Este estudio ha sido financiado por la beca R01 y R21 NiHM MH091816 MH084043 a TDG.

1. Materiales 1. Suspensión Caja La prueba de la cola de suspensión (TST) implica la suspensión de los ratones por encima del suelo por la cola. En el nivel más básico, el procedimiento sólo requiere de una barra de suspensión o repisa estante, y la cinta. Sin embargo, el investigador debe considerar el uso de un fondo que ofrece un contraste óptimo. Además, es prudente tomar medidas para evitar que los ratones de la observación de otros animales que están en estudio. En nuestro laboratorio, se utiliza especialmente fabricado cajas de suspensión de la cola (cuatro horas al día, Baltimore MD), hecho de plástico con las dimensiones (55 x altura 60 de ancho x 11,5 cm de profundidad). Con el fin de evitar que los animales de la observación o que interactúan entre sí, cada ratón se suspende dentro de sus propios tres paredes del compartimiento rectangular (55 x altura 15 de ancho x 11,5 cm de profundidad). El ratón se suspende en el centro de este compartimiento y el ancho y la profundidad son de tamaño suficiente para que el ratón no se puede hacer contact con las paredes. En este contexto, la distancia aproximada entre la nariz del ratón y el garaje es de 20-25 cm. Hay cuatro compartimientos idénticos como en el aparato que nos permite poner a prueba cuatro ratones a la vez. Una barra de suspensión de aluminio (1 cm. Altura X 1 cm. Ancho x 60 cm. Longitud), para suspender la cola de cada ratón, se coloca en la parte superior de la caja. Las dimensiones que usamos en nuestro laboratorio debe ser considerado como una referencia general. Por ejemplo, el tamaño de los compartimentos de la caja de la cola de suspensión se puede aumentar si una cepa de ratón outbred grandes (por ejemplo, CD-1) se utiliza. En la parte inferior de cada compartimento se coloca una bandeja de aluminio desmontable que recoge las heces o la orina de los animales. Usamos una caja de color gris oscuro para los animales albinos y una caja de color crema para los ratones de colores de la capa otros. Este acuerdo nos da un mejor contraste y la calificación de conducta por lo tanto más confiable de la prueba. 2. Cinta <p class= &quot;Jove_content&quot;&gt; La cinta debe adherirse firmemente a ambos la cola del ratón y la barra de suspensión, y ser lo suficientemente fuerte para soportar el peso del ratón se está probando (por ejemplo, TimeMed Labeling Systems, Inc, Burr Ridge IL, 1,9 cm de ancho). Sin embargo, la cinta no debe ser excesivamente pegajosa ya que al final de la sesión que se eliminará de la cola. Cortamos 17 fragmentos cm de la cinta y coloque una marca de 2 cm de un extremo. Esta porción de 2 cm se utilizó para sujetar la cinta a la cola, mientras que el restante 15 cm se utilizó para la suspensión del ratón. 3. Temporizador 4. Dispositivo de grabación de vídeo Una cámara de video y un trípode (o estructura de apoyo) son necesarios. Como esta prueba por lo general implica varios animales se está probando al mismo tiempo, anotando en vivo será difícil y no es aconsejable. La cámara de vídeo debe registrar en altagh suficiente resolución para hacer una imagen de calidad que se utilizarán más adelante para la puntuación de comportamiento. Asegúrese siempre de que no hay memoria suficiente en la grabación de la cámara antes de comenzar la prueba. Usamos una cámara de vídeo que graba digitalmente sin el uso de medios físicos (es decir, casetes de vídeo), lo que permite la transferencia directa de videos. 5. Generador de ruido blanco El generador de ruido intermitente debe enmascarar los sonidos ambientales. El uso de un generador de ruido es especialmente recomendable en entornos de laboratorio, donde ruidos fuertes y repentinos se puede escuchar que potencialmente podría asustar a los ratones. En nuestra sala experimental el nivel de ruido (sin el generador de ruido blanco activado) es de alrededor de 60 dB. El nivel de sonido total con el generador de ruido blanco activado en el lugar donde se lleva a cabo la TST es 70-72 dB. Sin embargo, cabe señalar que estas cifras se proporcionan a modo de ejemplo solamente, y cada laboratorio debe seleccionar elniveles adecuados de ruido de acuerdo a su entorno y circunstancias únicas. 6. Artículos de limpieza El cuadro de suspensión se debe limpiar a fondo después de cada sesión con una solución de esterilización (por ejemplo, MB-10, Quip Laboratories Inc., Wilmington, DE, o similar). 7. Climbstoppers (opcional: depende de la cepa utilizada) Los ratones de algunos fondos, como C57BL / 6, puede subir la cola durante la prueba 1. Claro cilindros huecos (4 cm de largo, 1,6 cm de diámetro exterior, 1,3 cm de diámetro interior, 1,5 gramos) que se cortan a la longitud cm cuatro (por FourHourDay Inc, Baltimore MD) de tubo de policarbonato (# 8585K41, McMaster-Carr, Santa Fe Springs , CA) se colocan alrededor de las colas de los ratones para evitar que la cola como subir el comportamiento 2,3. Estos dispositivos se pueden hacer en cualquier laboratorio con herramientas y materiales comunes. 