저자들은 동물과 사진에 도움을 준 UdeA의 Robinson Ramírez 교수와 기술 지원을 해준 Carolina Palacios에게 감사를 표합니다. Kaika의 Johan Pineda는 컬러 및 형광 카메라를 설치하는 데 도움을 주었습니다. 퀸즐랜드 대학교(University of Queensland)의 슈위안 응오(Shyuan Ngo)가 친절하게 원고를 교정해 주었습니다. 이 연구는 CODI-UdeA(2021년 2월 22일부터 2020-34909, 2022년 3월 31일부터 2021-40170, SIU) 및 콜롬비아 메데인에 있는 Planning Office-UdeA(E01708-K 및 ES03180101)의 자금 지원을 받았습니다. 자금 제공자는 데이터 수집 및 분석, 원고 작성 또는 제출에 참여하지 않았습니다.

다양한 길이의 마우스 근육 섬유의 효소 분리 및 특성화

저자는 이해 상충이 없음을 선언합니다.

성숙한 골격근 생물학을 연구하는 데 사용할 수 있는 모델을 보완하기 위해 여기서는 단섬유, 중섬유, 장섬유를 가진 다양한 쥐 근육의 성공적인 효소 해리를 보여줍니다. 이 섬유는 골격근에서 Ca2+ 과도 현상의 MT-II 동역학의 일반화 가능성을 입증할 수 있습니다. 또한, 온전한 전체 근육의 섬유 유형을 분류했습니다. FDB가 생리학적 실험에 가장 많이 사용되는 근육이라는 점을 감안할 때,...

