Gli autori esprimono la loro gratitudine al professor Robinson Ramírez di UdeA per l'aiuto con gli animali e alcune foto e a Carolina Palacios per il supporto tecnico. Johan Pineda di Kaika ci ha aiutato a configurare le telecamere a colori e a fluorescenza. Shyuan Ngo, dell'Università del Queensland, ha gentilmente corretto il manoscritto. Questo studio è stato finanziato dal CODI-UdeA (2020-34909 dal 22 febbraio 2021 e 2021-40170 dal 31 marzo 2022, SIU) e dall'Ufficio dipianificazione-UdeA (E01708-K e ES03180101), Medellín, Colombia, al JCC. I finanziatori non hanno partecipato alla raccolta e all'analisi dei dati, alla stesura o alla presentazione dei manoscritti.

Isolamento enzimatico e caratterizzazione di fibre muscolari di topo a lunghezza variabile

Gli autori dichiarano di non avere conflitti di interesse.

A complemento dei modelli disponibili per lo studio della biologia del muscolo scheletrico maturo, qui dimostriamo la dissociazione enzimatica di successo di una serie di muscoli di topo con fibre corte, intermedie e lunghe. Queste fibre permettono di dimostrare la generalizzabilità della cinetica MT-II dei transienti Ca2+ nel muscolo scheletrico. Inoltre, sono stati classificati i tipi di fibre nei muscoli intatti e interi. Dato che l'FDB è il muscolo più utilizzato per gli esperimenti fisiologici, sono st...

