本研究では、助成金NIHM R01 MH091816とTDGのR21 MH084043によってサポートされています。

1。材料 1。サスペンションボックス尾懸垂試験（TST）は、彼らの尾で地面からマウスを中断伴います。最も基本的なレベルでは、手順はサスペンションのバーや棚の棚、およびテープが必要です。しかし、実験者は、最適なコントラストを提供するバックグラウンドの使用を考慮する必要があります。さらに、それはテストされている他の動物を観察するからマウスを防ぐための対策を講じるのが賢明です。当研究室では、我々は大きさ（55高さX 60幅× 11.5 cmの深さ）とプラスチック製の特別に製造された尾懸垂ボックス（4時間の日、ボルティモアMD）を、使用してください。お互いを観察したり、相互作用から動物を防ぐために、各マウスは、その独自の3層長方形区画（55高さX 15幅× 11.5 cmの深さ）の中で中断されます。マウスは、この区画の真ん中に懸濁させ、幅と深さはマウスが協力を行うことができないようなサイズに設定されていますされ壁とntact。この設定では、マウスの鼻と装置の床面との間のおおよその距離は20〜25 cmです。私たちは一度に4匹のマウスをテストできるように装置のような4つの同一のコンパートメントがあります。各マウスの尾を中断するために使用されるアルミサスバー（1 cmの高さX 1センチメートル。幅× 60センチの長さ）は、ボックスの上部に位置している。我々は我々の研究室で使用するディメンションは、一般的な基準とみなされるべきである。大規模な近交系マウス系統（例：CD - 1）が使用されている場合例えば、テールサスペンションボックスの個々の区画のサイズを大きくすることができます。 各コンパートメントの一番下に私たちは動物から糞や尿を収集する取り外し可能なアルミのトレイを置きます。我々は、アルビノの動物のための暗い灰色のボックスと他のコートの色のマウスのクリーム色のボックスを使用してください。この取り決めは、私たちより良いコントラストとテストのため、より信頼性の高い行動の得点を与える。 2。テープ<p class=&quot;jove_content&quot;&gt;テープは、マウスの尾やサスペンションのバーの両方にしっかりと付着し、そして（例えばTimeMedラベリングシステム、株式会社、バーリッジIL、1.9センチ幅）テストされるマウスの重量を運ぶのに十分な強さでなければなりません。セッションの終了時に、それが尾から削除される可能性があるのでしかし、テープは過度に粘着性であってはならない。私たちは、テープの17 cmの断片を切り取って、一方の端からマーク2 cmを置きます。残りの15 cmのマウスのサスペンションに使用されていた間、この2cmの部分は、尾部にテープを取り付けるために使用された。 3。タイマー 4。ビデオ録画デバイスビデオカメラと三脚は、（または他の支持構造）が必要である。このテストは通常​​、同時に試験される複数の動物を含んでいるので、ライブスコアが困難になるのでお勧めできません。ビデオカメラは、ハワイ州で記録する必要があります行動スコアリングのために後で使用される高品質の画像をレンダリングするためにGH十分な解像度。常にテストを開始する前に、カメラに十分な記録のメモリがあることを確認してください。我々は、ビデオの簡単な転送を可能にする、物理メディア（すなわちビデオカセット）を使用せずにデジタル記録するビデオカメラを使用。 5。ホワイトノイズ発生器ノイズ発生器は、断続的な環境音にマ​​スクをかける必要があります。ノイズジェネレーターの使用は、特に突然大きな音が潜在的にマウスを驚愕することを聞くことができる実験室環境で推奨されます。我々の実験室での周囲雑音レベルは、（アクティブホワイトノイズ発生器なし）を60 dB程度です。 TSTが行われる場所でアクティブにホワイトノイズ発生器との合計音のレベルは70〜72デシベルです。しかし、これらの図は例として提供されていることに注意すべきである、と各研究室では、選択してください彼らのユニークな環境や状況に応じて右側のノイズレベル。 6。クリーニング用品サスペンションボックスは滅菌溶液（例えばMB - 10、皮肉Laboratories社、ウィルミントン、DE、または類似の）と各セッションの後は十分に拭き取ってください。 7。 Climbstoppers（オプション：使用ひずみに依存） このようなC57BL / 6などのいくつかの背景を、、のマウスは、試験1の間に彼らの尾を登ることができる。