접시를 양분하여 두 개의 방수 구획을 형성합니다. 두 식품 기판의 혼합으로 이어질 수있는 누출을 피하기 위해 씰이 완료되었음을 확인합니다.
    참고 : 조립 후, 씰이 보유하는 한이 장치를 다시 사용합니다.

2. 기아 바이알 준비

  1. 빈 플라스틱 플라이 바이알의 충분한 수를 준비; 그런 다음 바닥에 티슈 페이퍼 를 느슨하게 압축합니다. 티슈 페이퍼를 압축하여 공간을 채울 수 있지만 조밀한 질량을 형성할 수는 없습니다.
    참고: 이 갇혀 점점 파리로 이어질 수 있기 때문에 조직에 깊은 틈새 또는 주름이 없는지 확인하십시오.
  2. 조직이 완전히 포화되도록 바이알에 ~ 3 mL 순수 물을 추가하지만 서있는 물은 없습니다. 유리병 벽에 는 과도한 물방울이 없는지 확인하십시오. 또는, 각 빈 유리병에 1%의 아가로즈5mL을 추가하고 아가로즈가 실온에서 고화할 수 있도록 하여 1%w/v agar 용액(자당 없이)을 준비하여 젖은 종이에 아가로즈를 대체한다.

3. 실험 전에 파리의 젖은 기아

  1. 실험 시간 24시간 전에 기아를 시작합니다. CO2 마취하에서 ~ 70, 2-4 일 된 분류 그룹은 준비 된 기아 바이알로 날아 들어각 유리병에 유전자형과 기아 시간을 표시합니다.

4. 시약 설정

  1. 염료 준비
    참고: 실험을 수행하기 전에 예비 제어 분석을 수행하여 사용할 빨간색 및 파란색 염료의 정확한 농도를 결정하는 것이 중요합니다.
    1. 대조군 분석의 경우 각 염료에 대한 다양한 희석을 준비하고 다른 염료 색으로 동일한 음식으로 수유 분석법을 수행합니다. 실험 화합물이 첨가되지 않은 경우 ~0의 PI를 산출하는 2-염료 농도(빨간색 1개, 파란색 1개)를 식별하기 위해 결과를 사용합니다(섹션 7 참조).
      참고: 예를 들어, 최종 청색 염료 농도는 50 μM로 고정되어 일련의 적색 염료 농도에 대해 테스트되었습니다. 적색 염료 투여 곡선을 기준으로 최적의 적염 농도는 210 μM이었으며, 이는 최소한의 염료 바이어스(도1B)를주었다. 붉은 염료 농도가 높을수록 붉은 음식을 선호하는 파리가 날아가고, 농도가 낮으면 푸른 음식을 선호합니다. 이 크기와 더 큰 차이가 실험 결과에 영향을 미칠 수 있기 때문에 1 μM의 증분에 파란색 또는 적색 염료 농도를 신중하게 정제합니다.
  2. 아가로즈 1% 준비
    1. 0.5 g아가로즈와 50mL의 순수한 물(또는 그 중 일부 다중)을 전자레인지에 안전한 용기에 섞어주세요. 아가로즈 용액을 녹일 때까지 전자레인지에 넣고 필요에 따라 저어줍니다.
  3. 다른 식품 성분의 준비
    1. 자당 및 모든 실험 화합물을 포함한 각 식품 성분을 최종 시험 농도의 100배 또는 더 높은 농도로 물에 용해하십시오.
      참고: 1% 한천에 첨가된 각 식품 성분의 총 부피는 10mL 용융 한천당 1mL를 초과해서는 안 됩니다. 그렇지 않으면, 아가로즈는 너무 희석될 수 있고 적절히 고화되지 않을 것이다.
  4. 식품 미디어 준비
    1. 원내 폴리프로필렌 원심분리기 튜브(15 또는 50mL)에 한천, 염료 및 원하는 실험 화합물을 혼합; 대조군 식품의 실험용 태스트 대신물을 사용하십시오. 한천이 여전히 완전히 액체인 동안이 작업을 수행하고 소용돌이 믹서를 사용하여 철저히 혼합하십시오. 60°C의 수조에 튜브를 보관하면서아가로즈가 경화되는 것을 방지하기 위해 사용하지 않고 요리에 분배됩니다.
  5. 실험을 위한 요리 준비
    참고: 시작하기 전에 모든 요리가 완전히 건조해야 합니다.
    1. 피펫 1 mL의 적색 실험 식품 배지의 한쪽으로 분석 접시(도 1A); 원하는 수의 요리에 대해 반복하십시오. 아가로즈가 단단할 때까지 식힌 다음(3-5분) 식힌 다음, 요리의 다른 쪽으로 블루 컨트롤 푸드1mL(그림1A)을식힙니다. 컨트롤 레드/실험 블루 쌍으로 이 프로세스를 반복합니다.
      참고: 실험을 시작하기 전에 모든 요리가 완전히 설정되어 있는지 확인합니다. 30분 이내에 요리를 사용하십시오.

