Para empezar, pega la oblea maestra de silicio SU8 para el diseño del canal microfluídico en el interior de una placa de Petri de plástico de 14 centímetros y límpiala con gas nitrógeno. Pesa cantidades apropiadas de polidimetilsiloxano, o base de PDMS y agente de curado de PDMS, en un vaso de papel. Con una espátula de madera, mezcle los dos hasta que la mezcla se vuelva de color blanco turbio.
Vierta la mezcla de PDMS en la placa de Petri de plástico que contiene la oblea de silicio. Luego, coloque la placa de Petri en un desecador de vacío equipado con una llave de paso de tres vías. Gire la válvula de la llave de paso para conectar el vacío a la cámara del desecador para eliminar las burbujas de aire de la mezcla.
Una vez que se hayan eliminado todas las burbujas de aire de las características de los canales, coloque la placa de Petri dentro de un horno a 70 grados centígrados durante cuatro horas. Después de que la placa de Petri se enfríe a temperatura ambiente, colóquela sobre un tapete de corte. Con un bisturí, corte la parte del PDMS que está por encima de la oblea de silicona.
Coloque el PDMS recortado entre dos hojas de la película de envoltura de laboratorio. El espacio entre la hendidura del microcanal y la película ayuda a localizar la entrada y salida del canal microfluídico. A continuación, con una cuchilla de afeitar, corte un canal individual del PDMS grande y, con los respectivos punzones de biopsia, haga los orificios de entrada y salida apropiados en el canal.
Coloque el canal perforado con el lado del canal hacia arriba sobre un portaobjetos de vidrio limpio. Coloque un sustrato de vidrio que contenga óxido de indio-estaño de película delgada, o electrodos interdigitados ITO, en el mismo portaobjetos con los electrodos hacia arriba. Luego, coloque suavemente el portaobjetos de vidrio en un limpiador de plasma.
Después de cerrar la válvula de gas y encender la bomba, espere dos minutos para obtener una lectura del sensor de 600 a 800 militorr. A continuación, encienda el interruptor de encendido y espere 30 segundos antes de girar la perilla de encendido de RF de baja a alta y esperar un minuto. Luego, para apagar el equipo, siga la secuencia inversa.
Inmediatamente después de abrir la cámara del limpiador de plasma, levante y gire el PDMS 180 grados para que el lado del canal quede hacia abajo. Coloque el canal en la parte superior del sustrato ITO para iniciar el proceso de unión. Con unas pinzas, presione suavemente las esquinas del PDMS durante unos tres segundos.
Cargue el medio de cebado en una jeringa de un mililitro con una aguja de calibre 23. Humedezca lenta y cuidadosamente el canal insertando la aguja directamente en el pozo de entrada antes de soltar el medio sin introducir burbujas de aire. Después de incubar durante al menos tres minutos, retire el medio principal con una punta de pipeta de 10 microlitros.
Finalmente, lave el canal con medio de dielectroforesis tres veces insertando el medio en el canal.
