Este trabajo fue apoyado por subvenciones del NIH NIH34958 de I. E y NS061952 a JC

<ol>
	<li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes.">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118, 401-415 (1993).</li><li>Chen, W. F., Low, K. H., Lim, C., Edery, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermosensitive+splicing+of+a+clock+gene+and+seasonal+adaptation.">Thermosensitive splicing of a clock gene and seasonal adaptation.</a> Cold Spring Harb Symp Quant Biol. 72, 599-606 (2007).</li><li>Chiu, J. C., Vanselow, J. T., Kramer, A., Edery, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+phospho-occupancy+of+an+atypical+SLIMB-binding+site+on+PERIOD+that+is+phosphorylated+by+DOUBLETIME+controls+the+pace+of+the+clock.">The phospho-occupancy of an atypical SLIMB-binding site on PERIOD that is phosphorylated by DOUBLETIME controls the pace of the clock.</a> Genes Dev. 22, 1758-1772 (2008).</li><li>Dubruille, R., Murad, A., Rosbash, M., Emery, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+constant+light-genetic+screen+identifies+KISMET+as+a+regulator+of+circadian+photoresponses.">A constant light-genetic screen identifies KISMET as a regulator of circadian photoresponses.</a> PLoS Genet. 12, e1000787-e1000787 (2009).</li><li>Glaser, F. T., Stanewsky, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temperature+synchronization+of+the+Drosophila+circadian+clock.">Temperature synchronization of the Drosophila circadian clock.</a> Curr Biol. 15, 1352-1363 (2005).</li><li>Helfrich-F&#246;rster, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+control+of+morning+and+evening+components+in+the+activity+rhythm+of+Drosophila+melanogaster-+sex-specific+differences+suggest+a+different+quality+of+activity.">Differential control of morning and evening components in the activity rhythm of Drosophila melanogaster- sex-specific differences suggest a different quality of activity.</a> J Biol Rhythms. 15, 135-154 (2000).</li><li>Hendricks, J. C., Finn, S. M., Pancleri, K. A., Chavkin, J., Williams, J., Sehgal, A., Pack, A. 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C., Sehgal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+model+for+age-associated+changes+in+sleep:+wake+cycles.">A Drosophila model for age-associated changes in sleep: wake cycles.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 103, 13843-13847 (2006).</li><li>Konopka, R. J., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clock+mutants+of+Drosophila+melanogaster.">Clock mutants of Drosophila melanogaster.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 68, 2112-2116 (1971).</li><li>McGuire, S. E., Roman, G., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+systems+in+Drosophila:+a+synthesis+of+time+and+space.">Gene expression systems in Drosophila: a synthesis of time and space.</a> Trends Genet. 20, 384-391 (2004).</li><li>Osterwalder, T., Yoon, K. S., White, B. H., Keshishian, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+conditional+tissue-specific+transgene+expression+system+using+inducible+GAL4.">A conditional tissue-specific transgene expression system using inducible GAL4.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 98, 12596-12601 (2001).</li><li>Rosato, E., Kyriacou, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+locomotor+activity+rhythms+in+Drosophila.">Analysis of locomotor activity rhythms in Drosophila.</a> Nature Protocols. 1, 559-568 (2006).</li><li>Sehadova, H., Glaser, F. T., Gentile, C., Simoni, A., Giesecke, A., Albert, J. T., Stanewsky, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temperature+entrainment+of+Drosophila's+circadian+clock+involves+the+gene+nocte+and+signaling+from+peripheral+sensory+tissues+to+the+brain.">Temperature entrainment of Drosophila's circadian clock involves the gene nocte and signaling from peripheral sensory tissues to the brain.</a> Neuron. 64, 251-266 (2009).</li><li>Zimmerman, J. E., Raizen, D. M., Maycock, M. H., Maislin, G., Pack, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+video+method+to+study+Drosophila+sleep.">A video method to study Drosophila sleep.</a> Sleep. 31, 1587-1598 (2008).</li><li>Zordan, M. A., Benna, C., Mazzotta, G., Rosato, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+and+analyzing+Drosophila+circadian+locomotor+activity.">Monitoring and analyzing Drosophila circadian locomotor activity.</a> In Circadian Rhythms Methods and Protocols. , (2007).</li></ol>