Il muscolo scheletrico maturo dei mammiferi è un tessuto multifunzionale. Regola pesantemente il metabolismo, è la principale fonte di produzione di calore e le sue proprietà dinamiche gli conferiscono un ruolo chiave nella respirazione, nel movimento dei segmenti corporei o nello spostamento da un punto all'altro 1,2,3. Il muscolo scheletrico è anche rilevante per la fisiopatologia di molte malattie, comprese le condizioni ereditarie e croniche, come miopatie, distrofie o sarcopenia, nonché molte condizioni croniche non muscolari, come le malattie cardiometaboliche 3,4,5,6,7,8.
Lo studio ex vivo delle proprietà strutturali e funzionali del muscolo scheletrico maturo in un contesto di salute e malattia è stato possibile principalmente attraverso due modelli sperimentali: il muscolo intero e le fibre isolate. Nel 20° secolo, i ricercatori hanno sfruttato le proprietà dell'intero muscolo estensore lungo delle dita (EDL), del soleo, del tibiale anteriore e del gastrocnemio di diverse piccole specie come modelli cardine per conoscere le unità motorie, i tipi di fibre e le proprietà dinamiche come la forza e la cinetica di contrazione e rilassamento 9,10,11,12,13,14,15,16. Tuttavia, l'avvento di studi di biologia cellulare più raffinati ha spostato l'area verso lo studio delle singole fibre muscolari. Il lavoro pionieristico ha quindi permesso l'isolamento delle fibre flessori brevi delle dita intatte (FDB) dei ratti mediante dissociazione enzimatica per la successiva caratterizzazione 17,18,19. Sebbene le fibre FDB possano essere ottenute anche mediante dissezione manuale20, la facilità e l'elevata produttività della dissociazione enzimatica dei muscoli murini, oltre alla loro idoneità per una varietà di approcci sperimentali, hanno reso quest'ultimo modello ampiamente utilizzato negli ultimi due decenni.
Le fibre corte FDB sono adatte per studi elettrofisiologici e altri studi biofisici, analisi biochimiche, metaboliche e farmacologiche, esperimenti di microscopia elettronica e fluorescenza, trasfezione per approcci di biologia cellulare o come fonte di cellule staminali negli studi di miogenesi 5,21,22,23,24,25,26,27,28, 29,30,31,32. Tuttavia, l'utilizzo di sole fibre FDB negli esperimenti muscolari restringe l'ambito della ricerca che si occupa dei tipi di fibre e limita la quantità di materiale biologico disponibile per alcune tecniche metodologiche o per ottenere maggiori informazioni da un animale. Queste limitazioni ostacolano una chiara correlazione dei fenomeni fisiologici cellulari con precedenti studi biochimici e dinamici eseguiti in diversi muscoli interi, intatti (ad esempio, EDL, soleo, peronei).
Superando queste limitazioni, alcuni gruppi sono riusciti a dissociare i muscoli EDL e soleo più lunghi 24,33,34,35,36,37,38,39,40, aprendo la porta ad un'ulteriore estensione del metodo ad altri muscoli rilevanti. Tuttavia, l'uso di EDL e fibre soleo è ancora scarso, probabilmente a causa della mancanza di dettagli metodologici per ottenerle come fibre intatte. Qui descriviamo in dettaglio come isolare fibre di diverse lunghezze e tipi da sei muscoli: tre di essi già descritti (FDB, EDL e soleo) e tre di essi dissociati con successo per la prima volta (estensore lungo dell'alluce [EHL], peroneo lungo [PL] e peroneo delle dita quarti [PDQA]). I risultati del presente lavoro confermano che il modello di fibre enzimaticamente dissociate è adatto per un'ampia gamma di studi e future correlazioni con dati precedentemente pubblicati, aumentando così la disponibilità di modelli per studi sul muscolo scheletrico maturo.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absolute ethanol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>32221</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>Merck</td>
			<td>179124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acrylamide</td>
			<td>Gibco BRL</td>
			<td>15512-015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium persulfate</td>
			<td>Panreac</td>
			<td>141138.1610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti myosin I antibody</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M4276</td>
			<td>Primary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti myosin II antibody</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M8421</td>
			<td>Primary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti myosin IIA antibody</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>SC-71</td>
			<td>Primary antibody. Derived from HB-277 hybridoma</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti myosin IIB antibody</td>
			<td>Developmental Studies Hybridoma Bank</td>
			<td>BF-F3-c&#160;</td>
			<td>Primary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bis-acrylamide</td>
			<td>AMRESCO</td>
			<td>0172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>B14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bradford reagent</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.10306.0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bromophenol blue</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>428658</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium carbonate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>102066</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium dichloride (CaCl2)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>2389</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>319988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase type 2</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>CLS-2/LS004176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consul-Mount</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>9990440</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coomassie Brilliant blue R 250&#160;</td>
			<td>Merck</td>
			<td>112553</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dithiothreitol (DTT)</td>
			<td>AMRESCO</td>
			<td>0281</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Edetic acid (EDTA</td>
			<td>AMRESCO</td>
			<td>0322</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E4009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Panreac&#160;</td>
			<td>1423291211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Panreac</td>
			<td>151340.1067</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G9023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>6765015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>AMRESCO</td>
			<td>0511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst 33258</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>861405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imidazole</td>
			<td>AMRESCO</td>
			<td>M136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopentane</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M32631</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>L2020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mag-Fluo-4, AM</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>M14206</td>
			<td>Prepared only in DMSO. Pluronic acid is not required and should not be used to avoid fiber deterioration.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mercaptoethanol</td>
			<td>Applichem</td>
			<td>A11080100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Protokimica</td>
			<td>MP10043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mice</td>
			<td>Several</td>
			<td>Several</td>
			<td>For this manuscript, we only used C57BL/6 mice. However, some preliminary results have shown that the protocol works well for Swiss Webster mice of the same age and weight.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mowiol 4-88</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>81381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N,N,N&#39;,N&#39;-tetramethylethane-1,2-diamine (TEMED)</td>
			<td>Promega</td>
			<td>V3161</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-benzyl-p-toluene sulphonamide (BTS)</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>1870</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optimal cutting compound (OCT)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>6769006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secondary antibody</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A-11001</td>
			<td>Goat anti-mouse IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dodecil sulfate</td>
			<td>Panreac&#160;</td>
			<td>1323631209</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIS 0.5 M, pH 6.8&#160;</td>
			<td>AMRESCO</td>
			<td>J832</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris(Hydroxymethyl)aminomethane</td>
			<td>AMRESCO</td>
			<td>M151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>AMRESCO</td>
			<td>M143</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Materials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection chamber</td>
			<td>Custom-made</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Charged slides</td>
			<td>Erie Scientific</td>
			<td>5951PLUS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Experimental bath chamber</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>RC-27NE2</td>
			<td>Narrow Bath Chamber with Field Stimulation, ensembled on a heated platform PH-6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500338, 500230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissors</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>Vannas Scissors 501778</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Pasteur pipettes</td>
			<td>Several</td>
			<td></td>
			<td>Fire-polished tips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass vials with cap</td>
			<td>Several</td>
			<td></td>
			<td>2-3 mL volumen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating scissors</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501223-G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>SL 8R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>FV1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Leica</td>
			<td>CM1850</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital camera</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Erc 5s and Axio 305</td>
			<td>Axio 305, coupled to the Stemi 508 stereoscope, was used to take pictures during dissection; while Erc 5s or Axio 208, coupled to the Axio Observer A1 microscope, were used to take images of the isolated fibers and the immunofluorescence assays</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digitizer</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>1550A Digidata</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrophoresis chamber</td>
			<td>Bio Rad</td>
			<td>Mini-Protean IV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope coupled to fluorescence</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axio Observer A1</td>
			<td>Coupled to an appropriate light source, filters and objectives for fluorescence</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photomultiplier</td>
			<td>Horiba</td>
			<td>R928 tube, Hamamatsu, in a D104 photometer, Horiba</td>
			<td>Coupled to the lateral port of the fluorescence microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereoscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Stemi 508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stimulator&#160;</td>
			<td>Grass Instruments&#160;</td>
			<td>S6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath&#160;</td>
			<td>Memmert</td>
			<td>WNE-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xilol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>808691</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Free software for electrophoreses analyses</td>
			<td>University of Kentucky</td>
			<td>GelBandFitter v1.7</td>
			<td>http://www.gelbandfitter.org</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Free software for image analysis and morphometry</td>
			<td>National Institutes of Health</td>
			<td>ImageJ v1.54</td>
			<td>https://imagej.nih.gov/ij/index.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Licensed software for Ca2+ signals acquisition and analyses</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>pCLAMP v10.05</td>
			<td>https://www.moleculardevices.com</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Licensed software for statistical analyses and graphing</td>
			<td>OriginLab</td>
			<td>OriginPro 2019</td>
			<td>https://www.originlab.com/</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intact short, intermediate, and long skeletal muscle fibers obtained by enzymatic dissociation of six hindlimb muscles of mice: beyond flexor digitorum brevis

