Encienda el láser y espere 30 minutos para que la energía se estabilice. Ajuste la longitud de onda a 920 nanómetros y la potencia a aproximadamente 50 milivatios en la muestra. Coloque la cámara de grabación con el pez cebra con la cabeza sujeta en la plataforma experimental.
Coloque la lente del objetivo cerca de la superficie del prosencéfalo. Para registrar el comportamiento, encienda las luces infrarrojas de 810 nanómetros a ambos lados del tanque. Seleccione la fuente de entrada para la visualización de realidad virtual y comience a grabar datos.
Luego, abra el obturador láser y habilite el tubo multiplicador de fotos. Eleve gradualmente la lente del objetivo hasta que se revele el prosencéfalo dorsal. Utilice un actuador piezoeléctrico para adquirir imágenes a múltiples profundidades para aumentar el número de neuronas registradas.
Dos imágenes de calcio de fotones registran la actividad neuronal individual en el prosencéfalo dorsal hasta 200 micras de profundidad a través de cráneos intactos. El rango de imágenes incluye las áreas paleo, Dm, cDc, rDC y parte de la Dl que cubre el 30% del prosencéfalo del pez cebra adulto. El registro simultáneo del comportamiento realizado durante la obtención de imágenes cerebrales permite la identificación de correlatos neuronales de las salidas motoras.
Durante la obtención de imágenes, los movimientos de la cola no deben causar artefactos de movimiento visibles.
