Questo lavoro è stato supportato da sovvenzioni NIH NIH34958 di I. E e NS061952 di JC

<ol>
	<li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes.">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118, 401-415 (1993).</li><li>Chen, W. F., Low, K. H., Lim, C., Edery, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermosensitive+splicing+of+a+clock+gene+and+seasonal+adaptation.">Thermosensitive splicing of a clock gene and seasonal adaptation.</a> Cold Spring Harb Symp Quant Biol. 72, 599-606 (2007).</li><li>Chiu, J. C., Vanselow, J. T., Kramer, A., Edery, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+phospho-occupancy+of+an+atypical+SLIMB-binding+site+on+PERIOD+that+is+phosphorylated+by+DOUBLETIME+controls+the+pace+of+the+clock.">The phospho-occupancy of an atypical SLIMB-binding site on PERIOD that is phosphorylated by DOUBLETIME controls the pace of the clock.</a> Genes Dev. 22, 1758-1772 (2008).</li><li>Dubruille, R., Murad, A., Rosbash, M., Emery, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+constant+light-genetic+screen+identifies+KISMET+as+a+regulator+of+circadian+photoresponses.">A constant light-genetic screen identifies KISMET as a regulator of circadian photoresponses.</a> PLoS Genet. 12, e1000787-e1000787 (2009).</li><li>Glaser, F. T., Stanewsky, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temperature+synchronization+of+the+Drosophila+circadian+clock.">Temperature synchronization of the Drosophila circadian clock.</a> Curr Biol. 15, 1352-1363 (2005).</li><li>Helfrich-F&#246;rster, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+control+of+morning+and+evening+components+in+the+activity+rhythm+of+Drosophila+melanogaster-+sex-specific+differences+suggest+a+different+quality+of+activity.">Differential control of morning and evening components in the activity rhythm of Drosophila melanogaster- sex-specific differences suggest a different quality of activity.</a> J Biol Rhythms. 15, 135-154 (2000).</li><li>Hendricks, J. C., Finn, S. M., Pancleri, K. A., Chavkin, J., Williams, J., Sehgal, A., Pack, A. 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C., Sehgal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+model+for+age-associated+changes+in+sleep:+wake+cycles.">A Drosophila model for age-associated changes in sleep: wake cycles.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 103, 13843-13847 (2006).</li><li>Konopka, R. J., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clock+mutants+of+Drosophila+melanogaster.">Clock mutants of Drosophila melanogaster.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 68, 2112-2116 (1971).</li><li>McGuire, S. E., Roman, G., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+systems+in+Drosophila:+a+synthesis+of+time+and+space.">Gene expression systems in Drosophila: a synthesis of time and space.</a> Trends Genet. 20, 384-391 (2004).</li><li>Osterwalder, T., Yoon, K. S., White, B. H., Keshishian, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+conditional+tissue-specific+transgene+expression+system+using+inducible+GAL4.">A conditional tissue-specific transgene expression system using inducible GAL4.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 98, 12596-12601 (2001).</li><li>Rosato, E., Kyriacou, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+locomotor+activity+rhythms+in+Drosophila.">Analysis of locomotor activity rhythms in Drosophila.</a> Nature Protocols. 1, 559-568 (2006).</li><li>Sehadova, H., Glaser, F. T., Gentile, C., Simoni, A., Giesecke, A., Albert, J. T., Stanewsky, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temperature+entrainment+of+Drosophila's+circadian+clock+involves+the+gene+nocte+and+signaling+from+peripheral+sensory+tissues+to+the+brain.">Temperature entrainment of Drosophila's circadian clock involves the gene nocte and signaling from peripheral sensory tissues to the brain.</a> Neuron. 64, 251-266 (2009).</li><li>Zimmerman, J. E., Raizen, D. M., Maycock, M. H., Maislin, G., Pack, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+video+method+to+study+Drosophila+sleep.">A video method to study Drosophila sleep.</a> Sleep. 31, 1587-1598 (2008).</li><li>Zordan, M. A., Benna, C., Mazzotta, G., Rosato, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+and+analyzing+Drosophila+circadian+locomotor+activity.">Monitoring and analyzing Drosophila circadian locomotor activity.</a> In Circadian Rhythms Methods and Protocols. , (2007).</li></ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