2. Procedimientos de comportamiento <p class="jove_content"&gt; El diseño experimental en general debe reflejar contrapeso adecuado entre variables relativas a su experimento. Por ejemplo, en nuestros experimentos que tratan de representar a cada grupo por igual en cada sesión de TST (es decir, si hay cuatro grupos de tratamiento, cada uno estará representado en cada sesión). Además, las posiciones de los ratones se giran de una manera tal que los ratones de cada grupo de tratamiento se colocan en una posición diferente en cada sesión. <ol><li> Coloque la cámara en su posición. La cámara debe estar lo más cerca posible a fin de obtener la mayor resolución posible de los animales. </li><li> Fragmentos de la cinta que se utilizarán durante la sesión debe ser cortado, marcado, y se preparó para la sesión. </li><li> Iniciar el generador de ruido blanco, si se utilizan, antes de que los ratones son introducidos a la sala de pruebas. El nivel de ruido blanco sólo debe ser suficiente para enmascarar los ruidos externos. Evitar un alto volumen y asegúrese de que el mismo nivel de ruido blanco se utiliza para todos los animales. </li><li> Llevar el unoimals en la sala de pruebas. Si la habitación donde los animales viven y la sala de pruebas son adyacentes entre sí, con condiciones ambientales similares, sin período de aclimatación puede ser necesario. De lo contrario, colocar los animales en la sala de pruebas por un período de aclimatación (por lo general al menos una hora). Tenga en cuenta que los animales que se hicieron en la misma habitación puede detectar señales olfativas y con ultrasonido. </li><li> Si una cepa conocida para subir la cola, como C57BL6 / J, se está utilizando Climbstoppers lugar alrededor de la cola antes de aplicar la cinta. </li><li> La cinta se adhieran a las colas de los ratones. Use el extremo marcado de la cinta y hacer que la cinta se pega a la cola y sobre sí mismo. La cinta se debe aplicar hasta el final de la cola con 3.2 milímetros de la cola quedan fuera de la cinta. </li><li> Una vez que cada trozo de cinta está conectado a una cola de ratón pegar la parte central de la cinta a la pared interior de la jaula. Esto ayudará a evitar que se enreden de trozos de cinta entre sí. Tenga en cuenta que confinement de esta manera puede causar estrés y que es importante para completar el proceso de aplicación de la cinta a cada animal tan pronto como sea posible. </li><li> Una vez que toda la cinta se aplica, iniciar la grabación e identificar la sesión antes de que los ratones están suspendidos. </li><li> Colgar a los animales mediante la colocación de la extremidad libre de la cinta en la barra de suspensión o un estante en un orden que se compensa entre los grupos de tratamiento. Suspender los ratones de una manera que no se obstruya la vista de la cámara porque la sesión TST todo se calificará y obstrucción de la cámara dará lugar a la incapacidad de evaluar los comportamientos durante ese tiempo. Compruebe que todos los extremos de la cinta están colgando en paralelo a la barra de suspensión o estanterías con una longitud similar de holgura para cada ratón. </li><li> Al final de la sesión (que suele ser de seis minutos), el retorno a los animales a su homecage y retirar con cuidado la cinta de cada cola tirando suavemente de él fuera. No rasgar la cinta de la cola, ya que hacerlo puede causar dolor al micrófonoe. </li><li> Después de regresar a los ratones a su cuarto colonia descartar el boli fecal y la orina de las bandejas de recogida y limpie el aparato con una solución esterilizante. </li></ol> 3. Análisis de la Conducta <ol><li> En general, la TST es de principio a fin seis minutos de duración. A diferencia de otro procedimiento de eficacia ampliamente utilizado antidepresivos, la prueba de natación forzada, toda la sesión se anotó. Esto se debe a la conclusión general de que los ratones tienden a la inmovilidad de manifiesto anteriormente en el TST. </li><li> En nuestro laboratorio hemos subir los archivos de vídeo directamente desde la cámara a un PC donde se lleva a cabo el análisis. </li><li> Durante el análisis del comportamiento del tiempo que pasa cada ratón como móviles se mide. Si bien es posible medir el tiempo de inmovilidad directamente, hemos encontrado que es más fácil de detectar y medir los movimientos de activos en lugar de la falta de estos movimientos. </li><li> El aspecto más importante de análisis de comportamiento TST es la identificación constante de movimientos que se registran en la movilidad de buena fe. Los ratones, especialmente al comienzo de la sesión, manifestando conductas que son abiertamente escapar relacionados. Estas incluyen tratar de llegar a las paredes del aparato y la barra de suspensión, una fuerte sacudida del cuerpo, y el movimiento de las extremidades similar a manejar. Estos movimientos