포유류의 성숙한 골격근은 다기능 조직입니다. 그것은 신진 대사를 심하게 조절하고 열 생산의 주요 원천이며 동적 특성은 호흡, 신체 부분의 움직임 또는 한 지점에서 다른 지점으로의 변위에 중요한 역할을 부여합니다 1,2,3. 골격근은 또한 근육병증, 이영양증 또는 근감소증과 같은 유전 및 만성 질환뿐만 아니라 심장 대사 질환과 같은 많은 비근육 만성 질환을 포함한 많은 질병의 병태생리학과 관련이 있습니다 3,4,5,6,7,8.
건강과 질병의 맥락에서 성숙한 골격근의 구조적 및 기능적 특성에 대한 생체 외 연구는 주로 전체 근육과 분리 섬유의 두 가지 실험 모델을 통해 가능했습니다. 20세기에 연구자들은 다양한 작은 종의 온전한 장신근(EDL), 가자미근, 전경골 및 비복근 전체의 특성을 중추적인 모델로 활용하여 운동 단위, 섬유 유형, 수축 및 이완의 힘 및 운동과 같은 동적 특성에 대해 학습했습니다 9,10,11,12,13,14,15,16. 그러나 보다 정교한 세포 생물학 연구의 출현으로 이 분야는 단일 근육 섬유 연구로 이동했습니다. 선구적인 연구는 후속 특성 분석을 위한 효소 해리를 통해 쥐의 온전한 굴곡근 디지토룸 브레비스(FDB) 섬유를 분리할 수 있게 했습니다 17,18,19. FDB 섬유는 수동 해부에 의해서도 얻어질 수 있지만(20), 쥐 근육의 효소 해리의 용이성과 높은 처리량은 다양한 실험적 접근법에 대한 적합성 외에도 후자의 모델을 지난20년 동안 널리 사용하게 만들었다.
짧은 FDB 섬유는 전기 생리학 및 기타 생물 물리학 연구, 생화학, 대사 및 약리학 분석, 전자 및 형광 현미경 실험, 세포 생물학 접근법을 위한 형질 주입 또는 근육 형성 연구 5,21,22,23,24,25,26,27,28 에서 줄기 세포의 공급원으로 적합합니다. 29,30,31,32입니다. 그러나 근육 실험에서 FDB 섬유만 사용하면 섬유 유형을 다루는 연구 범위가 좁아지고 일부 방법론적 기술이나 한 동물로부터 더 많은 정보를 얻는 데 사용할 수 있는 생물학적 물질의 양이 제한됩니다. 이러한 한계는 세포 생리학적 현상과 다른 온전한 근육(예: EDL, 가자미, 페로네이)에서 수행된 이전의 생화학 및 역학 연구와의 명확한 상관관계를 방해합니다.
이러한 한계를 극복한 일부 그룹은 더 긴 EDL 및 가자미근 24,33,34,35,36,37,38,39,40을 해리하는 데 성공하여 다른 관련 근육으로 방법을 더욱 확장할 수 있는 문을 열었습니다. 그러나 EDL 및 가자미 섬유의 사용은 여전히 드물며, 이는 온전한 섬유로 얻기 위한 방법론적 세부 사항이 부족하기 때문일 수 있습니다. 여기에서는 6개의 근육에서 길이와 유형이 다른 섬유를 분리하는 방법을 자세히 설명합니다: 그 중 3개는 이미 설명한 근육(FDB, EDL 및 가자미)이고 그 중 3개는 처음으로 성공적으로 해리되었습니다(extensor hallucis longus [EHL], peroneus longus [PL] 및 peroneus digiti quarti [PDQA]). 본 연구의 결과는 효소로 해리된 섬유의 모델이 광범위한 연구 및 이전에 발표된 데이터와의 향후 상관 관계에 적합하다는 것을 확인시켜 성숙한 골격근 연구를 위한 모델의 가용성을 높입니다.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absolute ethanol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>32221</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>Merck</td>
			<td>179124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acrylamide</td>
			<td>Gibco BRL</td>
			<td>15512-015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium persulfate</td>
			<td>Panreac</td>
			<td>141138.1610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti myosin I antibody</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M4276</td>
			<td>Primary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti myosin II antibody</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M8421</td>
			<td>Primary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti myosin IIA antibody</td>
			<td>American Type Culture Collection</td>
			<td>SC-71</td>
			<td>Primary antibody. Derived from HB-277 hybridoma</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti myosin IIB antibody</td>
			<td>Developmental Studies Hybridoma Bank</td>
			<td>BF-F3-c&#160;</td>
			<td>Primary antibody</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bis-acrylamide</td>
			<td>AMRESCO</td>
			<td>0172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>B14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bradford reagent</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.10306.0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bromophenol blue</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>428658</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium carbonate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>102066</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium dichloride (CaCl2)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>2389</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>319988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase type 2</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>CLS-2/LS004176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consul-Mount</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>9990440</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coomassie Brilliant blue R 250&#160;</td>
			<td>Merck</td>
			<td>112553</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dithiothreitol (DTT)</td>
			<td>AMRESCO</td>
			<td>0281</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Edetic acid (EDTA</td>
			<td>AMRESCO</td>
			<td>0322</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin Y</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E4009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Panreac&#160;</td>
			<td>1423291211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td>Panreac</td>
			<td>151340.1067</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G9023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>6765015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>AMRESCO</td>
			<td>0511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst 33258</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>861405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imidazole</td>
			<td>AMRESCO</td>
			<td>M136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopentane</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M32631</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>L2020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mag-Fluo-4, AM</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>M14206</td>
			<td>Prepared only in DMSO. Pluronic acid is not required and should not be used to avoid fiber deterioration.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mercaptoethanol</td>
			<td>Applichem</td>
			<td>A11080100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Protokimica</td>
			<td>MP10043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mice</td>
			<td>Several</td>
			<td>Several</td>
			<td>For this manuscript, we only used C57BL/6 mice. However, some preliminary results have shown that the protocol works well for Swiss Webster mice of the same age and weight.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mowiol 4-88</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>81381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N,N,N&#39;,N&#39;-tetramethylethane-1,2-diamine (TEMED)</td>
			<td>Promega</td>
			<td>V3161</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-benzyl-p-toluene sulphonamide (BTS)</td>
			<td>Tocris</td>
			<td>1870</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optimal cutting compound (OCT)</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>6769006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Secondary antibody</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>A-11001</td>
			<td>Goat anti-mouse IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dodecil sulfate</td>
			<td>Panreac&#160;</td>
			<td>1323631209</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIS 0.5 M, pH 6.8&#160;</td>
			<td>AMRESCO</td>
			<td>J832</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris(Hydroxymethyl)aminomethane</td>
			<td>AMRESCO</td>
			<td>M151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>AMRESCO</td>
			<td>M143</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Materials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection chamber</td>
			<td>Custom-made</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Charged slides</td>
			<td>Erie Scientific</td>
			<td>5951PLUS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Experimental bath chamber</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>RC-27NE2</td>
			<td>Narrow Bath Chamber with Field Stimulation, ensembled on a heated platform PH-6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500338, 500230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissors</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>Vannas Scissors 501778</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Pasteur pipettes</td>
			<td>Several</td>
			<td></td>
			<td>Fire-polished tips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass vials with cap</td>
			<td>Several</td>
			<td></td>
			<td>2-3 mL volumen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating scissors</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501223-G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>SL 8R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>FV1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Leica</td>
			<td>CM1850</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital camera</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Erc 5s and Axio 305</td>
			<td>Axio 305, coupled to the Stemi 508 stereoscope, was used to take pictures during dissection; while Erc 5s or Axio 208, coupled to the Axio Observer A1 microscope, were used to take images of the isolated fibers and the immunofluorescence assays</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digitizer</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>1550A Digidata</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrophoresis chamber</td>
			<td>Bio Rad</td>
			<td>Mini-Protean IV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope coupled to fluorescence</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axio Observer A1</td>
			<td>Coupled to an appropriate light source, filters and objectives for fluorescence</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photomultiplier</td>
			<td>Horiba</td>
			<td>R928 tube, Hamamatsu, in a D104 photometer, Horiba</td>
			<td>Coupled to the lateral port of the fluorescence microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereoscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Stemi 508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stimulator&#160;</td>
			<td>Grass Instruments&#160;</td>
			<td>S6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath&#160;</td>
			<td>Memmert</td>
			<td>WNE-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xilol</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>808691</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Free software for electrophoreses analyses</td>
			<td>University of Kentucky</td>
			<td>GelBandFitter v1.7</td>
			<td>http://www.gelbandfitter.org</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Free software for image analysis and morphometry</td>
			<td>National Institutes of Health</td>
			<td>ImageJ v1.54</td>
			<td>https://imagej.nih.gov/ij/index.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Licensed software for Ca2+ signals acquisition and analyses</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>pCLAMP v10.05</td>
			<td>https://www.moleculardevices.com</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Licensed software for statistical analyses and graphing</td>
			<td>OriginLab</td>
			<td>OriginPro 2019</td>
			<td>https://www.originlab.com/</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intact short, intermediate, and long skeletal muscle fibers obtained by enzymatic dissociation of six hindlimb muscles of mice: beyond flexor digitorum brevis

