Para preparar una barra de cabeza en forma de omega para el reposacabezas de pez cebra, coloque un trozo de arcilla para modelar a base de aceite en un micromanipulador de tres ejes. A continuación, inserte un brazo de la barra de cabeza en la arcilla y oriente la barra de cabeza horizontalmente. Prepara el cañón para mantener el cuerpo del pez en su lugar durante la cirugía.
Para eliminar el exceso de piel y agua de los sitios de unión del cráneo, prepare cuatro hisopos de tejido cortando una toalla de papel en un cuadrado de tres centímetros. Luego, dobla los cuadrados de papel a lo largo de su diagonal para producir una estructura similar a un tubo y tuerce los extremos del tubo en una punta fina. Después de anestesiar a los peces con 0,03% TMS, realizar la perfusión de jeringas con 0,01% TMS para mantener la sedación durante todo el procedimiento.
Envuelva el pescado en un pañuelo de papel húmedo comenzando desde la punta de la cola hasta aproximadamente un milímetro caudal hasta la branquia. A continuación, envuelva un tubo de plástico blando con una hendidura longitudinal alrededor del pañuelo de papel que cubra el pez desde el final de la cola hasta unos dos milímetros caudales hasta la branquia. Envuelve la toalla de papel alrededor del tubo.
A continuación, envuelva la toalla de papel con un tubo de plástico blando cortado del bulbo de una pipeta de transferencia de plástico. Cargue el pescado envuelto en el cañón. A continuación, con un bisturí, retire la piel que cubre los sitios de fijación, dos áreas triangulares del cráneo rostrolaterales al cerebelo y por encima de las branquias.
Luego, use hisopos de papel para secar los sitios de unión y limpiar la piel restante. Con una punta de pipeta de 10 microlitros, aplique una gota de pegamento para tejidos en el centro de cada sitio de fijación. Coloque el cuerpo del pez en posición vertical y coloque la barra de la cabeza ligeramente por encima y caudal a los sitios de fijación.
A continuación, prepare el cemento dental mezclando una cucharada pequeña de polímero con cuatro gotas de monómero rápido y una gota de catalizador cinco. Revuelva la mezcla uniformemente durante 15 segundos. Inmediatamente después de mezclar, use una micropipeta y una punta de pipeta de 10 microlitros para aplicar el cemento en los sitios de fijación y la región entre los sitios.
Luego, con un micromanipulador, presione suavemente la barra de cabeza sobre el cemento. Cubra la barra de cabeza con el cemento restante y espere 12 minutos para permitir el curado del cemento. A continuación, para mejorar el acceso óptico al prosencéfalo para obtener imágenes de calcio, utilice un bisturí para extraer la piel por encima del telencéfalo.
Después del curado, retire la arcilla de la barra principal. A continuación, prepare un módulo de carga de pescado para el micromanipulador. A continuación, transfiera toda la cápsula del cañón al ajustador de cabeceo en el módulo de carga de pescado.
Usando el micro manipulador, coloque el pez con la barra de la cabeza colocada encima de los postes metálicos de la etapa de la cabeza. Aumente ligeramente el ángulo de cabeceo de los peces. Aplique pegamento curable ultravioleta para asegurar la barra de la cabeza a los postes de metal.
A continuación, saque el pez de la cápsula y bloquee la etapa de la cabeza en la placa base dentro del tanque semihexagonal. Después de la cirugía, sumerja al animal en agua de pecera para recuperarse de la anestesia.