constituyen claramente la movilidad. Estos comportamientos luego desaparecen y se convierten en sutiles. En los movimientos de nuestro pequeño laboratorio que se limitan a las patas delanteras, pero sin la participación de las patas traseras no se cuentan como la movilidad. Además, las oscilaciones del péndulo y como cambios que se deben al impulso alcanzado durante los combates a principios de la movilidad también no se cuentan como la movilidad. </li><li> En nuestro laboratorio utilizamos un software en la pantalla del cronómetro para medir el tiempo (cronómetro Xnote, dnSoft Grupo de Investigación). Dos cronómetros separados se utilizan en la pantalla. El primer cronómetro cuenta atrás de 360 ​​segundos y avisa al observador, cuando el período de análisis de comportamiento extremos. El segundo stopwatch controlado por el observador mide el tiempo dedicado a móviles. Ciertos software cronómetro tiene la capacidad de asignar teclas para iniciar y detener funciones, por lo que en la pantalla el teclado puede controlar el cronómetro. En lugar de un teclado normal, se utiliza un dispositivo de entrada se conoce comúnmente como &#39;gamepad&#39; para controlar los cronómetros. </li><li> Si hay más de un ratón a prueba y presente en la pantalla es una buena idea para cubrir los otros animales para que sus movimientos no distraer al observador. Esto se puede lograr mediante el uso de otra ventana del programa o física que cubre los otros ratones en la pantalla con el papel. </li><li> Es posible que haya algún sesgo que ocurre si la cantidad total de tiempo transcurrido para la movilidad de un ratón en particular es visible antes de la finalización de la sesión de análisis. Si un cronómetro en la pantalla se utiliza, le sugerimos que para cubrir todos los decimales, pero milésima de segundo del cronómetro. Al cubrir el cronómetro el único observador sabe si el cronómetro estáo desactivar en cualquier momento, pero no sabe el tiempo total transcurrido y por lo tanto no pueden ser afectados por cualquier sesgo. Utilizando este enfoque, el observador, mientras que ciega a las asignaciones de grupo de los animales, no se tiene una idea general del nivel de movilidad de cada animal. </li><li> Una prueba de fiabilidad interobservador debe realizarse para cada nuevo observador antes de comenzar a recopilar datos de los animales de prueba. En nuestro laboratorio de cada nuevo observador primero observa a un observador experimentado, mientras que él o ella está anotando. Después de los nuevos observadores ganar la confianza suficiente como para diferenciar la movilidad de la inmovilidad, que la puntuación en tiempo real con el observador experimentado mirando y señalando errores. Una vez que esta fase se completa con éxito, los nuevos observadores se analizará un conjunto específico de videos TST que mantenemos en nuestro laboratorio con fines de formación. Sólo después de un alto nivel de correlación interobservador se obtiene con el observador experimentado hace un investigador analizar los videos de TST realexperimentos. Guardamos los datos de estos análisis de la formación para constituir una norma interna para el laboratorio. Hemos observado diferencias entre las cepas de la manera en la que expresan la movilidad (y la inmovilidad) los comportamientos, y la media de tiempo de inmovilidad entre los sexos. Cuando un nuevo modelo de cepa, sexo, o genéticamente modificados ratón se pone a prueba en el laboratorio es necesario para llevar a cabo una vez más este tipo de análisis de confiabilidad. </li></ol> 4. Resultados representante Hemos utilizado la TST para evaluar los antidepresivos como la respuesta al tratamiento de litio en diferentes cepas de ratón (Figura 1) 3. Los detalles experimentales de este experimento se publican en Can et al., 2011 3. <img src="/files/ftp_upload/3769/3769fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1. Tiempo de inmovilidad en el ensayo de suspensión de cola después de la administración de litio crónica en cinco cepas de ratones endogámicos. Grupo de ratones se casad, cuatro ratones por jaula. Los ratones del grupo de tratamiento recibieron litio litio comida que contiene 4 g / kg LiCl durante tres semanas. Los animales control recibieron alimentos idénticos sin el cloruro de litio. **: P &lt;0,01, ***: p &lt;0,001 denotan un cambio significativo, unpaired t-test. Los datos se expresan como media ± SEM. n :10-12 animales por grupo para cada cepa. (Figura realizada a partir de 3). En este ejemplo, un efecto significativo del tratamiento crónico con litio de entrega de alimentos se observa solamente en las cepas C57BL/6J y DBA/2J. En las otras tres cepas, sin disminución estadísticamente significativa en el tiempo de inmovilidad se observó. Estos datos indican que una respuesta de tipo antidepresivo para el tratamiento crónico con litio es dependiente de la cepa, como también se ha observado con otros medicamentos antidepresivos 4.8.