ポリカーボネートチューブから4 cmの長さ（FourHourDay株式会社、ボルティモアMDによる）（＃8585K41、マクマスター - カー、サンタフェスプリングスにカットされている明確な中空円筒（4センチ長さ、外径1.6センチメートル、内径1.3センチメートル、1.5グラム） 、CA）が動作2,3を登るような尾を防ぐために、マウスの尾の周りに配置されています。これらのデバイスは、共通のツールや材料を持つ任意の実験室で行うことができます。 2。行動手順<p class="jove_content"&gt;全体的な実験計画は、実験に特有な変数間の適切な相殺を反映している必要があります。例えば、我々の実験で我々は、すべてのTSTセッション（すなわち、4つの治療グループがある場合、それぞれがそれぞれのセッションで表現されます）に等しく、各グループを代表してみてください。また、マウスの位置は、各処置群からのマウスは、各セッションで異なる位置に配置されるような方法で回転される。 <ol><li>の位置にカメラを置きます。カメラは、動物の可能な限り高い解像度を得るためにできるだけ近いはずです。 </li><li>セッション中に使用されるテープの断片は、カットマーク、およびセッションのために準備する必要があります。 </li><li>マウスは、試験室に導入される前に、使用されている場合、ホワイトノイズ発生器を起動します。ホワイトノイズのレベルは、外部ノイズをマスクするために十分なはずです。高音量を回避し、ホワイトノイズと同じレベルのすべての動物のために使用されていることを確認します。 </li><li>持参試験室にimals。動物が存在する部屋や試験室は、同様の環境条件との相互に隣接している場合は、順化期間は必要になる場合があります。そうでなければ、順化の期間（一般的には少なくとも1時間）に試験室に動物を置く。同じ部屋に配置された他の動物は嗅覚と超音波手がかりを感知できることに注意してください。 </li><li>このようなC57BL6 / Jのような尾を、登ることが知られ菌株は、テープを適用する前に、尾の周りの場所のClimbstoppersを使用されている場合。 </li><li>マウスの尾にテープを付着する。テープの著しい先端を使って、テープが尾とバック自体にくっついていることを確認します。テープは、テープの外側に残っている尾の2〜3ミリメートルとテールの一番最後に適用する必要があります。 </li><li>かつてテープの各部分は、ケージの内側の壁にテープの中央部分をスティックマウスの尾部に取り付けられています。これはお互いにテープ片のもつれを防ぐことができます。なお、Cこの方法でonfinementはストレスを引き起こすため、早急に各動物にテープを適用するプロセスを完了することが重要であることができる。 </li><li>すべてのテープが適用されると、録音を開始し、マウスが中断される前にセッションを識別します。 </li><li>治療群間で相殺されるためにサスペンションのバーや棚の上にテープの自由端を置くことによって、動物を一時停止します。全体TSTセッションが得点し、カメラがその時に行動を評価するためにできないことにつながる妨害されるため、カメラのビューを妨げないような方法でマウスをサスペンド。すべてのテープの両端がそれぞれのマウスのスラックの同じような長さとサスペンションのバーや棚に平行にハングアップしていることを確認してください。 </li><li>セッションの終了（通常は6分である）で、彼らのhomecageに動物を戻すと、慎重にゆっくりとそれを引っ張って各尾からテープを削除する。そうすることがマイクに痛みを引き起こす可能性があるので尾からテープをリッピングしないでください。E. </li><li>彼らのコロニーの部屋にマウスを返した後にコレクショントレーから糞便玻璃と尿を破棄し、消毒液で装置を拭いてください。 </li></ol> 3。行動分析<ol><li>一般的に、TSTは長さが6分を最初から最後までです。他の広く使用されている抗うつ効果の手続き、強制水泳試験とは異なり、セッション全体がスコアリングされ。これは、マウスは以前TSTでマニフェスト不動する傾向があることを見つける一般的な原因です。 </li><li>私たちのラボでは、カメラからの分析が行われているPCに直接ビデオファイルをアップロードする。 </li><li>行動の分析中に携帯電話が測定される各マウスが費やす時間。それは直接不動時間を測定することは可能ですが、我々はそれが容易ではなく、そのような動きの欠如よりも活発な動きを検出し測定することを発見した。 </li><li> TST行動分析の最も重要な側面は、動きの一貫性のある識別です善意のモビリティとして記録されているの。特にセッションの開始時にマウス、、公然と逃げる関係しているマニフェストの行動。これらは装置の壁とサスペンションバー、ボディの強い揺れ、そして実行に似て手足の動きの情報を表示しようとして含まれています。