Le fibre muscolari scheletriche ottenute dalla dissociazione enzimatica dei muscoli del topo sono un modello utile per esperimenti fisiologici. Tuttavia, la maggior parte degli articoli si occupa delle fibre corte del flessore breve delle dita (FDB), il che limita la portata dei risultati relativi ai tipi di fibre, limita la quantità di materiale biologico disponibile e impedisce una chiara connessione tra i fenomeni fisiologici cellulari e le precedenti conoscenze biochimiche e dinamiche ottenute in altri muscoli.
Questo articolo descrive come ottenere fibre intatte da sei muscoli con diversi profili e lunghezze di tipo di fibra. Utilizzando topi adulti C57BL/6, mostriamo il protocollo di dissezione muscolare e isolamento delle fibre e dimostriamo l'idoneità delle fibre per studi transitori di Ca2+ e la loro caratterizzazione morfometrica. Viene anche presentata la composizione del tipo di fibra dei muscoli. Quando sono stati dissociati, tutti i muscoli sono diventati intatti, fibre vive che si contraggono rapidamente per più di 24 ore. FDB ha dato fibre corte (<1 mm), peroneo dita quarti (PDQA) e peroneo lungo (PL) intermedio (1-3 mm), mentre estensore lungo delle dita (EDL), estensore lungo dell'alluce (EHL) e muscolo soleo hanno rilasciato fibre lunghe (3-6 mm).
Quando sono stati registrati con il colorante veloce Mag-Fluo-4, i transienti di Ca2+ delle fibre PDQA, PL ed EHL hanno mostrato una cinetica veloce e stretta che ricorda la morfologia di tipo II (MT-II), nota per corrispondere alle fibre di tipo IIX e IIB. Ciò è coerente con il fatto che questi muscoli hanno oltre il 90% di fibre di tipo II rispetto a FDB (~80%) e soleo (~65%). Andando oltre l'FDB, dimostriamo per la prima volta la dissociazione di diversi muscoli, che rendono le fibre che coprono una gamma di lunghezze comprese tra 1 e 6 mm. Queste fibre sono vitali e danno transienti veloci di Ca2+ , indicando che l'MT-II può essere generalizzato alle fibre veloci IIX e IIB, indipendentemente dalla loro fonte muscolare. Questi risultati aumentano la disponibilità di modelli per gli studi sul muscolo scheletrico maturo.