<ol>
	<li>Mayorga, A. J., Lucki, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limitations+on+the+use+of+the+C57BL/6+mouse+in+the+tail+suspension+test.">Limitations on the use of the C57BL/6 mouse in the tail suspension test.</a> Psychopharmacology (Berl). 155, 110-112 (2001).</li><li>Dao, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mood+Disorder+Susceptibility+Gene+CACNA1C+Modifies+Mood-Related+Behaviors+in+Mice+and+Interacts+with+Sex+to+Influence+Behavior+in+Mice+and+Diagnosis+in+Humans.">Mood Disorder Susceptibility Gene CACNA1C Modifies Mood-Related Behaviors in Mice and Interacts with Sex to Influence Behavior in Mice and Diagnosis in Humans.</a> Biological Psychiatry. 68, 801-810 (2010).</li><li>Can, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antidepressant-like+responses+to+lithium+in+genetically+diverse+mouse+strains.">Antidepressant-like responses to lithium in genetically diverse mouse strains.</a> Genes, Brain and Behavior. 10, 434-443 (2011).</li><li>Bai, F., Li, X., Clay, M., Lindstrom, T., Skolnick, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intra-+and+interstrain+differences+in+models+of+"behavioral+despair".">Intra- and interstrain differences in models of "behavioral despair".</a> Pharmacol. Biochem. Behav. 70, 187-192 (2001).</li><li>Cervo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genotype-dependent+activity+of+tryptophan+hydroxylase-2+determines+the+response+to+citalopram+in+a+mouse+model+of+depression.">Genotype-dependent activity of tryptophan hydroxylase-2 determines the response to citalopram in a mouse model of depression.</a> J. Neurosci. 25, 8165-8172 (2005).</li><li>David, D. J., Renard, C. E., Jolliet, P., Hascoet, M., Bourin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antidepressant-like+effects+in+various+mice+strains+in+the+forced+swimming+test.">Antidepressant-like effects in various mice strains in the forced swimming test.</a> Psychopharmacology (Berl). 166, 373-382 (2003).</li><li>Dulawa, S. C., Holick, K. A., Gundersen, B., Hen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+chronic+fluoxetine+in+animal+models+of+anxiety+and+depression.">Effects of chronic fluoxetine in animal models of anxiety and depression.</a> Neuropsychopharmacology. 29, 1321-1330 (2004).</li><li>Lucki, I., Dalvi, A., Mayorga, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitivity+to+the+effects+of+pharmacologically+selective+antidepressants+in+different+strains+of+mice.">Sensitivity to the effects of pharmacologically selective antidepressants in different strains of mice.</a> Psychopharmacology (Berl). 155, 315-322 (2001).</li><li>Steru, L., Chermat, R., Thierry, B., Simon, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tail+suspension+test:+a+new+method+for+screening+antidepressants+in+mice.">The tail suspension test: a new method for screening antidepressants in mice.</a> Psychopharmacology (Berl). 85, 367-370 (1985).</li><li>Can, A., Dao, D. T., Arad, M., Terrillion, C. E., Piantadosi, S. C., Gould, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Mouse+Forced+Swim+Test.">The Mouse Forced Swim Test.</a> J. Vis. Exp. 58, 3791-3638 (2012).</li><li>Porsolt, R. D., Bertin, A., Jalfre, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+despair+in+mice:+a+primary+screening+test+for+antidepressants.">Behavioral despair in mice: a primary screening test for antidepressants.</a> Arch. Int. Pharmacodyn. Ther. 229, 327-336 (1977).</li><li>Porsolt, R. D., Anton, G., Blavet, N., Jalfre, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioural+despair+in+rats:+a+new+model+sensitive+to+antidepressant+treatments.">Behavioural despair in rats: a new model sensitive to antidepressant treatments.</a> Eur. J. Pharmacol. 47, 379-391 (1978).</li><li>Crowley, J. J., Blendy, J. A., Lucki, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strain-dependent+antidepressant-like+effects+of+citalopram+in+the+mouse+tail+suspension+test.">Strain-dependent antidepressant-like effects of citalopram in the mouse tail suspension test.</a> Psychopharmacology (Berl). 183, 257-264 (2005).</li><li>Karolewicz, B., Paul, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Group+housing+of+mice+increases+immobility+and+antidepressant+sensitivity+in+the+forced+swim+and+tail+suspension+tests.">Group housing of mice increases immobility and antidepressant sensitivity in the forced swim and tail suspension tests.</a> European Journal of Pharmacology. 415, 197-201 (2001).</li><li>Lad, H. V., Liu, L., Paya-Cano, J. L., Fernandes, C., Schalkwyk, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+traits+for+the+tail+suspension+test:+automation,+optimization,+and+BXD+RI+mapping.">Quantitative traits for the tail suspension test: automation, optimization, and BXD RI mapping.</a> Mammalian. Genome. 18, 482-491 (2007).</li><li>Liu, X., Gershenfeld, H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+differences+in+the+tail-suspension+test+and+its+relationship+to+imipramine+response+among+11+inbred+strains+of+mice.">Genetic differences in the tail-suspension test and its relationship to imipramine response among 11 inbred strains of mice.</a> Biol. Psychiatry. 49, 575-581 (2001).</li><li>Ripoll, N., David, D. J., Dailly, E., Hascoet, M., Bourin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antidepressant-like+effects+in+various+mice+strains+in+the+tail+suspension+test..">Antidepressant-like effects in various mice strains in the tail suspension test..</a> Behav. Brain. Res.. 143, 193-200 (2003).</li><li>Mineur, Y. S., Belzung, C., Crusio, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+unpredictable+chronic+mild+stress+on+anxiety+and+depression-like+behavior+in+mice.">Effects of unpredictable chronic mild stress on anxiety and depression-like behavior in mice.</a> Behav. Brain. Res. 175, 43-50 (2006).</li><li>Thierry, B., Stéru, L., Simon, P., Porsolt, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tail+suspension+test:+Ethical+considerations.">The tail suspension test: Ethical considerations.</a> Psychopharmacology. 90, 284-285 (1986).</li><li>Cryan, J. F., Mombereau, C., Vassout, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+tail+suspension+test+as+a+model+for+assessing+antidepressant+activity:+review+of+pharmacological+and+genetic+studies+in+mice.">The tail suspension test as a model for assessing antidepressant activity: review of pharmacological and genetic studies in mice.</a> Neurosci. Biobehav. Rev. 29, 571-625 (2005).</li><li>O'Leary, O. F., Cryan, J. F., Gould, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mood and Anxiety Related Phenotypes in Mice. 42, 119-137 (2009).</li><li>Detke, M. J., Johnson, J., Lucki, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+and+Chronic+Antidepressant+Drug+Treatment+in+the+Rat+Forced+Swimming+Test+Model+of+Depression.">Acute and Chronic Antidepressant Drug Treatment in the Rat Forced Swimming Test Model of Depression.</a> Experimental and Clinical Psychopharmacology. 5, 107-112 (1997).</li><li>Rupniak, N. M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+depression:+challenges+from+a+drug+development+perspective.">Animal models of depression: challenges from a drug development perspective.</a> Behavioural Pharmacology. 14, 385-390 (2003).</li><li>Strekalova, T., Steinbusch, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mood and Anxiety related phenotypes in mice: Characterization using behavioral tests. 42, 153-176 (2009).</li><li>Bartolomucci, A., Fuchs, E., Koolhaas, J. M., Ohl, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mood and Anxiety related phenotypes in mice: Characterization using behavioral tests. 42, 261-275 (2009).</li><li>Samuels, B. A., Hen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mood and Anxiety related phenotypes in mice: Characterization using behavioral tests. 63, 107-121 (2011).</li><li>Juszczak, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+usage+of+video+analysis+system+for+detection+of+immobility+in+the+tail+suspension+test+in+mice.">The usage of video analysis system for detection of immobility in the tail suspension test in mice.</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. 85, 332-338 (2006).</li><li>Crowley, J. J., Jones, O. '. L. e. a. r. y., F, O., Lucki, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+tests+for+measuring+the+effects+of+antidepressants+in+mice.">Automated tests for measuring the effects of antidepressants in mice.</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. 78, 269-274 (2004).</li><li>Gould, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+AMPA+receptors+in+the+antidepressant-like+effects+of+lithium+in+the+mouse+tail+suspension+test+and+forced+swim+test.">Involvement of AMPA receptors in the antidepressant-like effects of lithium in the mouse tail suspension test and forced swim test.</a> Neuropharmacology. 54, 577-587 (2008).</li><li>Gould, T. D., Dao, D. T., Kovacsics, C. E., Gould, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Mood and Anxiety related phenotypes in mice: Characterization using behavioral tests. 42, (2009).</li></ol>

