Para preparar la suspensión unicelular de médula ósea de la calvaria de ratón, bajo un microscopio de disección, despegue cuidadosamente la duramadre del cráneo aislado con pinzas romas. Coloque la calvaria en un plato que contenga PBS mantenido en hielo y use una pipeta de un mililitro para enjuagarlo, asegurando la eliminación de los residuos de sangre de su superficie. Transfiera la calvaria a un plato nuevo que contenga suficiente PBS fresco y frío suficiente para sumergirla.
Use tijeras estériles para cortar la pantorrilla en fragmentos de aproximadamente tres milímetros por tres milímetros en PBS frío. Con una aguja de calibre 18, haga un agujero en la parte inferior de un tubo de microcentrífuga de 500 microlitros. Inserte este tubo en un tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitros que contiene 20 microlitros de PBS frío.
A continuación, transfiera los fragmentos de calvaria al tubo de 500 microlitros. Centrifugar la instalación a 10.000 g durante 30 segundos a cuatro grados centígrados. Vuelva a suspender las células de médula ósea calvaria recolectadas en 500 microlitros de tampón de lisis de glóbulos rojos e incube a temperatura ambiente durante 30 segundos.
Transfiera la suspensión a un tubo de centrífuga de 15 mililitros que contenga cuatro mililitros de PBS frío. Centrifugar a 400 g durante seis minutos a cuatro grados centígrados. Lavar una vez más con cinco mililitros de PBS frío.
Por último, vuelva a suspender el paladar celular en un tampón adecuado.