The mature skeletal muscle of mammals is a multifunctional tissue. It heavily regulates metabolism, is the main source of heat production, and its dynamical properties confer upon it a key role in respiration, movement of body segments, or displacement from one point to another1,2,3. Skeletal muscle is also relevant for the pathophysiology of many illnesses, including inherited and chronic conditions, such as myopathies, dystrophies, or sarcopenia, as well as many non-muscle chronic conditions, such as cardiometabolic diseases3,4,5,6,7,8.
The ex vivo study of the structural and functional properties of mature skeletal muscle in the context of health and disease has been possible mainly through two experimental models: whole muscle and isolated fibers. In the 20th century, researchers exploited the properties of the whole, intact extensor digitorum longus (EDL), soleus, tibialis anterior, and gastrocnemius muscles of different small species as pivotal models to learn about motor units, fiber types, and dynamic properties such as force and kinetics of contraction and relaxation9,10,11,12,13,14,15,16. However, the advent of more refined cell biology studies moved the area toward the study of single muscle fibers. Pioneering work then enabled the isolation of intact flexor digitorum brevis (FDB) fibers of rats by enzymatic dissociation for subsequent characterization17,18,19. Although FDB fibers can also be obtained by manual dissection20, the ease and high throughput of enzymatic dissociation of murine muscles, in addition to their suitability for a variety of experimental approaches, have made the latter model widely used during the last two decades.
The short FDB fibers are suitable for electrophysiological and other biophysical studies, biochemical, metabolic, and pharmacological analyses, electron and fluorescence microscopy experiments, transfection for cell biology approaches, or as a source of stem cells in myogenesis studies5,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32. However, using only FDB fibers in muscle experiments narrows the scope of research dealing with fiber types and limits the amount of biological material available for some methodological techniques or for gaining more information from one animal. These limitations hinder a clear correlation of cellular physiological phenomena with previous biochemical and dynamical studies performed in different whole, intact, muscles (e.g., EDL, soleus, peronei).
Overcoming these limitations, some groups succeeded in dissociating the longer EDL and soleus muscles24,33,34,35,36,37,38,39,40, opening the door to further extend the method to other relevant muscles. However, the use of EDL and soleus fibers is still scarce, likely due to the lack of methodological details for getting them as intact fibers. Here, we describe in detail how to isolate fibers of different lengths and types from six muscles: three of them already described (FDB, EDL, and soleus) and three of them successfully dissociated for the first time (extensor hallucis longus [EHL], peroneus longus [PL], and peroneus digiti quarti [PDQA]). The results of the present work confirm that the model of enzymatically dissociated fibers is apt for a wide range of studies and future correlations with previously published data, thus increasing the availability of models for mature skeletal muscle studies.

