Montaje y operación de una etapa de enfriamiento para inmovilizar C. elegans en sus placas de cultivo

Estamos desarrollando un enfoque simple que puede inmovilizar a toda la población de Caenorhabditis elegans directamente en placas de cultivo. Esta estrategia acelera significativamente los experimentos relacionados con las imágenes. La inmovilización de azida de sodio que se usa típicamente para obtener imágenes de alta resolución de la población de C. elegans es extremadamente laboriosa, lo que requiere el montaje y manejo individual de los animales.

Este método también puede reducir la vida útil y la viabilidad de los animales, lo que puede confundir los datos. El método de enfriamiento tradicional utilizaba temperaturas relativamente bajas de dos a cuatro grados centígrados de microfluido empleado, lo que requiere una amplia capacitación del usuario. Descubrimos que con la etapa de enfriamiento, las temperaturas cálidas como seis grados centígrados, inmovilizan más fuertemente a los animales para obtener imágenes de alta revolución.

La inmovilización por enfriamiento de C.elegans no se usa ampliamente, pero cuando se usa, generalmente se combina con microfluídica compleja que requiere una capacitación significativa del usuario. Debido a la deficiencia de la metodología típica de inmovilización, nuestra mejora de la movilización de refrigeración y la accesibilidad permite un alto rendimiento y una mayor resolución de imágenes para los investigadores. En comparación con el montaje y la anestesia intensivos en mano de obra de animales individuales, nuestro enfoque de enfriamiento puede inmovilizar reversiblemente grandes poblaciones de C. elegans, eliminando el 98% del tiempo de procesamiento.

La falta de anestésicos químicos también minimiza la exposición dañina a los animales y a los investigadores. Una etapa de enfriamiento permite obtener imágenes de alto rendimiento y alta resolución directamente en las placas de cultivo. La simplicidad de este diseño permite a otros investigadores construir fácilmente sus propios dispositivos e integrarlos en sus configuraciones existentes, para revolucionar el alcance y el ritmo de sus estudios biológicos.

Nuestro laboratorio adaptará la etapa de enfriamiento para varias configuraciones de microscopio. Diferentes diseños funcionarán con microscopios invertidos, microscopios verticales compuestos, así como diferentes plataformas de imágenes.