Comience encendiendo el instrumento y seleccionando el proceso de transducción de células T desde la interfaz de la pantalla táctil. Haga clic en ejecutar para iniciar el procedimiento y siga las instrucciones en pantalla proporcionadas. En la pantalla de entrada del perímetro, ingrese las iniciales del operador, el juego de tubos, el número de lote y la fecha de vencimiento.
A continuación, seleccione el proceso completo en la pantalla de configuración del proceso. Ahora, elija dos viales de reactivo de selección para el método de selección CD4, CD8. Instale el juego de tubos, asegurándose de que todas las conexiones de señuelos estén bien ajustadas y complete las pruebas de integridad superior e inferior siguiendo las instrucciones en la pantalla táctil.
Ahora, coloque el medio y las bolsas de almacenamiento intermedio de procesamiento según la guía en pantalla y comience el cebado automático del juego de tubos. Una vez que aparezca la pantalla del producto de celda de transferencia, transfiera el producto de celda T descongelado a una bolsa de transferencia de 150 mililitros y suéldelo estérilmente a la bolsa de aplicación del juego de tubos. A continuación, utilice una bolsa de control de calidad para obtener una muestra de la bolsa de aplicación y realice un recuento de células con un analizador de hematología.
Conecte los viales de reactivos CD4 y CD8 al juego de tubos e inicie el proceso de selección para el enriquecimiento de células T. Después del enriquecimiento, retire una muestra de las células seleccionadas de la bolsa de control de calidad de las bolsas de reaplicación. Introduzca la concentración de celda deseada y el número inicial.
Ahora, coloque un vial del reactivo de activación de acuerdo con las instrucciones en pantalla. Luego, ajuste la concentración de dióxido de carbono al 5% y la temperatura de la cámara de cultivo a 39 grados centígrados. Establezca la matriz de actividades utilizando el protocolo de alimentación mejorado como punto de partida y modifique los pasos individuales a su protocolo optimizado específico.
En este caso, establezca el tiempo de actividad de transducción en 24 horas después de la siembra y el lavado del cultivo en 48 horas después de la transducción. Configure el tiempo de activación del agitador para que comience 30 minutos después de comenzar el lavado con cultivo. Elimine todas las actividades de intercambio de bolsas medianas y bolsas de desecho, ya que ya no son necesarias.
Luego, presione OK en la pantalla para iniciar el cultivo. Permita que el instrumento bombee automáticamente el volumen requerido desde la bolsa de reaplicación a la cámara de cultivo. Descongelar y preparar el volumen vectorial calculado en una bolsa de reactivos de 20 mililitros con un medio frío para alcanzar un volumen final de 10 mililitros.
Ajuste la matriz de actividad para establecer el tiempo de transducción en dos minutos en el futuro y presione OK para iniciar la actividad de transducción. Suelde estérilmente la bolsa vectorial al conjunto de tubos siguiendo las instrucciones que aparecen en pantalla. Modifique la matriz de actividad de acuerdo con la hora real de inicio de la transducción con el lavado de cultivo programado 48 horas después de la transducción.
Programe el tiempo de activación de la coctelera en 30 minutos después del lavado del cultivo. Finalmente, asegúrese de que el intercambio de medios ocurra por la tarde a las 2:00 p.m. del sexto día. Pulse el botón de muestra y siga las instrucciones que aparecen en pantalla para adquirir una muestra de control de calidad del cultivo activo.
Divida la muestra en tres alícuotas de un mililitro para varios análisis. Prepare el tampón de formulación final, guardando una parte para la preparación del crioprotector más adelante. A continuación, ajuste la matriz de actividad, estableciendo el final de la referencia cultural en dos minutos en el futuro.
Conecte el tampón de formulación final al juego de tubos y comience la cosecha. Selle y retire la bolsa de la célula objetivo. Esta bolsa contiene las células T con CAR listas para infusión o criopreservación.
La RT del ensayo clínico fue del 46%Esto indica que el proceso TCT promovió efectivamente la expansión celular. La viabilidad celular del producto final fue de entre 88 y 94% y la pureza de las células T CD3 fue de 89 a 93%.