Los autores declaran no tener conflictos de intereses.

Desarrollo de la TST por Steru et al. 9 fue influenciado por el desarrollado anteriormente obligado nadar la prueba 10-12. Similar a la prueba de natación forzada, en el TST ratones se colocan en una situación ineludible, pero moderadamente estresantes. La falta de conducta de evitación se considera relacionada con la inmovilidad. Al igual que la prueba de natación forzada, la TST es una prueba mejor validados para la evaluación de la eficacia antidepresiva de los medicamentos, pero t...

<ul><li> Cinta </li><li> Temporizador </li><li> Cámara de video </li><li> Generador de ruido blanco (opcional) </li><li> Climbstoppers (opcional, dependiendo de la cepa utilizada) </li></ul>

the tail suspension test

La prueba de la cola de suspensión es una prueba de comportamiento del ratón útil en la detección de potenciales fármacos antidepresivos, y la evaluación de otras manipulaciones que se espera que afecte a los comportamientos relacionados con la depresión. Los ratones son suspendidos por la cola con la cinta, en una posición tal que no puede escapar o aferrarse a las superficies cercanas. Durante esta prueba, normalmente de seis minutos de duración, las conductas de escape resultante orientado se cuantifican. La prueba de la cola de suspensión es una herramienta valiosa en el descubrimiento de fármacos para el cribado de alto rendimiento de los futuros antidepresivos. A continuación, describimos los detalles necesarios para la ejecución de esta prueba con especial hincapié en los problemas potenciales que pueden ocurrir y cómo evitarlos. También ofrecemos una solución para el comportamiento de la cola de escalada, un problema común que hace que esta prueba inútil en algunas cepas de ratón, como el ampliamente utilizado C57BL / 6. En concreto, podemos prevenir conductas cola subiendo al pasar colas de ratón a través de un pequeño de plásticocilindro antes de la suspensión. Por último, se detalla la forma de puntuación de forma manual los comportamientos que se manifiestan en esta prueba.