En este protocolo, que describe los procedimientos para la medición de Drosophila ritmos de actividad locomotora, un resultado confiable del comportamiento de la mosca de los relojes circadianos que se utiliza como estándar de la lectura de la función de reloj. Este ensayo se ha utilizado en gran escala de pantallas para los mutantes reloj nuevo (por ejemplo, Konopka y Benzer 1971;. Dubruille et al 2009) y se utiliza continuamente para diseccionar y comprender la función de reloj en vivo. También se ha utilizado para estudiar el ciclo sueño-vigilia en las moscas, aunque informes recientes sugieren que el análisis de vídeo digital es mucho más confiable en la cuantificación de sueño que con ritmos de actividad locomotora (Zimmerman et al. 2008). Cuando se utilizan ritmos de actividad locomotora para analizar el sueño, el porcentaje de sueño durante el día tienden a ser sobreestimadas. Para asegurar el éxito y la reproducibilidad de este protocolo, es fundamental para las moscas de ensayo que son similares en edad, los antecedentes genéticos, y se ha criado en las mismas condiciones, como los fenotipos de comportamiento en moscas de la fruta, tales como ritmo circadiano y la actividad del sueño / descanso son muy sensibles a todos estos factores. Cuando se utiliza incubadoras múltiples para un solo experimento, es importante asegurarse de que todas las incubadoras están a la temperatura prevista, ya que algunos parámetros circadianos puede cambiar en función de la temperatura. Una palabra de precaución al considerar la compra de incubadoras para el trabajo con las moscas, no todos son creados iguales. Aunque no nos atrevemos a recomendar ninguna unidad en particular hay muchas opciones. Un buen recurso para encontrar las empresas que venden incubadoras para el trabajo de Drosophila se proporciona en &lt;www.flybase.org&gt;. Algunas empresas incluso venden &quot;Drosophila circadiano&quot; incubadoras, donde se dispone de características adicionales, como ya está cableado para el sistema de Trikinetics y rampa de temperatura (por ejemplo, Tritech). Las características importantes incluyen la capacidad para el control de la luz diurna y buen control de temperatura en el rango fisiológico de Drosophila (~ 15-30 ° C). Los precios y tamaños de las incubadoras varían mucho, pero con los monitores de la actividad más reciente de Trikinetics, incluso pequeñas incubadoras puede acomodar un gran número de estos dispositivos. Además, a pesar de incubadoras con control de humedad se puede utilizar, esta característica adicional no es necesario, siempre y cuando se coloca un recipiente pequeño con agua para proporcionar humedad (50-70% está bien). Finalmente, a pesar de que utilizan de forma habitual y FaasX Insomniac para el análisis de los datos de este protocolo, hay programas alternativos y programas disponibles (Rosato y Kyriacou 2006), por ejemplo, ClockLab (ActiMetrics), Paquete de Brandeis Ritmo (D. Wheeler, Baylor College of Medicine, Houston ) y MAZ (Zordan et al. 2007).

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Drosophila activity monitor (DAM)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Trikinetics Inc.; Waltham, MA</td>
<td>DAM2 or DAM5</td>
<td>DAM2 monitors are more compact, and more can fit into a single incubator</td>
</tr>
<tr>
<td>Power supply interface unit (for DAM system)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Trikinetics Inc.; Waltham, MA</td>
<td>PSIU9</td>
<td>Includes PS9-1 AC Power Supply</td>
</tr>
<tr>
<td>Light controller</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Trikinetics Inc.; Waltham, MA</td>
<td>LC6</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pyrex glass tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Trikinetics Inc.; Waltham, MA</td>
<td>PGT5, PGT7, and PGT10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plastic activity tube caps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Trikinetics Inc.; Waltham, MA</td>
<td>CAP5</td>
<td>Yarn can be used instead of plastic caps.</td>
</tr>
<tr>
<td>DAM System data collection software</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Trikinetics Inc.; Waltham, MA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Versions available for both Mac and PC</td>
</tr>
<tr>
<td>FaasX software</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>M. Boudinot and F. Rouyer, Centre National de la Recherche Scientifique, Gif-sur-Yvette Cedex, France</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Only for Mac</td>
</tr>
<tr>
<td>Insomniac 2.0 software</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leslie Ashmore, Department of Pharmacology &amp; Chemical Biology, University of Pittsburgh School of Medicine, Pittsburgh, PA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Runs on Matlab. Can be used on both PC and Macintosh.</td>
</tr>
<tr>
<td>Environmental incubator with temperature and diurnal control, e.g. Percival incubator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Percival Scientific, Inc.</td>
<td>I-30BLL</td>
<td>Interior space dimension:
Width: 65cm;
Height: 86cm;
Depth: 55cm</td>
</tr>
<tr>
<td>Environmental incubator with temperature and diurnal control, e.g. DigiTherm Heating/Cooling Incubator with Circadian Timed Lighting and Timed Temperature</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Tritech Research, Inc.</td>
<td>05DT2CIRC001</td>
<td>Interior space dimension:
Width: 36m;
Height: 56m;
Depth: 28cm</td>
</tr>
<tr>
<td>APC Smart-UPS 2200VA 120V (Emergency power backup unit)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>APC</td>
<td>SU2200NET</td>
<td>Output Power Capacity of 1600 Watts</td>
</tr>
<tr>
<td>Sucrose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>S7903</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bacto Agar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Becton Dickinson</td>
<td>214010</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>TissuePrep Paraffin pellets</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>T565</td>
<td>Melting point 56&deg;C-57&deg;C</td>
</tr>
<tr>
<td>Block heater </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>12621-014</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