In questo protocollo, abbiamo descritto le procedure per la misurazione della Drosophila ritmi attività locomotoria, un output affidabile comportamentale di volare orologi circadiani che viene utilizzato come la lettura standard di funzione orologio. Questo test è stato utilizzato in larga scala schermi per mutanti orologio romanzo (per esempio, Konopka e Benzer 1971;. Dubruille et al 2009) ed è continuamente utilizzato per analizzare e comprendere la funzione orologio in vivo. E &#39;stato anche utilizzato per studiare il ciclo sonno veglia nelle mosche, anche se i rapporti recenti suggeriscono che l&#39;analisi video digitale è molto più affidabile nel quantificare il sonno che usare ritmi attività locomotoria (Zimmerman et al. 2008). Quando si utilizzano ritmi attività locomotoria per analizzare il sonno, la percentuale di sonno durante il giorno tendono ad essere sovrastimati. Per garantire il successo e la riproducibilità di questo protocollo, è fondamentale per le mosche test che sono simili per età, background genetico, e allevati nelle stesse condizioni, come fenotipi comportamentali nei moscerini della frutta come la ritmicità circadiana e il sonno / riposo attività sono molto sensibili a tutti questi fattori. Quando si utilizzano incubatori multipli per un singolo esperimento, è importante assicurarsi che tutti gli incubatori sono a temperatura anticipata dal momento che alcuni parametri circadiano possono cambiare in funzione della temperatura. Una parola di cautela nel considerare l&#39;acquisto di incubatrici per lavorare con le mosche, non tutti sono creati uguali. Mentre esitiamo a raccomandare qualsiasi particolare unità ci sono molte opzioni. Una buona risorsa per trovare aziende che vendono incubatori per il lavoro Drosophila viene fornito &lt;www.flybase.org&gt;. Alcune aziende persino vendere &quot;Drosophila circadiani&quot; incubatori, in cui funzionalità aggiuntive sono disponibili, come già cablati per il sistema Trikinetics e rampa di temperatura (ad esempio, Tritech). Importanti caratteristiche includono la possibilità per il controllo della luce diurna e buon controllo della temperatura nel range fisiologico di Drosophila (~ 15-30 ° C). I prezzi e le dimensioni degli incubatori variano molto, ma con i monitor più recenti attività di Trikinetics, anche incubatori di piccole dimensioni può ospitare un certo numero di questi dispositivi. Inoltre, anche se incubatori con controllo di umidità può essere utilizzato, questa funzione aggiunta non è necessaria fino a quando si inserisce un pentolino con acqua per fornire umidità (50-70% va bene). Infine, anche se abitualmente uso FaasX e Insomniac per l&#39;analisi dei dati in questo protocollo, ci sono programmi alternativi e software disponibili (Rosato e Kyriacou 2006), ad esempio ClockLab (ActiMetrics), Brandeis ritmo Package (D. Wheeler, Baylor College of Medicine, Houston ), e MAZ (Zordan et al. 2007).

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Drosophila activity monitor (DAM)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Trikinetics Inc.; Waltham, MA</td>
<td>DAM2 or DAM5</td>
<td>DAM2 monitors are more compact, and more can fit into a single incubator</td>
</tr>
<tr>
<td>Power supply interface unit (for DAM system)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Trikinetics Inc.; Waltham, MA</td>
<td>PSIU9</td>
<td>Includes PS9-1 AC Power Supply</td>
</tr>
<tr>
<td>Light controller</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Trikinetics Inc.; Waltham, MA</td>
<td>LC6</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pyrex glass tubes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Trikinetics Inc.; Waltham, MA</td>
<td>PGT5, PGT7, and PGT10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plastic activity tube caps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Trikinetics Inc.; Waltham, MA</td>
<td>CAP5</td>
<td>Yarn can be used instead of plastic caps.</td>
</tr>
<tr>
<td>DAM System data collection software</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Trikinetics Inc.; Waltham, MA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Versions available for both Mac and PC</td>
</tr>
<tr>
<td>FaasX software</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>M. Boudinot and F. Rouyer, Centre National de la Recherche Scientifique, Gif-sur-Yvette Cedex, France</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Only for Mac</td>
</tr>
<tr>
<td>Insomniac 2.0 software</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leslie Ashmore, Department of Pharmacology &amp; Chemical Biology, University of Pittsburgh School of Medicine, Pittsburgh, PA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Runs on Matlab. Can be used on both PC and Macintosh.</td>
</tr>
<tr>
<td>Environmental incubator with temperature and diurnal control, e.g. Percival incubator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Percival Scientific, Inc.</td>
<td>I-30BLL</td>
<td>Interior space dimension:
Width: 65cm;
Height: 86cm;
Depth: 55cm</td>
</tr>
<tr>
<td>Environmental incubator with temperature and diurnal control, e.g. DigiTherm Heating/Cooling Incubator with Circadian Timed Lighting and Timed Temperature</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Tritech Research, Inc.</td>
<td>05DT2CIRC001</td>
<td>Interior space dimension:
Width: 36m;
Height: 56m;
Depth: 28cm</td>
</tr>
<tr>
<td>APC Smart-UPS 2200VA 120V (Emergency power backup unit)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>APC</td>
<td>SU2200NET</td>
<td>Output Power Capacity of 1600 Watts</td>
</tr>
<tr>
<td>Sucrose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>S7903</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Bacto Agar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Becton Dickinson</td>
<td>214010</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>TissuePrep Paraffin pellets</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>T565</td>
<td>Melting point 56&deg;C-57&deg;C</td>
</tr>
<tr>
<td>Block heater </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>12621-014</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

