Los autores desean reconocer que este trabajo recibió el apoyo de las Ciencias Naturales e Ingeniería de Investigación de Canadá (NSERC) subvención.

<ol>
	<li>Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+of+Caenorhabditis+elegans.">The genetics of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 77, 71-94 (1974).</li><li>Fire, A., Xu, S., Montgomery, M. K., Kostas, S. A., Driver, S. E., Mello, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potent+and+specific+genetic+interference+by+double-stranded+RNA+in+Caenorhabditis+elegans.">Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 391, 806-811 (1998).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C.+elegans+Sequencing+Consortium.+Genome+sequence+of+the+nematode+C.+elegans:+a+platform+for+investigating+biology.">C. elegans Sequencing Consortium. 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Biol. 9, 602-605 (1999).</li><li>Ikegami, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Semaphorin+and+Eph+receptor+signaling+guide+a+series+of+cell+movements+for+ventral+enclosure+in+C.+elegans.">Semaphorin and Eph receptor signaling guide a series of cell movements for ventral enclosure in C. elegans.</a> Curr. Biol. 22, 1-11 (2012).</li><li>Chin-Sang, I. D., George, S. E., Ding, M., Moseley, S. L., Lynch, A. S., Chisholm, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ephrin+VAB-2/EFN-1+functions+in+neuronal+signaling+to+regulate+epidermal+morphogenesis+in+C.+elegans.">The ephrin VAB-2/EFN-1 functions in neuronal signaling to regulate epidermal morphogenesis in C. elegans.</a> C. elegans. Cell. 99, 781-790 (1999).</li><li>Wang, X., Roy, P. J., Holland, S. J., Zhang, L. 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D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+divergent+C.+elegans+ephrin+EFN-4+functions+in+embryonic+morphogenesis+in+a+pathway+independent+of+the+VAB-1+Eph+receptor.">The divergent C. elegans ephrin EFN-4 functions in embryonic morphogenesis in a pathway independent of the VAB-1 Eph receptor.</a> Development. 129, 5499-5510 (2002).</li><li>Ghenea, S., Boudreau, J. R., Lague, N. P., Chin-Sang, I. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+VAB-1+Eph+receptor+tyrosine+kinase+and+SAX-3/Robo+neuronal+receptors+function+together+during+C.+elegans+embryonic+morphogenesis.">The VAB-1 Eph receptor tyrosine kinase and SAX-3/Robo neuronal receptors function together during C. elegans embryonic morphogenesis.</a> Development. 132, 3679-3690 (2005).</li><li>Bernadskaya, Y. Y., Wallace, A., Nguyen, J., Mohler, W. A., Soto, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=UNC-40/DCC,+SAX-3/Robo,+and+VAB-1/Eph+polarize+F-actin+during+embryonic+morphogenesis+by+regulating+the+WAVE/SCAR+actin+nucleation+complex.">UNC-40/DCC, SAX-3/Robo, and VAB-1/Eph polarize F-actin during embryonic morphogenesis by regulating the WAVE/SCAR actin nucleation complex.</a> PLoS Genet. 8, (2012).</li><li>Piekny, A. J., Werner, M., Glotzer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokinesis:+welcome+to+the+Rho+zone.">Cytokinesis: welcome to the Rho zone.</a> Trends Cell Biol. 15, 651-658 (2005).</li><li>Piekny, A. J., Maddox, A. 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S., Zipperlen, P., Martinez-Campos, M., Sohrmann, M., Ahringer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+genomic+analysis+of+C.+elegans+chromosome+I+by+systematic+RNA+interference.">Functional genomic analysis of C. elegans chromosome I by systematic RNA interference.</a> Nature. 408, 325-330 (2000).</li><li>Kamath, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+functional+analysis+of+the+Caenorhabditis+elegans+genome+using+RNAi.">Systematic functional analysis of the Caenorhabditis elegans genome using RNAi.</a> Nature. 421, 231-237 (2003).</li><li>Duerr, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Immunohistochemistry. WormBook, The C. elegans Research Community. , 1-61 (2006).</li><li>Maddox, A. S., Habermann, B., Desai, A., Oegema, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+roles+for+two+C.+elegans+anillins+in+the+gonad+and+early+embryo.">Distinct roles for two C. elegans anillins in the gonad and early embryo.</a> Development. 132, 2837-2848 (2005).</li><li>Sulston, J. E., Schierenberg, E., White, J. G., Thomson, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+embryonic+cell+lineage+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">The embryonic cell lineage of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Dev. Biol. 100, 64-119 (1983).</li><li>Chin-Sang, I. D., Chisholm, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Form+of+the+worm:+genetics+of+epidermal+morphogenesis+in+C.+elegans.">Form of the worm: genetics of epidermal morphogenesis in C. elegans.</a> Trends Genet. 16, 544-551 (2000).</li><li>Zhang, H., Labouesse, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+through+mechanical+inputs+&#8211;+a+coordinated+process.">Signaling through mechanical inputs &#8211; a coordinated process.</a> J. Cell Sci. 125, 3039-3049 (2012).</li><li>Guenther, C., Garriga, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+distribution+of+the+C.+elegans+HAM-1+protein+in+neuroblasts+enables+daughter+cells+to+adopt+distinct+fates.">Asymmetric distribution of the C. elegans HAM-1 protein in neuroblasts enables daughter cells to adopt distinct fates.</a> Development. 122, 3509-3518 (1996).</li><li>Audhya, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+complex+containing+the+Sm+protein+CAR-1+and+the+RNA+helicase+CGH-1+is+required+for+embryonic+cytokinesis+in+Caenorhabditis+elegans.">A complex containing the Sm protein CAR-1 and the RNA helicase CGH-1 is required for embryonic cytokinesis in Caenorhabditis elegans.</a> J. Cell Biol. 171, 267-279 (2005).</li><li>Maddox, A. S., Lewellyn , L., Desai, A., Oegema, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anillin+and+the+septins+promote+asymmetric+ingression+of+the+cytokinetic+furrow.">Anillin and the septins promote asymmetric ingression of the cytokinetic furrow.</a> Dev. Cell. 12, 827-835 (2007).</li><li>Dorn, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Actomyosin+tube+formation+in+polar+body+cytokinesis+requires+Anillin+in+C.+elegans.">Actomyosin tube formation in polar body cytokinesis requires Anillin in C. elegans.</a> Curr. Biol. 20, 2046-2051 (2010).</li><li>Calixto, A., Ma, C., Chalfie, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+neuronal+RNAi+in+C.+elegans+using+SID-1.">Enhanced neuronal RNAi in C. elegans using SID-1.</a> Nat. Methods. 7, 554-559 (2010).</li></ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Este protocolo describe el uso de diversos tipos de microscopía de divisiones celulares imagen durante mediados embriogénesis. En particular, este protocolo pone de relieve cómo la imagen de la división de los neuroblastos, células que pueden facilitar la morfogénesis epidérmica. La comunicación de célula de la célula es importante para la formación de tejido durante el desarrollo de los metazoos y C. elegans es un modelo excelente para estudiar la formación de tejido in vivo. Un evento que...