Watch this Scientific Journal Video about The Tail Suspension Test at JoVE.com

The Tail Suspension Test

La prueba de la cola de suspensión se valida como un procedimiento experimental para evaluar la eficacia de los tratamientos farmacológicos antidepresivos en ratones. Los ratones son suspendidos por la cola durante seis minutos y escapar de conductas relacionadas con la evaluación son. Se describen los procedimientos utilizados en la realización de la prueba de suspensión de la cola.

La prueba de la suspensión trasera

The tail-suspension test is a mouse behavioral test useful in the screening of potential antidepressant drugs, and assessing of other manipulations that ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

78.8K vistas.  University of Maryland School of Medicine. La prueba de la cola de suspensión se valida como un procedimiento experimental para evaluar la eficacia de los tratamientos farmacológicos antidepresivos en ratones. Los ratones son suspendidos por la cola durante seis minutos y escapar de conductas relacionadas con la evaluación son. Se describen los procedimientos utilizados en la realización de la prueba de suspensión de la cola.

Video: The Tail Suspension Test

One Dimensional Turing-Like Handshake Test for Motor Intelligence

In the Turing test, a computer model is deemed to "think intelligently" if it can generate answers that are not distinguishable from those of a human. However, this test is limited to the linguistic aspects of machine intelligence. A salient function of the brain is the control of movement, and the movement of the human hand is a sophisticated demonstration of this function. Therefore, we propose a Turing-like handshake test, for machine motor intelligence. We administer the test through a telerobotic system in which the interrogator is engaged in a task of holding a robotic stylus and interacting with another party (human or artificial). Instead of asking the interrogator whether the other party is a person or a computer program, we employ a two-alternative forced choice method and ask which of two systems is more human-like. We extract a quantitative grade for each model according to its resemblance to the human handshake motion and name it "Model Human-Likeness Grade" (MHLG). We present three methods to estimate the MHLG. (i) By calculating the proportion of subjects' answers that the model is more human-like than the human; (ii) By comparing two weighted sums of human and model handshakes we fit a psychometric curve and extract the point of subjective equality (PSE); (iii) By comparing a given model with a weighted sum of human and random signal, we fit a psychometric curve to the answers of the interrogator and extract the PSE for the weight of the human in the weighted sum. Altogether, we provide a protocol to test computational models of the human handshake. We believe that building a model is a necessary step in understanding any phenomenon and, in this case, in understanding the neural mechanisms responsible for the generation of the human handshake.

We present a Turing-like Handshake test administered through a telerobotic system in which the interrogator is holding a robotic stylus and interacting with another party (human or artificial). We use a forced choice method, and extract a measure for the similarity of the artificial model to a human handshake.

Unidimensional Turing-Como Apretón de manos de prueba para el motor de Inteligencia

In the Turing test, a computer model is deemed to "think intelligently" if it can generate answers that are not distinguishable from those of a human.  ...

Investigación

Neurociencias

The Mouse Forced Swim Test

The forced swim test is a rodent behavioral test used for evaluation of antidepressant drugs, antidepressant efficacy of new compounds, and experimental manipulations that are aimed at rendering or preventing depressive-like states. Mice are placed in an inescapable transparent tank that is filled with water and their escape related mobility behavior is measured. The forced swim test is straightforward to conduct reliably and it requires minimal specialized equipment. Successful implementation of the forced swim test requires adherence to certain procedural details and minimization of unwarranted stress to the mice. In the protocol description and the accompanying video, we explain how to conduct the mouse version of this test with emphasis on potential pitfalls that may be detrimental to interpretation of results and how to avoid them. Additionally, we explain how the behaviors manifested in the test are assessed.

The forced swim test is validated as an experimental approach to assess potential antidepressant efficacy in rodents. Experimental animals are placed in a tank of water and escape-related mobility behavior is quantified. The common procedures for the mouse version of this test are described.

El ratón de prueba de natación forzada

The forced swim test is a rodent behavioral test used for evaluation of antidepressant drugs, antidepressant efficacy of new compounds, and experimental ...

The Fibular Nerve Injury Method: A Reliable Assay to Identify and Test Factors That Repair Neuromuscular Junctions

The neuromuscular junction (NMJ) undergoes deleterious structural and functional changes as a result of aging, injury and disease. Thus, it is imperative to understand the cellular and molecular changes involved in maintaining and repairing NMJs. For this purpose, we have developed a method to reliably and consistently examine regenerating NMJs in mice. This nerve injury method involves crushing the common fibular nerve as it passes over the lateral head of the gastrocnemius muscle tendon near the knee. Using 70 day old female mice, we demonstrate that motor axons begin to reinnervate previous postsynaptic targets within 7 days post-crush. They completely reoccupy their previous synaptic areas by 12 days. To determine the reliability of this injury method, we compared reinnervation rates between individual 70 day old female mice. We found that the number of reinnervated postsynaptic sites was similar between mice at 7, 9, and 12 days post-crush. To determine if this injury assay can also be used to compare molecular changes in muscles, we examined levels of the gamma-subunit of the muscle nicotinic receptor (gamma-AChR) and the muscle-specific kinase (MuSK). The gamma-AChR subunit and MuSK to are highly upregulated following denervation and return to normal levels following reinnervation of NMJs. We found a close relationship between transcript levels for these genes and innervation status of muscles. We believe that this method will accelerate our understanding of the cellular and molecular changes involved in repairing the NMJ and other synapses.

