Extracción y electroporación del corazón de un embrión de ratón como método de transgénesis

Para empezar, utilice un extractor de pipetas para estirar un capilar de vidrio de 20 micrómetros de ancho. Coloque el útero de un ratón extraído sobre una toalla de papel seca. Luego, inserte la punta de un par de tijeras finas en el lado miometrial del útero y recorra lentamente el borde de la hoja a lo largo de toda la longitud y córtela.

Ahora, expón y corta la decidui. Transfiéralos a un plato con medio de crecimiento. Diseccionar la caduci para extraer los embriones.

Transfiera los embriones a una placa de Petri de 60 milímetros que contenga un medio de crecimiento cálido. Con un par de pinzas finas, corte con cuidado la cola y la cabeza del embrión, y deje solo el tronco del cuerpo. Extraiga con cuidado la mayor cantidad de tejido posible del tronco sin dañar el corazón ni las arterias pulmonares y aortas.

Inserte una nueva aguja estirada en la punta de la pipeta bucal y aspire y cargue cuidadosamente 10 microlitros de una mezcla de plásmidos preparada en la aguja estirada. Coloque un solo corazón en una placa de Petri limpia de 60 milímetros que contenga PBS precalentado. Coloque el plato bajo un microscopio de disección.

Ajuste la distancia entre los polos de los electrodos positivo y negativo a unos cuatro milímetros. A continuación, utilice una aguja en la pipeta bucal para perforar suavemente la capa más superficial del corazón. Transfiera uno o dos microlitros de la mezcla de plásmidos al corazón.

Retire la aguja con cuidado. Sostenga el electrodo en su lugar de modo que el corazón quede ubicado entre ambos polos. Luego, electropora el corazón.

Transfiera el corazón electroporado a una nueva placa de 12 pocillos, que contenga un mililitro de medio de crecimiento. Incubar la placa a 37 grados centígrados bajo un 5% de dióxido de carbono hasta el análisis.