Aunque existen protocolos que describen cómo la división celular la imagen a principios del C. elegans embrión, este protocolo se describe cómo la división celular la imagen dentro de un tejido a mediados embriogénesis. Uno de los principales retos en la formación de imágenes organismos durante el desarrollo ha sido su sensibilidad a la fototoxicidad. Sin embargo, el aumento de la accesibilidad a hilar microscopios confocal de disco o microscopios de campo de barrido ha permitido aplicaciones de imagen más extendidos. Ambos sistemas utilizan láseres de estado sólido y la luz difusa, lo que limita los niveles de radiación UV que los organismos están expuestos. Sin embargo, puestos de campo amplio todavía se puede utilizar para obtener imágenes in vivo, sobre todo si están equipados con cámaras con alta sensibilidad (por ejemplo EMCCD), control de apertura y control de luz (por ejemplo, LEDs o bombillas de mercurio ajustables). Este protocolo describe cómo utilizar bien un sistema confocal o basado en un sistema de campo amplio para la división celular en el desarrollo de la imagen C. elegans &lt;/ Em&gt; embriones. A modo de ejemplo, se describe cómo reproducir la división celular neuroblastos. Los neuroblastos pueden facilitar la morfogénesis epidérmica proporcionando señales químicas o mecánicas a las células de la epidermis suprayacente, y proporcionar un excelente ejemplo de la importancia de la comunicación intercelular en la formación de tejidos. Caenorhabditis elegans es un organismo modelo ideal para estudios basados ​​en la microscopía, debido a su transparencia y simple organización del tejido 1. Además, C. elegans es susceptible de métodos genéticos y de ARNi, y dado que muchos de sus genes tienen homólogos humanos, puede ser utilizado para identificar los mecanismos conservadas para la formación de tejido 2-5. En C. elegans, la formación de la epidermis ocurre durante la mitad la embriogénesis, cuando el embrión tiene&gt; 300 células. Morfogénesis epidérmico se compone de varias fases principales, durante el cual el embrión está encerrado en una capa de células epidérmicas que constriñen y se extienden para transformar la EMBRyo desde una forma ovoide en la forma alargada de un tornillo sin fin 6. Recinto ventral describe uno de estos eventos morfogenéticos, cuando las células epidérmicas ventrales migran hacia la línea media ventral para cubrir la superficie ventral del embrión (Figura 1). En primer lugar, dos pares de anteriores situada células principales del borde migran hacia la línea media ventral, donde se adhieren y se fusionan con sus vecinos contralaterales 6. Esto es seguido por la migración de las células de bolsillo posterior situado, que forman cuña formas creando un bolsillo ventral 6-7. El mecanismo que cierra el bolsillo no se entiende bien. Una posibilidad es que una estructura contráctil miosina actina supracellular ata las células de bolsillo juntos en un cordón de bolsa como la moda, similar a la cicatrización de la herida 8. Curiosamente, la migración de algunas de las células de bolsillo está mediada por subconjuntos específicos de neuroblastos subyacentes 9 (precursores neuronales que se encuentran debajo de la epidermis; Figura 1B). Estudios anteriores mostraron que los neuroblastos regulan la migración de las células epidérmicas ventrales y recinto ventral. VAB-1 (receptor de Efrina) y VAB-2 (Efrina ligando) son altamente expresado en los neuroblastos y facilitar la clasificación de los neuroblastos anterior y posterior entre sí, y mutaciones en VAB-1 o VAB-2 causa recinto ventral fenotipos 10-13. Sin embargo, experimentos de rescate promotoras mostraron que también se requiere VAB-1 en las células epidérmicas ventrales suprayacentes y receptores para otras señales de orientación secretadas por los neuroblastos se expresan en las células epidérmicas ventrales 9. Aunque las mutaciones en cualquiera de estos receptores causan fenotipos recinto ventrales, no está claro si surgen defectos debido a problemas en el posicionamiento de los neuroblastos o por insuficiencia de las células epidérmicas ventrales para responder a la orientación Tacos de 14. La alteración de la división de wi neuroblastosthout que afecta su capacidad para secretar señales de orientación podría arrojar luz sobre el papel de los neuroblastos y su capacidad para proporcionar energía mecánica durante la morfogénesis epidérmica. Recientemente, se encontró que un gen de la división celular, ani-1 (anillin) es altamente expresado en los neuroblastos (figura 2A) y su agotamiento causa defectos de división de neuroblastos. Curiosamente, estos embriones exhiben fenotipos recinto ventrales (Fotopoulos, Wernike y Piękny, observaciones no publicadas). Anillin se requiere para la división celular, y en particular para la citocinesis, que describe el proceso en el que una célula madre divide físicamente en dos células hijas. La citocinesis es impulsado por la formación de un anillo contráctil actomiosina, que debe ser estrechamente controlada en el espacio y el tiempo para asegurarse de que está acoplado correctamente con la segregación de cromátidas hermanas. El regulador maestro de la citocinesis metazoos es RhoA (RHO-1 en C. elegans), una pequeña GTPasa que es unctive en su forma unida a GTP. El FMAM Ect2/ECT-2 activa RhoA, después de lo cual RhoA-GTP interactúa con los efectores que forman el anillo contráctil y median su ingresión 15. Anillin es una proteína de dominio múltiple que se une a RhoA a través de su C-terminal y a la actina y la miosina a través de su extremo N-terminal. Anillin se requiere para estabilizar la posición del anillo contráctil en células de mamífero o de Drosophila S2 16. Agotamiento Anillin causa anillos contráctiles a someterse a oscilaciones laterales, y la citocinesis finalmente falla la formación de células multinucleadas 17-19. Curiosamente, a