これらの動きは明らかにモビリティを構成する。その後、これらの行動治まると微妙になる。前脚に限定されていますが、後ろ足の関与なしにモビリティとしてカウントされていない我々の研究室の小さな動きで。さらに、以前のモビリティの試合で得た勢いを原因とするスイングのような振動と振り子はまた、モビリティとしてカウントされません。 </li><li>私たちのラボでは、時間の測定（Xnoteストップウォッチ、dnSoft研究グループ）のための画面上のストップウォッチのソフトウェアを使用してください。二つの独立したストップウォッチは、画面上で使用されています。時の行動分析期間が終了する第一ストップウォッチは360秒とアラートからオブザーバをダウンカウントします。第二STO時間は、モバイル過ごしたオブザーバー-措置によってpwatch制御さ。特定のストップウォッチのソフトは、画面上にキーボードがストップウォッチを制御できるように、機能を起動および停止するキーを割り当てる機能を持っています。代わりに通常のキーボードの、我々​​は一般的にストップウォッチを制御するために&quot;ゲームパッド&quot;として知られている入力デバイスを使用してください。 </li><li>画面上でテストされた、現在複数のマウスがある場合、それは彼らの動きが観察者の気をそらすことがないように他の動物をカバーすることをお勧めします。これは、別のプログラムのウィンドウを使用するか、物理的に紙と画面上の他のマウスを覆うことによって行うことができます。 </li><li>特定のマウスの経過モビリティの時間の合計は、分析前のセッションが完了するまで表示されている場合に発生するいくつかのバイアスがあるかもしれません。画面上のストップウォッチを使用する場合、我々はすべてがストップウォッチの秒の小数をカバーするために示唆している。ストップウォッチをカバーすることによって観察者は、唯一のストップウォッチがあるかどうかを知っている合計時間が経過し、従ってあらゆるバイアスの影響を受けないことを知っていないオンまたはオフにいずれかの時点でですが。このアプローチのオブザーバを用いて、動物のグループの割り当てにブラインドしながら、それぞれの動物の移動性のレベルの一般的な考えを持っていないでしょう。 </li><li>者間の信頼性試験は、試験動物からデータを収集を開始する前に、すべての新しい観察のために実施されるべきである。彼または彼女が得点している間私たちの研究室では各々の新しい観察は、最初に経験豊かな観測者を監視します。新しいオブザーバーは不動の機動性を区別するために十分な信用を得るの後、彼らはその後、経験豊かな観測者が視聴して誤りがあれば指摘してリアルタイムで得点。このフェーズが正常に完了すると、新たなオブザーバーは、我々は訓練の目的のために当研究室で維持しているTSTビデオの特定のセットを分析します。者間の相関の高いレベルは、経験豊富な観察で得られた後にのみ調査官は、実際のTSTのビデオを分析していません実験。我々は、アーカイブ、これらのトレーニングの分析からのデータは、実験室の内部標準を構成する。我々は、彼らがモビリティ（と不動）の行動を表現し、男女間の不動時間を意味する方法で菌株間の違いを観察している。新しい系統、性別、または遺伝子改変マウスモデルが実験室で試験されている場合は、再度信頼性のこのタイプの分析を行うことが必要です。 </li></ol> 4。代表的な結果我々は、様々なマウス系統におけるリチウムの治療（図1）3〜抗うつ薬のような応答を評価するためにTSTを使用している。この実験の実験の詳細はできますから、2011年3公開されています。 <img src="/files/ftp_upload/3769/3769fig1.jpg" alt="図1" /> 図1、5つの近交系マウスにおける慢性的なリチウムの投与後に尾懸垂試験において無動時間。マウスは、グループの家でしたD、ケージあたり4匹。リチウム治療群のマウスは、3週間で4 g / kgの塩化リチウムを含むリチウム順子を受けた。対照動物は、塩化リチウムなく同一の食品を受け取りました。 **：P &lt;0.01、***：P &lt;0.001で有意な、対応のないt検定を示す。データは平均± SEMとして表される。各菌株のグループごとにnは:10 - 12匹。 （図3から再生された）。 この例では、食品に配信慢性リチウムの有意な治療効果は、C57BL/6JとDBA/2J系統で観察される。他の3株では、不動時間に統計的に有意な減少が観察されなかった。これらのデータはまた、他の抗うつ薬4月8日に観察されているように慢性リチウム治療に抗うつ薬のような応答が依存する株であることを示している。