We have developed a nerve injury method to reliably examine muscle reinnervation, and thus regeneration of neuromuscular junctions in mice. This technique involves injuring the common fibular nerve via a simple and highly reproducible surgery. Muscle reinnervation in then assessed by whole-mounting the extensor digitorum longus muscle.

El nervio peroneo Método de lesiones: un ensayo fiable para identificar y Factores de prueba de que la reparación neuromusculares uniones

The neuromuscular junction (NMJ) undergoes deleterious structural and functional changes as a result of aging, injury and disease. Thus, it is imperative ...

Diffuse Reflectance Spectroscopy: Getting the Capillary Refill Test Under One's Thumb

The capillary refill test was introduced in 1947 to help estimate circulatory status in critically ill patients. Guidelines commonly state that refill should occur within 2 s after releasing 5 s of firm pressure (e.g., by the physician&#39;s finger) in the normal healthy supine patient. A slower refill time indicates poor skin perfusion, which can be caused by conditions including sepsis, blood loss, hypoperfusion, and hypothermia. Since its introduction, the clinical usefulness of the test has been debated. Advocates point out its feasibility and simplicity and claim that it can indicate changes in vascular status earlier than changes in vital signs such as heart rate. Critics, on the other hand, stress that the lack of standardization in how the test is performed and the highly subjective nature of the naked eye assessment, as well as the test&#39;s susceptibility to ambient factors, markedly lowers the clinical value. The aim of the present work is to describe in detail the course of the refill event and to suggest potentially more objective and exact endpoint values for the capillary refill test using diffuse polarization spectroscopy.

This protocol describes how the use of diffuse polarization spectroscopy can improve the clinical usefulness of the capillary refill test. We suggest a more detailed analysis of the course of the capillary refill in healthy volunteers using diffuse reflectance spectroscopy videos and new informatic endpoints.

Espectroscopia de reflectancia difusa: Conseguir la prueba de llenado capilar bajo la

The capillary refill test was introduced in 1947 to help estimate circulatory status in critically ill patients. Guidelines commonly state that refill ...

Frequent Tail-tip Blood Sampling in Mice for the Assessment of Pulsatile Luteinizing Hormone Secretion

In many endocrine systems, circulating factors or hormones are not released continuously, but are secreted as a discrete pulse in response to a releasing factor. Single-point sampling measures are inadequate to fully understand the biological significance of the secretory pattern of pulsatile hormones either under normal physiologic conditions or during conditions of dysregulation. Luteinizing hormone (LH) is synthesized by the anterior pituitary gonadotrope&#160;cells and secreted in a pulsatile pattern which requires frequent collection of blood samples for pulse assessment. This has not been possible in mice until recently, due to the development of a high-sensitivity LH assay and advancement in a technique for frequent low-volume sample collection, initially described by Steyn and colleagues.1 Here we describe a protocol for the frequent peripheral blood sample collection from mice with sufficient handling acclimatization to detect pulsatile secretion of LH. The current protocol details an expanded acclimatization period that allows assessment of robust and continuous pulses of LH over multiple hours. In this protocol, the tip of the tail is clipped&#160;and blood is collected from the tail using a hand-held pipette. For assessment of pulsatile LH in gonadectomized mice, serial samples are collected every 5-6 min for 90-180 min. Importantly, the collection of blood and measurement of robust pulses of LH can be accomplished in awake, freely behaving mice, given adequate handling acclimatization and effort to minimize environmental stressors. Sufficient acclimatization can be achieved within 4-5 weeks prior to blood collection. This protocol highlights advances in the methodology to ensure collection of whole blood samples for assessment of pulsatile LH secretion patterns over multiple hours in the mouse, a powerful animal model for neuroendocrine research.

Here we present a tail-tip blood sampling protocol for frequent sample collection in unrestrained mice. This method is useful for assessing patterns of pulsatile luteinizing hormone secretion and could be adapted for analysis of other circulating factors.

Frecuentes muestras de sangre de la punta de la cola en ratones para la evaluación de la secreción pulsátil de hormona luteinizante

In many endocrine systems, circulating factors or hormones are not released continuously, but are secreted as a discrete pulse in response to a releasing ...

A Metric Test for Assessing Spatial Working Memory in Adult Rats Following Traumatic Brain Injury

Impairments to sensory, short-term, and long-term memory are common side effects after traumatic brain injury (TBI). Due to the ethical limitations of human studies, animal models provide suitable alternatives to test treatment methods, and to study the mechanisms and related complications of the condition. Experimental rodent models have historically been the most widely used due to their accessibility, low cost, reproducibility, and validated approaches. A metric test, which tests the ability to recall the placement of two objects at various distances and angles from one another, is a technique to study impairment in spatial working memory (SWM) after TBI. The significant advantages of metric tasks include the possibility of dynamic observation, low cost, reproducibility, relative ease of implementation, and low stress environment. Here, we present a metric test protocol to measure impairment of SWM in adult rats after TBI. This test provides a feasible way to evaluate physiology and pathophysiology of brain function more effectively.