pesar C. elegans ani-1 coordina la contractilidad actomiosina en el embrión temprano, no es esencial para la citocinesis. Sin embargo, como se describió anteriormente, se requiere ani-1 para la citocinesis neuroblastos durante la mitad de la embriogénesis (Fotopoulos, Wernike y Piękny, observaciones no publicadas). Fracaso Citocinesis alteraría el número y posición de los neuroblastos y podría afectar a la locción de señales de orientación químicos, o podría alterar las propiedades mecánicas del tejido. Ambos modelos destacan el papel no autónoma de neuroblastos de cerramiento ventral, y la importancia de la comunicación de tejidos tejidos durante el desarrollo embrionario. Este protocolo experimental se describe cómo la división celular imagen durante la C. elegans mediados embriogénesis mediante microscopía de fluorescencia. La mayoría de los experimentos que estudian los mecanismos de la división celular se realizaron en células individuales dentro de placas de cultivo (por ejemplo. HeLa o células S2) o en embriones tempranos con un número limitado de células (por ejemplo, C. elegans embrión de una célula, de Xenopus, o equinodermo embriones). Sin embargo, es importante para estudiar la división celular también dentro de los tejidos, ya que hay señales externas que pueden influir en el tiempo y la colocación del plano de división. Además, las células pueden proporcionar señales químicas o mecánicas para influir en el desarrollo de los tejidos vecinoss, y es importante entender cómo la comunicación intercelular ayuda a los tejidos para formar durante el desarrollo.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1056">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:291px;">Agar</td>
			<td style="width:247px;">BioShop Canada Inc.</td>
			<td style="width:185px;">#AGR001.1</td>
			<td style="width:335px;">For making C. elegans NGM and RNAi plates</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Agar</td>
			<td>Bio Basic Inc.</td>
			<td>#9002-18-0</td>
			<td>For making bacteria LB agar plates</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Agarose</td>
			<td>BioShop Canada Inc.</td>
			<td>#AGA001.500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-mouse Alexa 488 antibody</td>
			<td>Life Technologies Corporation (Invitrogen)</td>
			<td>#A11029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-mouse anti-GFP antibody</td>
			<td>Roche Applied Science</td>
			<td>#11814460001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-rabbit Alexa 568 antibody</td>
			<td>Life Technologies Corporation (Invitrogen)</td>
			<td>#A11011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ampicillin</td>
			<td>BioShop Canada Inc.</td>
			<td>#AMP201.5</td>
			<td>Store powder at 4 &#176;C and dissolved ampicillin at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bactopetone&#160; (peptone-A)</td>
			<td>Bio Basic Inc.</td>
			<td>#G213</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">CaCl2 (calcium chloride)</td>
			<td>BioShop Canada Inc.</td>
			<td>#C302.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cholesterol</td>
			<td>BioShop Canada Inc.</td>
			<td>#CHL380.25</td>
			<td>Dissolve in ethanol</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DAPI&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>#D9542</td>
			<td>Use to stain nucleic acids (DNA)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Glycerol</td>
			<td>BioShop Canada Inc.</td>
			<td>#GLY001.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">IPTG (isopropylthio-&#946;-galactoside)</td>
			<td>Bio Basic Inc.</td>
			<td>#367-93-1</td>
			<td>Store powder and dissolved IPTG at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">KH2PO4 (potassium phosphate, monobasic)</td>
			<td>BioShop Canada Inc.</td>
			<td>#PPM666.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">K2HPO4 (potassium phosphate, dibasic)</td>
			<td>BioShop Canada Inc.</td>
			<td>#PPD303.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L4440&#160; (feeding vector)</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>#1654</td>
			<td>Keep as glycerol stock at -80 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MgSO4&#160;&#160; (magnesium sulfate)</td>
			<td>BioShop Canada Inc.</td>
			<td>#MAG511.500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">NaCl (sodium chloride)</td>
			<td>Bio Basic Inc.</td>
			<td>#7647-14-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Na2HPO4 (sodium phosphate, dibasic)</td>
			<td>Bio Basic Inc.</td>
			<td>#7558-79-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Normal Donkey Serum (NDS)</td>
			<td>Wisent Bioproducts</td>
			<td>#035-110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">n-propyl 3.4.5-trihydroxybenzoate (propyl gallate)</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>#A10877</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Poly-L-lysine</td>
			<td>Sigma-Aldrich&#160;</td>
			<td>#P8920</td>
			<td>For optimal results coat microscope slides three times&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Streptomycin</td>
			<td>BioShop Canada Inc.</td>
			<td>#STP101.50</td>
			<td>Store powder at 4 &#176;C and dissolved streptomycin at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tetracyclin</td>
			<td>BioShop Canada Inc.</td>
			<td>#TET701.10</td>
			<td>Store powder at 4 &#176;C and dissolved tetracycline at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tween-20</td>
			<td>Bio Basic Inc.</td>
			<td>CAS#9005-64-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tryptone</td>
			<td>BioShop Canada Inc.</td>
			<td>#TRP402.500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Yeast Extract</td>
			<td>Bio Basic Inc.</td>
			<td>#8013-01-2</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualizing neuroblast cytokinesis during c. elegans embryogenesis