<ol>
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著者は、利害の衝突を宣言しません。

Steru らによるTSTの開発9は、以前開発した強制水泳試験10月12日影響を受けていた。 TSTマウスの強制水泳試験、似ては避けられないが適度にストレスの多い状況に置かれている。エスケープ関連行動の欠如が不動とみなされます。強制水泳試験と同様に、TSTはテスト最良の薬の抗うつ効果を評価するための検証だけでなく、環境への神経生物学的、および遺伝的?...

<ul><li>テープ</li><li>タイマー</li><li>ビデオカメラ</li><li>ホワイトノイズ発生器（オプション） </li><li> Climbstoppers（オプション、使用される菌株に応じて） </li></ul>

the tail suspension test

尾懸垂試験は、潜在的な抗うつ薬のスクリーニングに有用なマウスの行動テストで、うつ病に関連する行動に影響を与えないことが予想されている他の操作の査定。マウスは、それがエスケープまたは近くの表面に保持できないような位置に、テープで彼らの尾によって停止されています。このテスト中は、通常は6分間持続時間で、結果として得られるエスケープ指向の振る舞い​​が定量化されています。尾懸垂試験は、将来の抗うつ薬化合物のハイスループットスクリーニングのための創薬に有用なツールです。ここでは、発生する可能性があると、それらを回避する方法を潜在的な問題についての追加重点を置いて、このテストの実施に必要な詳細を説明します。我々はまた、広く使用されているC57BL / 6とテールクライミング動作を解決する、いくつかのマウス系統では、このテストは役に立たないレンダリングする共通の問題を、提供しています。具体的には、小さなプラスチックを通してマウスの尾を渡すことによって、テール登山行動を防ぐ前のサスペンションのシリンダー。最後に、どのように手動でこのテストで明らかにされている行動を獲得するために我々詳細。

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The Tail Suspension Test

尾懸垂試験は、マウスにおける薬物治療の抗うつ効果を評価するための実験手順として検証されます。マウスは、6分間その尾によって中断され、エスケープ関連の行動が評価されています。我々は、尾懸垂試験の実施に使用される手順を説明します。

尾懸垂テスト

The tail-suspension test is a mouse behavioral test useful in the screening of potential antidepressant drugs, and assessing of other manipulations that ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

78.9K ビュー.  University of Maryland School of Medicine. 尾懸垂試験は、マウスにおける薬物治療の抗うつ効果を評価するための実験手順として検証されます。マウスは、6分間その尾によって中断され、エスケープ関連の行動が評価されています。我々は、尾懸垂試験の実施に使用される手順を説明します。

ビデオ: The Tail Suspension Test

One Dimensional Turing-Like Handshake Test for Motor Intelligence

In the Turing test, a computer model is deemed to "think intelligently" if it can generate answers that are not distinguishable from those of a human. However, this test is limited to the linguistic aspects of machine intelligence. A salient function of the brain is the control of movement, and the movement of the human hand is a sophisticated demonstration of this function. Therefore, we propose a Turing-like handshake test, for machine motor intelligence. We administer the test through a telerobotic system in which the interrogator is engaged in a task of holding a robotic stylus and interacting with another party (human or artificial). Instead of asking the interrogator whether the other party is a person or a computer program, we employ a two-alternative forced choice method and ask which of two systems is more human-like. We extract a quantitative grade for each model according to its resemblance to the human handshake motion and name it "Model Human-Likeness Grade" (MHLG). We present three methods to estimate the MHLG. (i) By calculating the proportion of subjects' answers that the model is more human-like than the human; (ii) By comparing two weighted sums of human and model handshakes we fit a psychometric curve and extract the point of subjective equality (PSE); (iii) By comparing a given model with a weighted sum of human and random signal, we fit a psychometric curve to the answers of the interrogator and extract the PSE for the weight of the human in the weighted sum. Altogether, we provide a protocol to test computational models of the human handshake. We believe that building a model is a necessary step in understanding any phenomenon and, in this case, in understanding the neural mechanisms responsible for the generation of the human handshake.