쥐 근육의 효소 해리에 의해 얻어진 골격근 섬유는 생리학적 실험에 유용한 모델이다. 그러나 대부분의 논문은 굴곡근 골곡근(FDB)의 단섬유를 다루고 있는데, 이는 섬유종을 다루는 결과의 범위를 제한하고, 이용 가능한 생물학적 물질의 양을 제한하며, 세포 생리학적 현상과 다른 근육에서 얻은 이전의 생화학적 및 역학적 지식 사이의 명확한 연결을 방해합니다.
이 논문은 서로 다른 섬유 유형 프로파일과 길이를 가진 6개의 근육에서 온전한 섬유를 얻는 방법을 설명합니다. C57BL/6 성체 마우스를 사용하여 근육 해부 및 섬유 분리 프로토콜을 보여주고 Ca2+ 과도 연구 및 형태학적 특성 분석에 대한 섬유의 적합성을 입증합니다. 근육의 섬유 유형 구성도 제시됩니다. 해리되면 모든 근육이 온전하게 되어 24시간 이상 활발하게 수축하는 살아있는 섬유가 됩니다. FDB는 짧은(<1mm), 비골 사중사(PDQA) 및 장비골(PL)은 중간(1-3mm)을 제공하는 반면, 장신근(EDL), 장신근(EHL) 및 가자미근은 긴(3-6mm) 섬유를 방출합니다.
고속 염료 Mag-Fluo-4로 기록했을 때 PDQA, PL 및 EHL 섬유의 Ca2+ 과도 현상은 IIX 및 IIB 섬유에 해당하는 것으로 알려진 형태 유형 II(MT-II)를 연상시키는 빠르고 좁은 동역학을 보여주었습니다. 이것은 이 근육이 FDB(~80%) 및 가자미(~65%)에 비해 90% 이상의 유형 II 섬유를 가지고 있다는 사실과 일치합니다. FDB를 넘어 우리는 처음으로 1mm에서 6mm 사이의 길이 범위에 걸쳐 있는 섬유를 렌더링하는 여러 근육의 해리를 시연합니다. 이러한 섬유는 생존 가능하며 빠른 Ca2+ 과도 현상을 제공하므로 MT-II는 근육 공급원에 관계없이 IIX 및 IIB 고속 섬유로 일반화될 수 있습니다. 이러한 결과는 성숙한 골격근 연구를 위한 모델의 가용성을 높입니다.