Este protocolo describe el uso de microscopía de fluorescencia a la imagen dentro de la división de células en desarrollo Caenorhabditis elegans embriones. En particular, este protocolo se centra en la forma de imagen dividiendo neuroblastos, que se encuentran por debajo de las células de la epidermis y puede ser importante para la morfogénesis epidérmica. La formación de tejidos es crucial para el desarrollo de los metazoos y se basa en las señales externas de los tejidos vecinos. C. elegans es un organismo modelo excelente para estudiar la morfogénesis de tejidos in vivo debido a su transparencia y organización sencilla, haciendo que sus tejidos fácil de estudiar a través de microscopía. Recinto ventral es el proceso donde la superficie ventral del embrión está cubierto por una capa única de células epiteliales. Este evento se piensa que es facilitado por los neuroblastos subyacentes, que proporcionan señales de orientación química para mediar en la migración de las células epiteliales suprayacentes. Sin embargo, los neuroblastos son altamente proliferativa y también pueden actuarcomo un sustrato mecánico para las células epidérmicas ventrales. Los estudios que utilizan este protocolo experimental podrían descubrir la importancia de la comunicación intercelular durante la formación de tejido, y podrían utilizarse para revelar las funciones de los genes implicados en la división celular dentro de los tejidos en desarrollo.