We present a Turing-like Handshake test administered through a telerobotic system in which the interrogator is holding a robotic stylus and interacting with another party (human or artificial). We use a forced choice method, and extract a measure for the similarity of the artificial model to a human handshake.

モーター知能一次元チューリングライクハンドシェイクテスト

In the Turing test, a computer model is deemed to "think intelligently" if it can generate answers that are not distinguishable from those of a human.  ...

神経科学

The Mouse Forced Swim Test

The forced swim test is a rodent behavioral test used for evaluation of antidepressant drugs, antidepressant efficacy of new compounds, and experimental manipulations that are aimed at rendering or preventing depressive-like states. Mice are placed in an inescapable transparent tank that is filled with water and their escape related mobility behavior is measured. The forced swim test is straightforward to conduct reliably and it requires minimal specialized equipment. Successful implementation of the forced swim test requires adherence to certain procedural details and minimization of unwarranted stress to the mice. In the protocol description and the accompanying video, we explain how to conduct the mouse version of this test with emphasis on potential pitfalls that may be detrimental to interpretation of results and how to avoid them. Additionally, we explain how the behaviors manifested in the test are assessed.

The forced swim test is validated as an experimental approach to assess potential antidepressant efficacy in rodents. Experimental animals are placed in a tank of water and escape-related mobility behavior is quantified. The common procedures for the mouse version of this test are described.

マウス強制水泳試験

The forced swim test is a rodent behavioral test used for evaluation of antidepressant drugs, antidepressant efficacy of new compounds, and experimental ...

The Fibular Nerve Injury Method: A Reliable Assay to Identify and Test Factors That Repair Neuromuscular Junctions

The neuromuscular junction (NMJ) undergoes deleterious structural and functional changes as a result of aging, injury and disease. Thus, it is imperative to understand the cellular and molecular changes involved in maintaining and repairing NMJs. For this purpose, we have developed a method to reliably and consistently examine regenerating NMJs in mice. This nerve injury method involves crushing the common fibular nerve as it passes over the lateral head of the gastrocnemius muscle tendon near the knee. Using 70 day old female mice, we demonstrate that motor axons begin to reinnervate previous postsynaptic targets within 7 days post-crush. They completely reoccupy their previous synaptic areas by 12 days. To determine the reliability of this injury method, we compared reinnervation rates between individual 70 day old female mice. We found that the number of reinnervated postsynaptic sites was similar between mice at 7, 9, and 12 days post-crush. To determine if this injury assay can also be used to compare molecular changes in muscles, we examined levels of the gamma-subunit of the muscle nicotinic receptor (gamma-AChR) and the muscle-specific kinase (MuSK). The gamma-AChR subunit and MuSK to are highly upregulated following denervation and return to normal levels following reinnervation of NMJs. We found a close relationship between transcript levels for these genes and innervation status of muscles. We believe that this method will accelerate our understanding of the cellular and molecular changes involved in repairing the NMJ and other synapses.

We have developed a nerve injury method to reliably examine muscle reinnervation, and thus regeneration of neuromuscular junctions in mice. This technique involves injuring the common fibular nerve via a simple and highly reproducible surgery. Muscle reinnervation in then assessed by whole-mounting the extensor digitorum longus muscle.

腓骨神経損傷方法：神経筋接合部を修復信頼性の高い同定するためのアッセイおよびテスト要因

The neuromuscular junction (NMJ) undergoes deleterious structural and functional changes as a result of aging, injury and disease. Thus, it is imperative ...

Diffuse Reflectance Spectroscopy: Getting the Capillary Refill Test Under One's Thumb

The capillary refill test was introduced in 1947 to help estimate circulatory status in critically ill patients. Guidelines commonly state that refill should occur within 2 s after releasing 5 s of firm pressure (e.g., by the physician&#39;s finger) in the normal healthy supine patient. A slower refill time indicates poor skin perfusion, which can be caused by conditions including sepsis, blood loss, hypoperfusion, and hypothermia. Since its introduction, the clinical usefulness of the test has been debated. Advocates point out its feasibility and simplicity and claim that it can indicate changes in vascular status earlier than changes in vital signs such as heart rate. Critics, on the other hand, stress that the lack of standardization in how the test is performed and the highly subjective nature of the naked eye assessment, as well as the test&#39;s susceptibility to ambient factors, markedly lowers the clinical value. The aim of the present work is to describe in detail the course of the refill event and to suggest potentially more objective and exact endpoint values for the capillary refill test using diffuse polarization spectroscopy.