5. 양방향 수유 분석서 를 시동

  1. 비행이나 등산과 같은 명백한 모터 활동이 관찰되지 때까지 얼음에 실험 비행 선을 일시적으로 마비시다. 파리가 움직이지 않게 되면 유리병을 부드럽게 반전시키고 탭하여 모든 파리를 분석실로 옮으십시오.
    참고: 감기 충격은 ~ 3-5분 정도 걸립니다. 감기에 장기간 노출은 비행의 생리학과 건강에 영향을 미칠 수 있으므로 피해야합니다.
  2. 신속하게 챔버에 덮개를 놓고 따로 둡니다. 모든 파리가 옮겨지면 모든 챔버를 어둡고 둘러싸인 공간으로 이동합니다. 분석이 90분 동안 실행되도록 허용합니다.
    참고: 어두운 환경은 플라이의 시각적 경로가 먹이 행동에 미치는 영향을 최소화하고 요리 외부에서 환경 신호를 제거합니다.

6. 양방향 수유 분석 종료

  1. 90분 경과 후 챔버를 -20°C 냉동고로 이송하여 파리를 희생시게 한다. ~1h 후, 파리를 세어라.
    참고: 접시를 냉동실에 넣기 전에 각 페트리 접시를 뒤집어 파리가 음식에 얼어 붙지 않도록 하십시오.

7. 음식 선호도를 결정하기 위해 기본 설정 지수(PI)를 할당

  1. 표준 해부 현미경에서 각 개별 접시에서 파리의 복부 색상을 검사하십시오. 파리를 복부의 색상에 따라 빨간색, 파란색 또는 보라색으로계산합니다(그림 2A). 복부가 50% 이상 색인 경우 비행을 계산하여 견고한수유(그림 2B)를나타냅니다. 복부에 작은 음식 반점만 포함되어 있는 경우, 가난한식사(그림 2C)를나타내는 경우 비행을 제외하십시오.
  2. 파란색, 빨간색 또는 파란색과 빨간색 식품을 모두 먹는 파리의 수가 계산된 후 다음 방정식을 사용하여 각 Petri 접시에 기본 설정 지수(PI)를 할당합니다.

PI = (실험적인 음식을 먹는 파리의 수) - (파리가 대조 음식을 먹는 횟수) / (실험적인 음식을 먹는 파리의 수) + (파리가 대조음식을 먹는 횟수) + (둘 다 먹는 파리의 수)

PI > 0은 실험 화합물에 대한 선호도를 나타내고, PI < 0은 실험 화합물에 대한 혐오감을 나타내고, PI = 0은 수유 동작에 화합물의 영향을 나타내지 않는다.

8. 분석 실 청소

  1. 페트리 요리를 음식 기판을 긁어내고 무향 비누와 물로 헹구어 페트리 요리를 즉시 청소하십시오. 페트리 요리를 증류수에 밤새 담급니다. 각 접시의 분할 씰이 여전히 방수되어 있는지 확인한 다음 접시를 건조하게하십시오.
    참고: 잔류 아가로즈나 염료 염색이 없는지 확인한 후 페트리 요리는 다시 사용할 준비가 되어 있습니다.

결과

이 분석에서 35mm 접시는 두 개의 동등한 수유 칸으로 나누어졌으며, 각 반은 아가로즈 식품을 함유하고 있으며, 식도식품과 함께 청색 또는 붉은 염료(그림1A)를결합하였다. 염료 바이어스를 배제하기 위해, 파란색과 적색 염료 농도는 이 두 개의 염료만 첨가되었을 때 대략 "0" PI를 산출하기 위해 신중하게 정제되었다(도1B). 페트리 요리에 테스트된 음?...

