Para comenzar, transfiera 70 mililitros de Medio Eagle Modificado de Dulbecco precalentado a una placa de Petri en un gabinete de bioseguridad estéril y agregue dexametasona a una concentración de 100 nano molares. Reúna las herramientas quirúrgicas necesarias para la disección, que incluyen pinzas lisas, rectas y de punta fina. Pinzas rectas de punta fina con dientes dentados y tijeras rectas y afiladas y finas.
Para diseccionar explantes de extremidades posteriores. Localice la articulación de la cadera de un ratón sacrificado colocado en posición supina sobre la mesa de trabajo forrada con almohadillas absorbentes debajo de la mesa. Use unas tijeras finas para crear una pequeña incisión en la piel que cubra los aspectos proximal y anterior de la parte superior de la pierna.
Luego, use los dedos para separar la incisión para expandir y pellizcar la parte superior de la pierna expuesta. Tire con cuidado de la piel distalmente para desenguantar la extremidad posterior hasta el nivel del tobillo. Inserte una hoja de tijera suavemente debajo de la piel a lo largo de la cara dorsal del pie.
A continuación, haz una incisión que se extienda hacia los dedos de los pies y continúa tirando de la piel distalmente hasta que se retire por completo. Coloque el ratón para tener una visión clara de la inserción del tendón de Aquiles en la cara posterior del calcáneo cerca del tobillo. Para quitar el tendón de la terraza de la planta, inserte una punta de las pinzas de punta fina y lisa entre los dos tendones.
Pase la punta medialmente por debajo del tendón plantar. A continuación, tire de él proximalmente para desgarrar el músculo plantar. Luego, con pinzas dentadas de punta fina, agarre el extremo proximal separado del tendón plantar y tire de él distalmente para eliminarlo por completo.
En la articulación de la cadera, emplee unas tijeras finas para cortar con precisión la pelvis, aislando la extremidad posterior. Usa las tijeras para quitar suavemente la pelvis restante, revelando la cabeza femoral. En la cabina de bioseguridad, transfiera el explante de la extremidad posterior a la placa que contiene los medios de cultivo celular y dexametasona.
Vuelva a colocar la placa en la incubadora y someterla a un tratamiento previo durante 48 horas.
