Para empezar, pipetee 92,7 microlitros de tampón A en un tubo vacío de 1,5 mililitros. Luego agregue DTT, ADP de sodio, cloruro de magnesio, L-ornitina y las enzimas. Después de mezclar suavemente la solución, agréguela encima de 66,6 microlitros de los proteoliposomas preformados.
Congele rápidamente la mezcla en nitrógeno líquido, luego descongélela en un baño de hielo con agua a aproximadamente 10 grados centígrados. Pase la mezcla de encapsulación en la extrusora 13 veces a través de un filtro preequilibrado con tampón A, DTT, ADP de sodio y L-ornitina, y recoja la solución extruida en un tubo de 1,5 mililitros. Para determinar la síntesis de ATP, pipetee el tampón K, los proteoliposomas y los ionóforos en una cubeta de cuarzo negro con una pequeña ventana.
Precaliente la muestra a 30 grados centígrados en un fluorímetro. Ahora, adquiera los espectros de excitación de perceval HR. Cuando la señal de la sonda es constante, agregue un exceso de L-arginina y glicerol para iniciar la red metabólica y seguir la reacción a lo largo del tiempo. La adición de L-arginina a los proteoliposomas dio lugar a un fuerte aumento en la relación de la fluorescencia de la HR perceval a 500 y 430 nanómetros de excitación.
