C.エレガンスを培養プレートに固定化するための冷却ステージの組み立てと操作

私たちは、カエノラブディティスエレガンスの個体群全体を栽培プレートに直接固定できる簡単なアプローチを開発しています。この戦略により、イメージング関連の実験が大幅に加速されます。C.elegans集団の高解像度イメージングに通常使用されるアジ化ナトリウム固定化は、非常に労働集約的であり、個々の動物の取り付けと取り扱いが必要です。

この方法はまた、動物の寿命と生存率を低下させる可能性があり、データを混乱させる可能性があります。従来の冷却方法では、採用されたマイクロ流体の摂氏2〜4度の比較的低温が使用されていましたが、これには広範なユーザートレーニングが必要です。冷却段階では、摂氏6度のような暖かい温度が、高回転イメージングのために動物をより強く固定することがわかりました。

C.elegansの冷却固定化は広く使用されていませんが、使用する場合、通常、重要なユーザートレーニングを必要とする複雑なマイクロ流体と組み合わされます。一般的な固定化手法の欠点により、冷却モビライゼーションとアクセシビリティの向上により、研究者にとって高スループットと高解像度のイメージングが可能になります。個々の動物の労働集約的なマウントと麻酔と比較して、私たちの冷却アプローチは、大規模なC.elegans集団を可逆的に固定することができ、処理時間の98%を排除します。

化学麻酔薬の欠如はまた、動物や研究者への有害な曝露を最小限に抑えます。冷却ステージにより、高スループットと高解像度のイメージングを栽培プレート上で直接行うことができます。この設計のシンプルさにより、他の研究者は独自のデバイスを簡単に構築して既存のセットアップに統合し、生物学的研究の範囲とペースに革命を起こすことができます。

当研究室では、冷却ステージを様々な顕微鏡構成に適合させます。倒立顕微鏡、複合正立顕微鏡、およびさまざまなイメージングプラットフォームでは、さまざまな設計が機能します。