Para comenzar, coloque al ratón C57 negro 6 anestesiado de ocho a 10 semanas de edad en el banco quirúrgico. Con unas pinzas romas, saca la lengua y sujétala. Inserte un laringoscopio en la boca y visualice las cuerdas vocales.
Inserte un alambre guía en un catéter intravenoso de calibre 20. Luego, empuje suavemente el catéter dentro de la tráquea hasta que la parte del ala esté nivelada con la punta de la nariz. Conecte el mouse al ventilador y colóquelo en posición supina debajo de una lámpara de calor.
Mantenga la temperatura rectal a 37 grados centígrados. Después de afeitar y desinfectar el área quirúrgica, realice una incisión de un centímetro en la piel en las áreas inguinales izquierda y derecha para acceder a las arterias femorales. A continuación, desinfecte y lige la arteria femoral distal, y aplique una gota de lidocaína.
Coloque una pinza en la arteria femoral proximal y haga un pequeño corte en la arteria distal a la pinza. Inserte un catéter de polietileno 10 en las arterias femorales izquierda y derecha. Inyecte 50 microlitros de uno a 10 de solución salina heparinizada en cada vía arterial.
Para evitar la coagulación en la línea, gire el mouse a la posición prona y móntelo en un marco de cabeza estereotáxico. Conecte tres electrodos de aguja al brazo izquierdo, la pierna izquierda y el brazo derecho para el monitoreo del electrocardiograma. A continuación, afeita la parte superior de la cabeza y esterilízala con tres rondas alternas de hisopos de yodo y alcohol.
Haga una incisión de 2,5 centímetros en la línea media de la piel y use cuatro retractores pequeños para exponer toda la superficie del cráneo para obtener imágenes cerebrales. A continuación, coloque un generador de imágenes de contraste de manchas láser sobre la cabeza. Ajuste el generador de imágenes de manchas láser para ver la línea de base de los vasos sanguíneos cerebrales antes de un paro cardíaco.
Antes de inducir un paro cardíaco, llene una jeringa de plástico de un mililitro con 26 microlitros de la solución madre del cóctel de reanimación. Una vez que la temperatura corporal alcance los 37 grados centígrados, ajuste el medidor de oxígeno al 100% para oxigenar la sangre durante dos minutos. A continuación, extraiga hasta 200 microlitros de sangre a través de la arteria femoral derecha en la jeringa de plástico que contiene el cóctel de reanimación.
Para inducir un paro cardíaco, apague el oxígeno y aumente el nitrógeno al 100% para inducir la anoxia. Apague el ventilador, el vaporizador de isoflurano, el controlador de temperatura y el medidor de flujo de nitrógeno. Confirmar la ausencia de flujo sanguíneo cerebral durante el paro cardíaco.
Al observar la imagen de la mancha láser, ajuste el oxígeno al 100% y encienda el ventilador ocho minutos después del inicio del paro cardíaco. Infundir inmediatamente la sangre oxigenada extraída mezclada con el cóctel de reanimación en la circulación sanguínea a través de la arteria femoral derecha en un minuto para restaurar los signos vitales como la frecuencia cardíaca y la presión arterial. Vea la imagen de la mancha láser para confirmar la reperfusión exitosa del cerebro.
Para la recuperación postoperatoria, retire los retractores de la cabeza, aplique bupivacaína al 0,25% en la incisión de la piel y cierre la incisión con un hilo de sutura de nailon 6-0. A continuación, aplique una pomada antibiótica en la superficie de la incisión cutánea cerrada. La inducción de un paro cardíaco en el ratón condujo a una bradicardia grave en 45 segundos.
Después de dos minutos de anoxia, la frecuencia cardíaca se redujo significativamente. La presión arterial disminuyó por debajo de los 20 milímetros de mercurio y el flujo sanguíneo cerebral cesó. Además, la temperatura corporal descendió lentamente hasta unos 32 grados centígrados al final del paro cardíaco.
Después de inyectar la mezcla de reanimación sanguínea, todas las funciones vitales comenzaron a recuperarse. Las imágenes de contraste con manchas láser confirmaron la ausencia total de flujo sanguíneo en el cerebro durante el paro cardíaco, las imágenes fotoacústicas permitieron la identificación de cambios en el flujo sanguíneo, la estructura y la oxigenación durante el procedimiento de paro cardíaco.
