Después de la ejecución de LCMS de extractos de raíces de plantas, examine el cromatograma iónico total de los escaneos Q1 y Q3, incluido el escaneo de iones del producto dependiente de los datos. Observe la masa madre de iones abundantes con características similares a los alcaloides tropanos, incluida una masa inferior a 500 Daltons para el ion cargado positivamente, por lo general, un número par. Tiempos de retención entre dos y 22 minutos, y fragmentos que coinciden con valores de carga maestra consistentes con alcaloides tropanos.
Examine el cromatograma o canal de escaneo de iones precursores específicamente para la carga maestra 124 y determine qué picos o iones en los que los tiempos de retención producen este fragmento específico. Haga clic en escaneo por escaneo, a través del cromatograma y revise los espectros MS-MS completos del escaneo de iones de producto dependientes de los datos, especialmente para especies de menor abundancia. A continuación, analice los cromatogramas de barrido de iones precursores juntos para la carga maestra 122 y 140, que indican alcaloides tropanos disustituidos, y la carga maestra 138 y 156, indicativos de alcaloides tropanos trisustituidos.
Examine el cromatograma de barrido de pérdida neutra o los canales para la carga maestra 160 y 166. Identifique qué picos o iones producen pérdidas neutras y anote sus tiempos de retención. Haga clic escaneo por escaneo a través del cromatograma y compárelo con la fragmentación del escaneo de iones del producto dependiente de los datos, especialmente para las especies de menor abundancia.
Utilice la combinación de datos de escaneo de iones precursores y escaneo de pérdida neutra, respaldados por los resultados del escaneo de iones de productos dependientes de los datos, para hacer anotaciones putativas de los alcaloides observados. Comience con la masa tropana más pequeña, luego agregue la pérdida neutra y tenga en cuenta la masa restante. Comparar las anotaciones de los alcaloides con las reportadas en la literatura para determinar el patrón de sustitución de alcaloides tropanos.
Además, utilice los estándares disponibles comercialmente de los alcaloides tropanos comunes para la confirmación. El cromatograma de escaneo Q1 completo del extracto de raíz de Datura metel reveló diversos alcaloides tropanos con diferentes abundancias. Las características de la carga maestra 124, 122, 140, 138 y 156 indicaban la presencia de alcaloides tropanos.
Muchos de estos alcaloides tropanos fueron acetilados, tigloilados o derivados del ácido fenoláctico o tropical, como lo demuestran las señales en los cromatogramas de barrido de pérdida neutra. La utilización de datos espectrales permitió la anotación de alcaloides específicos, en particular la identificación de un compuesto con una masa aparente de carga maestra 224. El método permitió la deducción de una estructura compuesta a través de su patrón de fragmentación y pérdida neutra, confirmando la presencia de grupos tigloyl como sustituciones.
El examen de un extracto de agua de metanol de semillas de Datura stramonium arrojó un cromatograma de pico de base de escaneo Q1 completo, identificando un alcaloide tropano monosustituido muy abundante, probablemente hiosciamina. El espectro MS-MS de alta resolución también permite la identificación de nuevos alcaloides a partir de semillas de Datura stramonium.