토론

이 메서드에는 문제가 발생할 수 있는 몇 가지 중요한 단계가 포함됩니다. 첫째, 안정적인 데이터를 제공하기 위해 충분한 양의 음식을 섭취해야 합니다. 파리가 제대로 먹지 않으면 파리가 적어도 24시간 동안 젖은 상태로 굶주리고 실험 매체에 최소 한도의 자당 농도(2mM)를 함유하고 있는지 확인합니다. 음식 소비를 더욱 자극하기 위해, 파리의 생리적 상태에 따라 젖은 기아 기간을 24 시간 이상 ...

공개

저자는 이해 상충이나 경쟁적인 재정적 이익을 선언하지 않습니다.

감사의 말

저자는 팅웨이 미 박사가 2선택 수유 분석서를 최적화하도록 도와준 것에 대해 감사를 표하고 싶습니다. 그들은 또한 원고에 대한 자신의 의견에 대한 사무엘 찬과 와이엇 쿨미에 감사드립니다. 이 프로젝트는 국립 보건원 보조금 R03 DC014787 (Y.V.Z.) 및 R01 DC018592 (Y.V.Z.) 및 앰브로스 모넬 재단에 의해 지원되었다.

자료

NameCompanyCatalog NumberComments
35 mm Petri dishFisher Scientific08-772E
AgaroseThomas ScientificC756P56
Clear adhesiveFisher ScientificNC9884114
Conical centrifuge tubesFisher Scientific05-527-90
Dissection microscopeAmscopeSM-2T-6WB-V331
FCF Brilliant BlueWako Chemical3844-45-9
Fly CO2 anesthesia setupGenesee Scientfic59-114/54-104M
Fly incubator with programmable day/night cyclePowers Scientific Inc.IS33SD
Fly lines
Glass dish (microwave-safe)
KimwipesFisher Scientific06-666A
Media storage bottleFisher Scientific50-192-9998
Plastic divider cut to fit the dish from a sheet no thicker than 5 mm
Plastic fly vialsGenesee Scientific32-116
SucroseMillipore SigmaS9378
Sulforhodamine BMillipore SigmaS9012
Tastant compound of interest
Vortex mixerBenchmark ScientificBV1000
Water bathFisher ScientificFSGPD05

