Después de sacrificar el ratón, colóquelo sobre una superficie de espuma y asegure las extremidades delanteras con cinta adhesiva o alfileres. Use unas tijeras de operación para cortar ambas extremidades traseras por encima de las rodillas. Transfiera cada extremidad posterior a una cámara de disección separada y agregue la solución fría de Tyrode para cubrir el tejido.
Sujete la primera extremidad posterior a la cámara de disección, asegurándose de que la cara posterior de las patas sea visible. Con aumento, retire la piel, luego exponga y extirpe el músculo flexor corto de los dedos o FDB. Guarde el músculo FDB en un frasco de vidrio etiquetado que contenga un mililitro de solución de Tyrode.
Con unas tijeras finas, separe el músculo gastrocnemio y luego extirpe el músculo sóleo. Retire la piel de la cara anterior de la pierna. Luego, identifique los tendones distales del tibial anterior y los músculos extensores largos de los dedos o EDL en la región del tobillo.
Retire y deseche los tibialis. Luego, corte los tendones distales de la EDL y continúe la disección para eliminar completamente el músculo EDL. Después de identificar el músculo extensor largo del dedo gordo o EHL, comience la disección siguiendo el tendón hasta el primer dedo.
A continuación, identifique y siga el tendón más externo del peroneo para cortarlo y extirpar el músculo peroneo largo o PL. Identifique y trace el tendón hasta el cuarto dígito. A continuación, corta y retira el músculo peroneo de los dedos cuartizos o PDQA.
Después de diseccionar la segunda extremidad trasera, reúna los músculos del mismo tipo en un frasco de vidrio etiquetado que contenga la solución de Tyrode. Vuelve a colocar la solución del Tirodo en la cámara de disección para eliminar los residuos y el pelo de los ratones. Vierta los músculos PL en la cámara de disección y verifique su integridad y contracción.
Realizar cortes longitudinales o diagonales en el músculo sóleo siguiendo el tendón central, cortando aproximadamente el 80% de su longitud. Para el músculo EDL, siga uno o dos tendones y corte aproximadamente la misma longitud que el sóleo. Transfiera cada par de músculos a un nuevo frasco de vidrio que contenga tres miligramos de colagenasa tipo 2 en solución de disociación e incube en un baño de agua a 37 grados centígrados durante 65 a 90 minutos con una suave agitación.
Después de 65 minutos de incubación, revise el vial bajo estereoscopio cada cinco minutos. Una vez que el músculo parezca ondulado y suelto, y las fibras comiencen a desprenderse, enjuague los músculos con Tyrode's a temperatura ambiente para desactivar y eliminar la colagenasa. Con un juego de pipetas Pasteur pulidas al fuego, agite la solución alrededor del músculo con una pipeta de punta de cinco milímetros.
Luego, tire suavemente de los músculos hacia adentro y hacia afuera de la punta tres o cuatro veces. A medida que los músculos comiencen a liberar fibras y se vuelvan más delgados, con una punta de cuatro milímetros, repita el procedimiento para separar más fibras.
