Para empezar, inserte una micropipeta en el extractor de micropipetas y tire de una aguja de microinyección. Alinee la punta de la aguja con las divisiones del micrómetro de la etapa bajo un endoscopio de disección. Con el micrómetro como guía de medición, use un par de pinzas afiladas para romper la aguja a un tamaño de orificio ligeramente mayor que el diámetro de la celda.
Con una jeringa de 50 mililitros equipada con un llenador de pipetas, llene completamente la aguja con el aceite mineral. En el aparato de trasplante, gire la llave de paso de tres vías de modo que su brazo largo quede frente a la bomba de la microjeringa. Presione el émbolo de la jeringa del depósito para eliminar todas las burbujas de aire de la línea hidráulica.
Manteniendo una ligera presión sobre el émbolo, gire la llave de paso de tres vías de modo que el brazo largo quede orientado hacia la jeringa del depósito. A continuación, inserte la aguja en el soporte sin introducir burbujas de aire. Ajuste la aguja de modo que mire directamente hacia la izquierda en un ángulo de 10 a 15 grados con respecto a la horizontal.
Usando los micromanipuladores gruesos y finos, maniobre la punta de la aguja debajo del objetivo del microscopio para enfocarlo. Si el líquido fluye hacia adentro o hacia afuera de la punta de la aguja, ajuste la presión con la bomba de jeringa hasta que se observe un menisco estable entre el aceite y el RPT. Si queda una burbuja de aceite, mueva la aguja hacia la derecha para retirar su punta del RPT, luego vuelva a la izquierda para reposicionarla.
Mueva el escenario hacia la derecha hasta que el animal donante vuelva a estar a la vista. Vuelva a centrarse y concéntrese en las células que se van a trasplantar, alineando la aguja con las células que están justo fuera del animal. A continuación, inserte la aguja en el animal donante y, si es necesario, reestabilice el menisco oleoso en la punta de la aguja con la bomba de microjeringa.
Coloque la punta de la aguja contra las células de interés y aplique una succión suave con la bomba de microjeringa. Después de tomar las células adecuadas, retire la aguja del donante y vuelva a estabilizar el material en la punta de la aguja. Vuelva a colocar la platina para que el primer animal huésped esté a la vista/centro y concéntrese en el área en la que se colocarán las células y alinee la aguja con esta región justo fuera del animal.
A continuación, inserte la aguja en el animal huésped y reestabilice el menisco oleoso en la punta de la aguja. Coloque la punta de la aguja en el sitio de deposición y aplique una presión suave con la bomba de microjeringa hasta que se libere el número correcto de células donantes de la aguja. Finalmente, retire la aguja del host.
A las 12 horas después del trasplante, se observó con éxito una neurona donante en la región anterior del núcleo motor vago del huésped, mostrando signos de protuberancias de neuritas sanas. Dos días después del trasplante, la neurona trasplantada no solo permanecía correctamente posicionada, sino que también había comenzado a extender un nuevo axón hacia el cuarto arco faríngeo, lo que indica una integración exitosa dentro del huésped.