Autore in primo piano: Isolamento delle fibre muscolari lunghe dai muscoli degli arti posteriori di topo per lo studio dell'accoppiamento eccitazione-contrazione tra i tipi di fibre

Fibre muscolari scheletriche corte, intermedie e lunghe intatte ottenute dalla dissociazione enzimatica di sei muscoli degli arti posteriori di topi: oltre il flessore breve delle dita

In this study, we describe a method to isolate fibers of different lengths and types from six hindlimb muscles from mice. Also, we tested the suitability of the fibers for physiological experiments dealing with the study of the excitation-contraction coupling mechanism. For years, obtaining long muscle fibers was challenge, limiting the scope of many studies in the field.Now we show that it is possible to obtain lean fibers with mouse flexors, extensors, and evertors with lengths of up to six millimeters. As an example, obtaining fibers from six different muscles has allowed us to show that the calcium transient kinetics known as morphology type II, can be generalized to type IIB and IIX regardless of the location or function of their muscle source. We believe that the model of enzymatically isolated fibers is suitable for a variety of experimental approaches with different types of technologies that allow us to answer mechanistic questions within the range of biochemistry, physiology, biophysics, cell biology, and molecular biology.

Concentrazione sarcoplasmatica di Ca2+ durante una contrazione Per dimostrare la fattibilità di esperimenti fisiologici nell'insieme delle fibre dissociate e per estendere i nostri precedenti risultati sull'accoppiamento eccitazione-contrazione (ECC) e sui tipi di fibre, i transitori di Ca2+ sono stati acquisiti nelle fibre di tutti i muscoli. In primo luogo, FDB (n = 5) e EDL (n = 7) hanno mostrato una cinetica di Ca2+ nota come morfologia di tipo II (MT-II). Si trat...

Watch this Scientific Journal Video about Intact Short, Intermediate, and Long Skeletal Muscle Fibers Obtained by Enzymatic Dissociation of Six Hindlimb Muscles of Mice: Beyond Flexor Digitorum Brevis

Descriviamo un protocollo per ottenere fibre enzimaticamente dissociate di diverse lunghezze e tipologie da sei muscoli di topi adulti: tre di essi già descritti (flessore breve delle dita, estensore lungo delle dita, soleo) e tre di essi dissociati con successo per la prima volta (estensore lungo dell'alluce, peroneo lungo, peroneo delle dita quarti).

Skeletal muscle fibers obtained by enzymatic dissociation of mouse muscles are a useful model for physiological experiments. However, most papers deal ...

In questo studio, descriviamo un metodo per isolare fibre di diverse lunghezze e tipi da sei muscoli degli arti posteriori dei topi. Inoltre, abbiamo testato l'idoneità delle fibre per esperimenti fisiologici riguardanti lo studio del meccanismo di accoppiamento eccitazione-contrazione. Per anni, ottenere fibre muscolari lunghe è stata una sfida, limitando la portata di molti studi sul campo.Ora mostriamo che è possibile ottenere fibre magre con flessori, estensori ed evertori di topo con lunghezze fino a sei millimetri. Ad esempio, l'ottenimento di fibre da sei diversi muscoli ci ha permesso di dimostrare che la cinetica transitoria del calcio, nota come morfologia di tipo II, può essere generalizzata al tipo IIB e IIX indipendentemente dalla posizione o dalla funzione della loro fonte muscolare. Riteniamo che il modello di fibre enzimaticamente isolate sia adatto a una varietà di approcci sperimentali con diversi tipi di tecnologie che ci consentono di rispondere a domande meccanicistiche nell'ambito della biochimica, della fisiologia, della biofisica, della biologia cellulare e della biologia molecolare.

intact-short-intermediate-long-skeletal-muscle-fibers-obtained

Research

JoVE Journal

Biology

Intact Short, Intermediate, and Long Skeletal Muscle Fibers Obtained by Enzymatic Dissociation of Six Hindlimb Muscles of Mice: Beyond Flexor Digitorum Brevis

855 Views.  University of Antioquia. In questo studio, descriviamo un metodo per isolare fibre di diverse lunghezze e tipi da sei muscoli degli arti posteriori dei topi. Inoltre, abbiamo testato l'idoneità delle fibre per esperimenti fisiologici riguardanti lo studio del meccanismo di accoppiamento eccitazione-contrazione. Per anni, ottenere fibre muscolari lunghe è stata una sfida, limitando la portata di molti studi sul campo.Ora mostriamo che è possibile ottenere fibre magre con flessori, estensori ed evertori di to...

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