The mature skeletal muscle of mammals is a multifunctional tissue. It heavily regulates metabolism, is the main source of heat production, and its dynamical properties confer upon it a key role in respiration, movement of body segments, or displacement from one point to another1,2,3. Skeletal muscle is also relevant for the pathophysiology of many illnesses, including inherited and chronic conditions, such as myopathies, dystrophies, or sarcopenia, as well as many non-muscle chronic conditions, such as cardiometabolic diseases3,4,5,6,7,8.
The ex vivo study of the structural and functional properties of mature skeletal muscle in the context of health and disease has been possible mainly through two experimental models: whole muscle and isolated fibers. In the 20th century, researchers exploited the properties of the whole, intact extensor digitorum longus (EDL), soleus, tibialis anterior, and gastrocnemius muscles of different small species as pivotal models to learn about motor units, fiber types, and dynamic properties such as force and kinetics of contraction and relaxation9,10,11,12,13,14,15,16. However, the advent of more refined cell biology studies moved the area toward the study of single muscle fibers. Pioneering work then enabled the isolation of intact flexor digitorum brevis (FDB) fibers of rats by enzymatic dissociation for subsequent characterization17,18,19. Although FDB fibers can also be obtained by manual dissection20, the ease and high throughput of enzymatic dissociation of murine muscles, in addition to their suitability for a variety of experimental approaches, have made the latter model widely used during the last two decades.
The short FDB fibers are suitable for electrophysiological and other biophysical studies, biochemical, metabolic, and pharmacological analyses, electron and fluorescence microscopy experiments, transfection for cell biology approaches, or as a source of stem cells in myogenesis studies5,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32. However, using only FDB fibers in muscle experiments narrows the scope of research dealing with fiber types and limits the amount of biological material available for some methodological techniques or for gaining more information from one animal. These limitations hinder a clear correlation of cellular physiological phenomena with previous biochemical and dynamical studies performed in different whole, intact, muscles (e.g., EDL, soleus, peronei).
Overcoming these limitations, some groups succeeded in dissociating the longer EDL and soleus muscles24,33,34,35,36,37,38,39,40, opening the door to further extend the method to other relevant muscles. However, the use of EDL and soleus fibers is still scarce, likely due to the lack of methodological details for getting them as intact fibers. Here, we describe in detail how to isolate fibers of different lengths and types from six muscles: three of them already described (FDB, EDL, and soleus) and three of them successfully dissociated for the first time (extensor hallucis longus [EHL], peroneus longus [PL], and peroneus digiti quarti [PDQA]). The results of the present work confirm that the model of enzymatically dissociated fibers is apt for a wide range of studies and future correlations with previously published data, thus increasing the availability of models for mature skeletal muscle studies.

저자 스포트라이트: Isolation of Long Muscle Fibers from Mouse Hindlimb Muscles for Studying Excitation-Contraction Coupling Across Fiber Across Excitation-Contraction Coupling (섬유 유형 간 흥분-수축 결합 연구를 위한 쥐 뒷다리 근

생쥐의 6개 뒷다리 근육의 효소 해리로 얻은 온전한 짧은, 중간 및 긴 골격근 섬유: Beyond Flexor Digitorum Brevis

In this study, we describe a method to isolate fibers of different lengths and types from six hindlimb muscles from mice. Also, we tested the suitability of the fibers for physiological experiments dealing with the study of the excitation-contraction coupling mechanism. For years, obtaining long muscle fibers was challenge, limiting the scope of many studies in the field.Now we show that it is possible to obtain lean fibers with mouse flexors, extensors, and evertors with lengths of up to six millimeters. As an example, obtaining fibers from six different muscles has allowed us to show that the calcium transient kinetics known as morphology type II, can be generalized to type IIB and IIX regardless of the location or function of their muscle source. We believe that the model of enzymatically isolated fibers is suitable for a variety of experimental approaches with different types of technologies that allow us to answer mechanistic questions within the range of biochemistry, physiology, biophysics, cell biology, and molecular biology.