Este protocolo experimental se describe cómo la división celular en la imagen C. elegans embriones durante mediados de la embriogénesis. En particular, se describe cómo los neuroblastos de la imagen, lo que puede facilitar la morfogénesis epidérmica. Morfogénesis epidérmico se produce debido a una combinación de cambios en la forma de células epidérmicas, la migración y la adhesión, pero también se basa en señales químicas o mecánicas de los neuroblastos subyacentes (Figura 1B).</strong...

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Visualizing Neuroblast Cytokinesis During C. elegans Embryogenesis

Este protocolo describe cómo reproducir la división de células dentro de un tejido en Caenorhabditis elegans embriones. Mientras que varios protocolos describen cómo la división celular imagen en el embrión temprano, este protocolo se describe cómo la imagen de la división celular dentro de un tejido en desarrollo durante la embriogénesis tardía mediados.

Visualizar Neuroblast Citocinesis Durante<em&gt; C. elegans</em&gt; Embriogénesis

This protocol describes the use of fluorescence microscopy to image dividing cells within developing Caenorhabditis elegans embryos. In particular, this ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Visualizing Neuroblast Cytokinesis During C. elegans Embryogenesis

11.7K vistas.  Concordia University.  Este protocolo describe cómo reproducir la división de células dentro de un tejido en Caenorhabditis elegans embriones. Mientras que varios protocolos describen cómo la división celular imagen en el embrión temprano, este protocolo se describe cómo la imagen de la división celular dentro de un tejido en desarrollo durante la embriogénesis tardía mediados. 