This protocol describes how the use of diffuse polarization spectroscopy can improve the clinical usefulness of the capillary refill test. We suggest a more detailed analysis of the course of the capillary refill in healthy volunteers using diffuse reflectance spectroscopy videos and new informatic endpoints.

拡散反射率分光: 取得 1 つの親指の下の毛細血管リフィル テスト

The capillary refill test was introduced in 1947 to help estimate circulatory status in critically ill patients. Guidelines commonly state that refill ...

Frequent Tail-tip Blood Sampling in Mice for the Assessment of Pulsatile Luteinizing Hormone Secretion

In many endocrine systems, circulating factors or hormones are not released continuously, but are secreted as a discrete pulse in response to a releasing factor. Single-point sampling measures are inadequate to fully understand the biological significance of the secretory pattern of pulsatile hormones either under normal physiologic conditions or during conditions of dysregulation. Luteinizing hormone (LH) is synthesized by the anterior pituitary gonadotrope&#160;cells and secreted in a pulsatile pattern which requires frequent collection of blood samples for pulse assessment. This has not been possible in mice until recently, due to the development of a high-sensitivity LH assay and advancement in a technique for frequent low-volume sample collection, initially described by Steyn and colleagues.1 Here we describe a protocol for the frequent peripheral blood sample collection from mice with sufficient handling acclimatization to detect pulsatile secretion of LH. The current protocol details an expanded acclimatization period that allows assessment of robust and continuous pulses of LH over multiple hours. In this protocol, the tip of the tail is clipped&#160;and blood is collected from the tail using a hand-held pipette. For assessment of pulsatile LH in gonadectomized mice, serial samples are collected every 5-6 min for 90-180 min. Importantly, the collection of blood and measurement of robust pulses of LH can be accomplished in awake, freely behaving mice, given adequate handling acclimatization and effort to minimize environmental stressors. Sufficient acclimatization can be achieved within 4-5 weeks prior to blood collection. This protocol highlights advances in the methodology to ensure collection of whole blood samples for assessment of pulsatile LH secretion patterns over multiple hours in the mouse, a powerful animal model for neuroendocrine research.

Here we present a tail-tip blood sampling protocol for frequent sample collection in unrestrained mice. This method is useful for assessing patterns of pulsatile luteinizing hormone secretion and could be adapted for analysis of other circulating factors.

拍動性の黄体形成ホルモンの分泌の評価のためマウス尾先端採血を頻繁に

In many endocrine systems, circulating factors or hormones are not released continuously, but are secreted as a discrete pulse in response to a releasing ...

A Metric Test for Assessing Spatial Working Memory in Adult Rats Following Traumatic Brain Injury

Impairments to sensory, short-term, and long-term memory are common side effects after traumatic brain injury (TBI). Due to the ethical limitations of human studies, animal models provide suitable alternatives to test treatment methods, and to study the mechanisms and related complications of the condition. Experimental rodent models have historically been the most widely used due to their accessibility, low cost, reproducibility, and validated approaches. A metric test, which tests the ability to recall the placement of two objects at various distances and angles from one another, is a technique to study impairment in spatial working memory (SWM) after TBI. The significant advantages of metric tasks include the possibility of dynamic observation, low cost, reproducibility, relative ease of implementation, and low stress environment. Here, we present a metric test protocol to measure impairment of SWM in adult rats after TBI. This test provides a feasible way to evaluate physiology and pathophysiology of brain function more effectively.

Traumatic brain injury (TBI) is commonly associated with memory impairment. Here, we present a protocol to assess spatial working memory after TBI via a metric task. A metric test is a useful tool to study spatial working memory impairment after TBI.

外傷性脳損傷後の成人ラットの空間ワーキングメモリ評価のための測定基準試験

Impairments to sensory, short-term, and long-term memory are common side effects after traumatic brain injury (TBI). Due to the ethical limitations of ...

