Preparación de células de donantes y peces cebra huéspedes para el trasplante de células con el fin de estudiar los mecanismos de desarrollo

Para comenzar, aplica un contorno rectangular de esmalte de uñas transparente al portaobjetos de vidrio. Prepare varios portaobjetos de trasplante de este tipo. Para el montaje del animal anestesiado, utilice una pipeta Pasteur y una bomba para transferirlo de RPT a agarosa de bajo punto de fusión o LMA.

Luego, transfiera al animal en una pequeña gota de LMA al portaobjetos dentro del contorno del esmalte de uñas. Antes de que el LMA se solidifique, use un empujador de embriones para orientar al animal verticalmente, con el sitio de inserción de la aguja previsto hacia la derecha. Y deje que la agarosa se asiente por completo durante aproximadamente cinco minutos.

Con un bisturí, corte una rodaja vertical recta a través de la gota de agarosa justo a la derecha del animal montado. Limpie la agarosa suelta del portaobjetos. Con un bisturí, corte gajos de la agarosa para exponer el sitio de inserción de la aguja.

Aplique RPT al portaobjetos hasta que las gotas de agarosa estén completamente sumergidas. Y montar el portaobjetos preparado en el microscopio de trasplante. Baje el objetivo 40X hasta que rompa la superficie del medio y levántelo para enfocar al animal donante.

A continuación, enfoque las células donantes de interés marcadas con fluorescencia. Mueva la etapa hacia la izquierda en preparación para ubicar la aguja de trasplante.