assaying locomotor activity to study circadian rhythms and sleep parameters in drosophila

Maggior parte delle forme di vita presentano ritmi quotidiani in cellulari, fenomeni fisiologici e comportamentali che sono guidati da circadiani endogeni (≡ 24 ore) pacemaker o orologi. Malfunzionamenti nel sistema circadiano umano sono associate a numerose malattie o disturbi. Molti passi avanti verso la comprensione dei meccanismi alla base ritmi circadiani è emerso dagli schermi genetico per cui un ritmo facilmente misurabile comportamentale è utilizzato come lettura della funzione orologio. Gli studi che utilizzano Drosophila hanno dato contributi fondamentali alla comprensione delle basi cellulari e biochimici alla base ritmi circadiani. Il comportamento standard di circadiani di read-out misurato in Drosophila è l&#39;attività locomotoria. In generale, il sistema di monitoraggio coinvolge dispositivi specificamente progettati in grado di misurare il movimento locomotore di Drosophila. Questi dispositivi sono ospitati in incubatori ambiente controllato trova in una camera oscura e si basano sull&#39;uso l&#39;interruzione di un fascio di luce a infrarossi per registrare l&#39;attività locomotoria di mosche individuali contenute all&#39;interno di piccoli tubi. Se misurato per molti giorni, Drosophila presentano cicli giornalieri di attività e inattività, un ritmo di comportamento che è governato da sistema endogeno circadiano dell&#39;animale. La procedura complessiva è stata semplificata con l&#39;avvento di dispositivi disponibili in commercio attività locomotoria il monitoraggio e lo sviluppo di programmi software per l&#39;analisi dei dati. Noi usiamo il sistema da Trikinetics Inc., che è la procedura descritta qui ed è attualmente il sistema più popolare usato in tutto il mondo. Più recentemente, i dispositivi di monitoraggio stesso sono stati utilizzati per studiare il comportamento del sonno in Drosophila. Perché il quotidiano sonno-veglia cicli di molte mosche possono essere misurate simultaneamente e solo 1 a 2 settimane vale la pena di dati continui l&#39;attività locomotoria è solitamente sufficiente, questo sistema è ideale per i grandi schermi per identify Drosophila manifestare properties altered circadiano o dormire.

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Assaying Locomotor Activity to Study Circadian Rhythms and Sleep Parameters in Drosophila

Si descrivono le modalità per la registrazione quotidiana ritmi di attività locomotoria<em&gt; Drosophila</em&gt; E analisi dei dati. Ritmi di attività locomotoria sono una potenza affidabile comportamentale degli animali orologi circadiani e vengono utilizzati come standard di lettura quando si studia la funzione orologio circadiano mutanti o esaminando in che modo l&#39;ambiente regola il sistema circadiano.

Saggio attività locomotoria per studiare ritmi circadiani del sonno e parametri in Drosophila</em

Most life forms exhibit daily rhythms in cellular, physiological and behavioral phenomena that are driven by endogenous circadian (&equiv;24 hr) ...

assaying-locomotor-activity-to-study-circadian-rhythms-sleep

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Assaying Locomotor Activity to Study Circadian Rhythms and Sleep Parameters in Drosophila

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