Mesenchymal Stem Cell Surface Staining for Immunophenotyping

Para empezar, centrifugar las células madre mesenquimales tripsinizadas a 300 g durante seis minutos para obtener el gránulo celular. A continuación, vuelva a suspender el gránulo en un mililitro de medio MSC antes del recuento de células. Vuelva a centrifugar la suspensión celular y, a continuación, vuelva a suspender el gránulo en un volumen adecuado del tampón de tinción después de desechar el sobrenadante.

Para la preparación de los controles de compensación, etiquete siete tubos de fax como sin teñir, DAPI, V450, FITC, PE, PerCP-Cy5.5 y APC. A continuación, prepare los tubos de tinción individuales para la compensación e incubelos en la oscuridad durante 30 minutos. Después de la incubación, lave las células de cada tubo dos veces y las perlas una vez con un mililitro de tampón de tinción.

A continuación, centrifugar los tubos en vórtice a 200 g durante 10 minutos a temperatura ambiente. Después de desechar el sobrenadante, vuelva a suspender el gránulo en 500 microlitros de tampón de tinción. Incubar el tubo DAPI en un baño de agua a 60 grados centígrados durante cinco minutos, seguido de una incubación de 15 minutos en hielo para inducir la inclusión del colorante.

Añadir cinco microlitros de DAPI a la suspensión e incubar hasta su adquisición. Prepare la célula y la suspensión de anticuerpos en cinco tubos de fax etiquetados como se indica en la tabla. Agite suavemente los tubos antes de la incubación.

Luego, lave cada tubo dos veces con un mililitro del tampón para manchas. Centrifugar el tubo de vórtice a 200 g durante 10 minutos a temperatura ambiente, luego resuspender el gránulo restante en 500 microlitros de tampón de tinción.