assaying locomotor activity to study circadian rhythms and sleep parameters in drosophila

La mayoría de las formas de vida muestran ritmos diarios en los fenómenos celulares, fisiológicos y de comportamiento que son impulsados ​​por circadiano endógeno (≡ 24 h) los marcapasos o los relojes. Disfunciones en el sistema circadiano humano están asociados con varias enfermedades o trastornos. Avanzado mucho hacia la comprensión de los mecanismos subyacentes a los ritmos circadianos ha surgido de las pantallas de genética mediante el cual un ritmo fácil de medir la conducta se utiliza como una lectura de la función de reloj. Los estudios con Drosophila han hecho contribuciones fundamentales a la comprensión de las bases celulares y bioquímicos subyacentes a los ritmos circadianos. El comportamiento estándar circadiano de lectura se mide en Drosophila es la actividad locomotora. En general, el sistema de control consiste en dispositivos especialmente diseñados que pueden medir el movimiento del aparato locomotor de Drosophila. Estos dispositivos se encuentran en incubadoras de ambiente controlado localizado en un cuarto oscuro y se basan en el uso de la interrupción de un haz de luz infrarroja para grabar la actividad locomotriz de moscas individuales contenidas dentro de pequeños tubos. Cuando se mide durante muchos días, Drosophila muestran los ciclos diarios de actividad e inactividad, un ritmo de comportamiento que se rige por el sistema circadiano endógeno del animal. El procedimiento general se ha simplificado con el advenimiento de dispositivos disponibles en el mercado del aparato locomotor seguimiento de la actividad y el desarrollo de programas de software para análisis de datos. Utilizamos el sistema de Trikinetics Inc., que es el procedimiento que se describe aquí y es actualmente el sistema más popular en todo el mundo. Más recientemente, los dispositivos de vigilancia mismas se han utilizado para estudiar el comportamiento del sueño en la mosca Drosophila. Debido a que el diario de sueño-vigilia de los ciclos de muchas moscas se pueden medir simultáneamente y sólo 1 a 2 semanas de continua actividad locomotora de datos suele ser suficiente, este sistema es ideal para grandes pantallas para identificar Drosophila manifiesta alteración de las propiedades circadiano o el sueño.

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Assaying Locomotor Activity to Study Circadian Rhythms and Sleep Parameters in Drosophila

Se describen los procedimientos para el registro diario de los ritmos de actividad locomotora<em&gt; Drosophila</em&gt; Y el posterior análisis de datos. Ritmos actividad locomotora es una salida confiable del comportamiento de los relojes circadianos de los animales y se utilizan como la lectura de la norma de funcionamiento del reloj circadiano en el estudio de mutantes o el examen de cómo el medio ambiente regula el sistema circadiano.

Ensayo Actividad locomotora para el Estudio de los ritmos circadianos y del sueño en los parámetros Drosophila</em

Most life forms exhibit daily rhythms in cellular, physiological and behavioral phenomena that are driven by endogenous circadian (&equiv;24 hr) ...

assaying-locomotor-activity-to-study-circadian-rhythms-sleep

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Assaying Locomotor Activity to Study Circadian Rhythms and Sleep Parameters in Drosophila

46.2K vistas.  Rutgers University. Se describen los procedimientos para el registro diario de los ritmos de actividad locomotora Drosophila Y el posterior análisis de datos. Ritmos actividad locomotora es una salida confiable del comportamiento de los relojes circadianos de los animales y se utilizan como la lectura de la norma de funcionamiento del reloj circadiano en el estudio de mutantes o el examen de cómo el medio ambiente regula el sistema circadiano.