경련 중 Sarcoplasmic Ca2+ 농도 해리된 섬유 세트에서 생리학적 실험의 타당성을 입증하고 여기-수축 결합(ECC) 및 섬유 유형에 대한 이전 결과를 확장하기 위해 모든 근육의 섬유에서 Ca2+ 과도 현상을 획득했습니다. 먼저, FDB(n=5) 및 EDL(n=7)은 형태형 II(MT-II)로 알려진Ca2+ 동역학을 나타냈다. 이들은 RT가 ~ 1ms 동안 지속되는 빠르고 뾰족한 신호입니다. 붕괴 단계는 ?...

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우리는 성인 마우스의 6개 근육에서 다양한 길이와 유형의 효소로 해리된 섬유를 얻기 위한 프로토콜을 설명합니다: 그 중 3개는 이미 설명되었고(flexor digitorum brevis, extensor digitorum longus, soleus) 그 중 3개는 처음으로 성공적으로 해리되었습니다(extensor hallucis longus, peroneus longus, peroneus digiti quarti).

Skeletal muscle fibers obtained by enzymatic dissociation of mouse muscles are a useful model for physiological experiments. However, most papers deal ...

이 연구에서는 생쥐의 6개 뒷다리 근육에서 다양한 길이와 유형의 섬유를 분리하는 방법을 설명합니다. 또한 여기-수축 결합 메커니즘 연구를 다루는 생리학적 실험에 대한 섬유의 적합성을 테스트했습니다. 수년 동안 긴 근섬유를 얻는 것은 어려운 일이었기 때문에 이 분야의 많은 연구의 범위가 제한되었습니다.이제 우리는 최대 6mm 길이의 마우스 굴곡근, 신근 및 에버터를 사용하여 희박한 섬유를 얻을 수 있음을 보여줍니다. 예를 들어, 6개의 서로 다른 근육에서 섬유를 얻음으로써 형태학 유형 II로 알려진 칼슘 일시적 동역학이 근육 공급원의 위치나 기능에 관계없이 유형 IIB 및 IIX로 일반화될 수 있음을 보여줄 수 있었습니다. 우리는 효소로 분리된 섬유 모델이 생화학, 생리학, 생물물리학, 세포 생물학 및 분자 생물학 범위 내에서 기계론적 질문에 답할 수 있는 다양한 유형의 기술을 사용하여 다양한 실험적 접근 방식에 적합하다고 믿습니다.

intact-short-intermediate-long-skeletal-muscle-fibers-obtained

Research

JoVE Journal

Biology

Intact Short, Intermediate, and Long Skeletal Muscle Fibers Obtained by Enzymatic Dissociation of Six Hindlimb Muscles of Mice: Beyond Flexor Digitorum Brevis

878 조회수.  University of Antioquia. 이 연구에서는 생쥐의 6개 뒷다리 근육에서 다양한 길이와 유형의 섬유를 분리하는 방법을 설명합니다. 또한 여기-수축 결합 메커니즘 연구를 다루는 생리학적 실험에 대한 섬유의 적합성을 테스트했습니다. 수년 동안 긴 근섬유를 얻는 것은 어려운 일이었기 때문에 이 분야의 많은 연구의 범위가 제한되었습니다.이제 우리는 최대 6mm 길이의 마우스 굴곡근, 신근 및 에?...

비디오: 저자 스포트라이트: Isolation of Long Muscle Fibers from Mouse Hindlimb Muscles for Studying Excitation-Contraction Coupling Across Fiber Across Excitation-Contraction Coupling (섬유 유형 간 흥분-수축 결합 연구를 위한 쥐 뒷다리 근