Traumatic brain injury (TBI) is commonly associated with memory impairment. Here, we present a protocol to assess spatial working memory after TBI via a metric task. A metric test is a useful tool to study spatial working memory impairment after TBI.

Una prueba métrica para evaluar la memoria de trabajo espacial en ratas adultas después de una lesión cerebral traumática

Impairments to sensory, short-term, and long-term memory are common side effects after traumatic brain injury (TBI). Due to the ethical limitations of ...

Extracción de líquido cefalorraquídeo y sangre de ratas con registro de EEG concurrente

Sampling Cerebrospinal Fluid and Blood from Lateral Tail Vein in Rats During EEG Recordings

Because the composition of body fluids reflects many physiological and pathological dynamics, biological liquid samples are commonly obtained in many experimental contexts to measure molecules of interest, such as hormones, growth factors, proteins, or small non-coding RNAs. A specific example is the sampling of biological liquids in the research of biomarkers for epilepsy. In these studies, it is desirable to compare the levels of molecules in cerebrospinal fluid (CSF) and in plasma, by withdrawing CSF and plasma in parallel and considering the time distance of the sampling from and to seizures. The combined CSF and plasma sampling, coupled with video-EEG monitoring in epileptic animals, is a promising approach for the validation of putative diagnostic and prognostic biomarkers. Here, a procedure of combined CSF withdrawal from cisterna magna and blood sampling from the lateral tail vein in epileptic rats that are continuously video-EEG monitored is described. This procedure offers significant advantages over other commonly used techniques. It permits rapid sampling with minimal pain or invasiveness, and reduced time of anesthesia. Additionally, it can be used to obtain CSF and plasma samples in both tethered and telemetry EEG recorded rats, and it may be used repeatedly across multiple days of experiment. By minimizing the stress due to sampling by shortening isoflurane anesthesia, measures are expected to reflect more accurately the true levels of investigated molecules in biofluids. Depending on the availability of an appropriate analytical assay, this technique may be used to measure the levels of multiple, different molecules while performing EEG recording at the same time.

Autor destacado: Obtención de muestras de sangre y LCR de alta calidad para el descubrimiento de biomarcadores de epilepsia 

The protocol shows repeated cerebrospinal fluid and blood collections from epileptic rats performed in parallel with continuous video-electroencephalogram (EEG) monitoring. These are instrumental for exploring possible links between changes in various body fluid molecules and seizure activity.

Toma de muestras de líquido cefalorraquídeo y sangre de la vena lateral de la cola en ratas durante los registros de EEG

Because the composition of body fluids reflects many physiological and pathological dynamics, biological liquid samples are commonly obtained in many ...

Cuantificación de la longitud de Poly(A) de los genes del sistema nervioso de Drosophila

Measurement of Poly A Tail Length from Drosophila Larva Brain and Cell Line

Polyadenylation is a crucial posttranscriptional modification that adds poly(A) tails to the 3' end of mRNA molecules. The length of the poly(A) tail is tightly regulated by cellular processes. Dysregulation of mRNA polyadenylation has been associated with abnormal gene expression and various diseases, including cancer, neurological disorders, and developmental abnormalities. Therefore, comprehending the dynamics of polyadenylation is vital for unraveling the complexities of mRNA processing and posttranscriptional gene regulation. 
This paper presents a method for measuring poly(A) tail lengths in RNA samples isolated from Drosophila larval brains and Drosophila Schneider S2 cells. We employed the guanosine/inosine (G/I) tailing approach, which involves the enzymatic addition of G/I residues at the 3' end of mRNA using yeast poly(A) polymerase. This modification protects the RNA's 3' end from enzymatic degradation. The protected full-length poly(A) tails are then reverse-transcribed using a universal antisense primer. Subsequently, PCR amplification is performed using a gene-specific oligo that targets the gene of interest, along with a universal sequence oligo used for reverse transcription. 
This generates PCR products encompassing the poly(A) tails of the gene of interest. Since polyadenylation is not a uniform modification and results in tails of varying lengths, the PCR products display a range of sizes, leading to a smear pattern on agarose gel. Finally, the PCR products are subjected to high-resolution capillary gel electrophoresis, followed by quantification using the sizes of the poly(A) PCR products and the gene-specific PCR product. This technique offers a straightforward and reliable tool for analyzing poly(A) tail lengths, enabling us to gain deeper insights into the intricate mechanisms governing mRNA regulation.

Autor destacado: Explorando la frontera de la investigación de ARNm con técnicas de análisis de cola de Poly A

The protocol describes an efficient and reliable method for quantifying the poly(A) length of the gene of interest from the Drosophila nervous system, which can be easily adapted to tissues or cell types from other species.

Medición de la longitud de la cola de Poly A a partir del cerebro y la línea celular de la larva de Drosophila

Polyadenylation is a crucial posttranscriptional modification that adds poly(A) tails to the 3' end of mRNA molecules. The length of the poly(A) tail is ...