脳波記録の同時実施によるラットからの脳脊髄液および血液の回収

Sampling Cerebrospinal Fluid and Blood from Lateral Tail Vein in Rats During EEG Recordings

Because the composition of body fluids reflects many physiological and pathological dynamics, biological liquid samples are commonly obtained in many experimental contexts to measure molecules of interest, such as hormones, growth factors, proteins, or small non-coding RNAs. A specific example is the sampling of biological liquids in the research of biomarkers for epilepsy. In these studies, it is desirable to compare the levels of molecules in cerebrospinal fluid (CSF) and in plasma, by withdrawing CSF and plasma in parallel and considering the time distance of the sampling from and to seizures. The combined CSF and plasma sampling, coupled with video-EEG monitoring in epileptic animals, is a promising approach for the validation of putative diagnostic and prognostic biomarkers. Here, a procedure of combined CSF withdrawal from cisterna magna and blood sampling from the lateral tail vein in epileptic rats that are continuously video-EEG monitored is described. This procedure offers significant advantages over other commonly used techniques. It permits rapid sampling with minimal pain or invasiveness, and reduced time of anesthesia. Additionally, it can be used to obtain CSF and plasma samples in both tethered and telemetry EEG recorded rats, and it may be used repeatedly across multiple days of experiment. By minimizing the stress due to sampling by shortening isoflurane anesthesia, measures are expected to reflect more accurately the true levels of investigated molecules in biofluids. Depending on the availability of an appropriate analytical assay, this technique may be used to measure the levels of multiple, different molecules while performing EEG recording at the same time.

著者スポットライト:てんかんバイオマーカー探索のための高品質なCSFおよび血液サンプルの取得 

The protocol shows repeated cerebrospinal fluid and blood collections from epileptic rats performed in parallel with continuous video-electroencephalogram (EEG) monitoring. These are instrumental for exploring possible links between changes in various body fluid molecules and seizure activity.

脳波記録中のラットの側尾静脈からの脳脊髄液および血液のサンプリング

Because the composition of body fluids reflects many physiological and pathological dynamics, biological liquid samples are commonly obtained in many ...

ショウジョウバエ神経系からの遺伝子のポリ(A)長の定量化

Measurement of Poly A Tail Length from Drosophila Larva Brain and Cell Line

Polyadenylation is a crucial posttranscriptional modification that adds poly(A) tails to the 3' end of mRNA molecules. The length of the poly(A) tail is tightly regulated by cellular processes. Dysregulation of mRNA polyadenylation has been associated with abnormal gene expression and various diseases, including cancer, neurological disorders, and developmental abnormalities. Therefore, comprehending the dynamics of polyadenylation is vital for unraveling the complexities of mRNA processing and posttranscriptional gene regulation. 
This paper presents a method for measuring poly(A) tail lengths in RNA samples isolated from Drosophila larval brains and Drosophila Schneider S2 cells. We employed the guanosine/inosine (G/I) tailing approach, which involves the enzymatic addition of G/I residues at the 3' end of mRNA using yeast poly(A) polymerase. This modification protects the RNA's 3' end from enzymatic degradation. The protected full-length poly(A) tails are then reverse-transcribed using a universal antisense primer. Subsequently, PCR amplification is performed using a gene-specific oligo that targets the gene of interest, along with a universal sequence oligo used for reverse transcription. 
This generates PCR products encompassing the poly(A) tails of the gene of interest. Since polyadenylation is not a uniform modification and results in tails of varying lengths, the PCR products display a range of sizes, leading to a smear pattern on agarose gel. Finally, the PCR products are subjected to high-resolution capillary gel electrophoresis, followed by quantification using the sizes of the poly(A) PCR products and the gene-specific PCR product. This technique offers a straightforward and reliable tool for analyzing poly(A) tail lengths, enabling us to gain deeper insights into the intricate mechanisms governing mRNA regulation.

著者スポットライト:Poly A Tail解析技術によるmRNA研究のフロンティアの探求

The protocol describes an efficient and reliable method for quantifying the poly(A) length of the gene of interest from the Drosophila nervous system, which can be easily adapted to tissues or cell types from other species.

ショウジョウバエ幼虫の脳および細胞株からのPoly A尾長の測定

Polyadenylation is a crucial posttranscriptional modification that adds poly(A) tails to the 3' end of mRNA molecules. The length of the poly(A) tail is ...