Transfección de células HEK293T utilizando reactivo de transfección lipídica no liposomal para la producción de lentivirus

Para empezar, añade los componentes lentivirales en un tubo de 15 mililitros, y haz el volumen a 600 microlitros con tampón EC. Agregue 36 microlitros de solución potenciadora y, con una pipeta de un mililitro, mezcle repetidamente, aspirando y liberando una porción del líquido nuevamente en la solución. Después de cinco minutos, agregue 120 microlitros de reactivo de transfección y mezcle aproximadamente 20 veces, como se demostró anteriormente.

Deje el tubo a temperatura ambiente durante 10 minutos. A continuación, añada 5,2 mililitros de cDMEM al tubo. Con una pipeta de transferencia desechable, agregue gota a gota la mezcla de transfección sobre la monocapa de células HEK293T cultivadas en un matraz T175.

Distribuya el plásmido uniformemente a través de un suave movimiento de balanceo de lado a lado del matraz. Incubar el cultivo a 37 grados centígrados y 5% de dióxido de carbono durante 48 horas. Después de la incubación bajo un microscopio fluorescente, confirme la transfección efectiva de las células HEK293T mediante la observación de la fluorescencia GFP.

Ahora incline el matraz y, con una tireta serológica de 25 mililitros, recoja el medio sin alterar la monocapa celular. Transfiera el medio a un tubo de 50 mililitros preetiquetado y cierre la tapa. Agregue 25 mililitros de cDMEM caliente a lo largo de las paredes del matraz sin alterar la monocapa y devuelva el matraz a la incubadora.

Después de 24 horas, recoja el medio, agregue la solución de descontaminación en el matraz y colóquelo horizontalmente durante las siguientes 24 horas.