참고문헌

  1. Jiao, Y., Moon, S. J., Montell, C. A Drosophila gustatory receptor required for the responses to sucrose, glucose, and maltose identified by mRNA tagging. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (35), 14110-14115 (2007).
  2. Dahanukar, A., Foster, K., van der Goes van Naters, W. M., Carlson, J. R. A Gr receptor is required for response to the sugar trehalose in taste neurons of Drosophila. Nature Neuroscience. 4 (12), 1182-1186 (2001).
  3. Ueno, K., et al. Trehalose sensitivity in Drosophila correlates with mutations in and expression of the gustatory receptor gene Gr5a. Current Biology. 11 (18), 1451-1455 (2001).
  4. Fujii, S., et al. Drosophila sugar receptors in sweet taste perception, olfaction, and internal nutrient sensing. Current Biology. 25 (5), 621-627 (2015).
  5. Wang, Z., Singhvi, A., Kong, P., Scott, K. Taste representations in the Drosophila brain. Cell. 117 (7), 981-991 (2004).
  6. Thorne, N., Chromey, C., Bray, S., Amrein, H. Taste perception and coding in Drosophila. Current Biology. 14 (12), 1065-1079 (2004).
  7. Slone, J., Daniels, J., Amrein, H. Sugar receptors in Drosophila. Current Biology. 17 (20), 1809-1816 (2007).
  8. Dus, M., et al. Nutrient sensor in the brain directs the action of the brain-gut axis in Drosophila. Neuron. 87 (1), 139-151 (2015).
  9. Toshima, N., Tanimura, T. Taste preference for amino acids is dependent on internal nutritional state in Drosophila melanogaster. Journal of Experimental Biology. 215 (16), 2827-2832 (2012).
  10. Melcher, C., Bader, R., Pankratz, M. J. Amino acids, taste circuits, and feeding behavior in Drosophila: towards understanding the psychology of feeding in flies and man. Journal of Endocrinology. 192 (3), 467-472 (2007).
  11. Zhang, Y. V., Ni, J., Montell, C. The molecular basis for attractive salt-taste coding in Drosophila. Science. 340 (6138), 1334-1338 (2013).
  12. Weiss, L. A., Dahanukar, A., Kwon, J. Y., Banerjee, D., Carlson, J. R. The molecular and cellular basis of bitter taste in Drosophila. Neuron. 69 (2), 258-272 (2011).
  13. Moon, S. J., Kottgen, M., Jiao, Y., Xu, H., Montell, C. A taste receptor required for the caffeine response in vivo. Current Biology. 16 (18), 1812-1817 (2006).
  14. Dweck, H. K. M., Carlson, J. R. Molecular logic and evolution of bitter taste in Drosophila. Current Biology. 30 (1), 17-30 (2020).
  15. Lee, Y., et al. Gustatory receptors required for avoiding the insecticide L-canavanine. Journal of Neuroscience. 32 (4), 1429-1435 (2012).
  16. Montell, C. A taste of the Drosophila gustatory receptors. Current Opinion in Neurobiology. 19 (4), 345-353 (2009).
  17. Clyne, P. J., Warr, C. G., Carlson, J. R. Candidate taste receptors in Drosophila. Science. 287 (5459), 1830-1834 (2000).
  18. Liman, E. R., Zhang, Y. V., Montell, C. Peripheral coding of taste. Neuron. 81 (5), 984-1000 (2014).
  19. Scott, K. Gustatory processing in Drosophila melanogaster. Annual Review of Entomology. 63, 15-30 (2018).
  20. Freeman, E. G., Dahanukar, A. Molecular neurobiology of Drosophila taste. Current Opinion in Neurobiology. 34, 140-148 (2015).
  21. Tanimura, T., Isono, K., Yamamoto, M. T. Taste sensitivity to trehalose and its alteration by gene dosage in Drosophila melanogaster. Genetics. 119 (2), 399-406 (1988).
  22. Zhang, Y. V., Raghuwanshi, R. P., Shen, W. L., Montell, C. Food experience-induced taste desensitization modulated by the Drosophila TRPL channel. Nature Neuroscience. 16 (10), 1468-1476 (2013).
  23. Bantel, A. P., Tessier, C. R. Taste preference assay for adult Drosophila. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (115), e54403 (2016).
  24. Shiraiwa, T., Carlson, J. R. Proboscis extension response (PER) assay in Drosophila. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (3), e193 (2007).
  25. Ja, W. W., et al. Prandiology of Drosophila and the CAFE assay. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (20), 8253-8256 (2007).
  26. Diegelmann, S., et al. The CApillary FEeder assay measures food intake in Drosophila melanogaster. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (121), e55024 (2017).
  27. Ro, J., Harvanek, Z. M., Pletcher, S. D. FLIC: high-throughput, continuous analysis of feeding behaviors in Drosophila. PLoS One. 9 (6), 101107 (2014).
  28. Yoshihara, M. Simultaneous recording of calcium signals from identified neurons and feeding behavior of Drosophila melanogaster. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (62), e3625 (2012).
  29. Deshpande, S. A., et al. Quantifying Drosophila food intake: comparative analysis of current methodology. Nature Methods. 11 (5), 535-540 (2014).
  30. Yapici, N., Cohn, R., Schusterreiter, C., Ruta, V., Vosshall, L. B. A taste circuit that regulates ingestion by integrating food and hunger signals. Cell. 165 (3), 715-729 (2016).
  31. Jiang, L., Zhan, Y., Zhu, Y. Combining quantitative food-intake assays and forcibly activating neurons to study appetite in Drosophila. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (134), e56900 (2018).
  32. Moon, S. J., Lee, Y., Jiao, Y., Montell, C. A Drosophila gustatory receptor essential for aversive taste and inhibiting male-to-male courtship. Current Biology. 19 (19), 1623-1627 (2009).
  33. Zhang, Y. V., Aikin, T. J., Li, Z., Montell, C. The basis of food texture sensation in Drosophila. Neuron. 91 (4), 863-877 (2016).
  34. Itskov, P. M., et al. Automated monitoring and quantitative analysis of feeding behaviour in Drosophila. Nature Communications. 5, 4560 (2014).
  35. Qi, W., et al. A quantitative feeding assay in adult Drosophila reveals rapid modulation of food ingestion by its nutritional value. Molecular Brain. 8, 87 (2015).
  36. Simpson, J. H., Looger, L. L. Functional imaging and optogenetics in Drosophila. Genetics. 208 (4), 1291-1309 (2018).

재인쇄 및 허가

JoVE'article의 텍스트 или 그림을 다시 사용하시려면 허가 살펴보기

허가 살펴보기

더 많은 기사 탐색

168

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

개인 정보 보호

이용 약관

정책

연락처

사서에게 추천하기

JoVE 뉴스레터

연구

교육

저자

사서

JoVE 소개

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. 판권 소유