Para comenzar, coloque el mouse en una bandeja de disección equipada con un cono nasal para la administración de anestesia. Verifique los reflejos del animal, como la retracción de las patas, para confirmar que la anestesia ha alcanzado una profundidad adecuada. A continuación, coloque el ratón para exponer la piel dorsal.
Humedece la piel con una gran cantidad de etanol al 70% para evitar el desprendimiento del cabello. Haz una incisión a lo largo de la espalda, comenzando desde la parte inferior del tórax y extiéndela hasta el cuello. Con unas pinzas de punta doblada, levante suavemente el tejido adiposo marrón interescapular y corte con cuidado el tejido adjunto.
Levante la almohadilla de grasa hacia la cabeza y continúe cortando los tejidos adheridos para abrir con cuidado la región hasta que la vena de Sulzer quede expuesta. Ahora, corta con cuidado la vena del Sulzer. Utilizando la punta de pipeta de 200 microlitros y una pipeta P100, recoja aproximadamente 40 microlitros de sangre y almacene la sangre recolectada en un tubo de extracción de sangre.
Mantenga el tubo en hielo hasta el proceso de recolección del suero. Humedecer generosamente la piel ventral con etanol al 70% para evitar el desprendimiento del vello. Con unas tijeras, abra con cuidado la cavidad torácica para exponer el corazón.
Con una jeringa de un mililitro equipada con una aguja de media pulgada de calibre 29, perfore con precisión el área del ápice del ventrículo izquierdo. Inserte dos tercios de la aguja aproximadamente de tres a cinco milímetros hacia la horizontal derecha del ápice cardíaco y tire de la jeringa hacia atrás para recolectar sangre del ventrículo izquierdo. A continuación, centrifugar las muestras de sangre a 10.000 g durante 10 minutos a cuatro grados centígrados.
Con una pipeta, recoja el sobrenadante y proceda a la extracción y análisis de metabolitos.
