This study was supported by the NIH grant NS074559 (to C. K.). We thank all collaborators who contributed to our research articles that the present methodology report is based upon.

Este protocolo ha sido aprobado por el Cuidado y Uso de Animales Comité Institucional (IACUC) de la Universidad de Emory y sigue los Institutos Nacionales de la Salud Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio. 1. Configuración <ol><li> Preparar el lecho quirúrgico en el cojín de calentamiento conectada con bomba de calor a 37 ° C durante al menos 15 minutos antes de la cirugía. Coloque un rollo de cuello con el cañón de 3 ml jeringa en el lecho quirúrgico. Preparar el gas de la anestesia con isoflurano 2% en el aire médica. </li><li> Preparar fórceps tratado al autoclave, tijeras, tenedores micro agujas, pinzas hemostáticas, hisopos de algodón y suturas. Preparar adhesivo tisular y ungüento para los ojos. </li><li> Configurar el sistema de hipoxia y controladores de temperatura con lámpara de calefacción y la sonda rectal. Preparar gas hipoxia con 2% de isoflurano en 7,5% de O 2 equilibrada por el 92,5% de N 2. </li><li> Una hora antes de la cirugía, los ratones se analgesized por inyección subcutánea de una liberación lenta Meloxicam (4,0 mg / kg). </li></ol> &lt;p class = &quot;jove_title&quot;&gt; 2. Transient cerebral hipoxia-isquemia (Figura 1B) <ol><li> Anestesiar C57BL macho 10-13 semanas de edad / 6 ratones con un peso de 22 a 30 g en la cámara de inducción de la anestesia con isoflurano 3% hasta que el animal no responde a la compresión de los pies, y luego quitar el pelo en el cuello derecha usando una máquina de afeitar electrónica. </li><li> Coloca los ratones en el lecho quirúrgico conectado con 2% de isoflurano en el aire médica a un caudal de 2 l / min. Extremidades anteriores Secure estiradas a lo largo rollo de cuello a los lados con cinta médica. </li><li> Limpie el sitio de la cirugía para la incisión con betadine seguido por el alcohol y luego hisopos de algodón. </li><li> Bajo el microscopio de disección, hacer una incisión de 0,5 cm derecha del cuello uterino usando un fórceps rectos y un micro tijeras aproximadamente 0,2 cm lateral de la piel en la línea media. </li><li> Use un par de pinzas dentadas finas de separar la fascia y el tejido para exponer la arteria carótida común derecha (RCCA). Separar cuidadosamente el RCCA desde el nervio vagal usando un par de pinzas lisas finas. </li><li> Vivo nudo dos precortadas 5-0 sutura de seda (desmontable) del RCCA, y luego coser la piel utilizando 4-0 Nylon sutura monofilamento (Figura 1C). </li><li> Aplicar pomada ocular en ambos ojos para evitar la sequedad. </li><li> Transferir rápidamente los ratones al sistema de hipoxia y poner la nariz y la boca en la cara-máscara con 2% de isoflurano en 7,5% O 2 a un caudal de 0,5-1 L / min durante 30 min. <ol><li> Durante la hipoxia, utilizar reguladores de temperatura con lámparas de calor para controlar la temperatura rectal a 37,5 ± 0,5 ° C. Monitorear la frecuencia respiratoria en 80 a 120 respiraciones / min. El mantenimiento de la temperatura corporal por encima de 37 ° C durante la hipoxia es importante crear infarto cerebral coherente. Frecuencia respiratoria baja por lo general ocurre después de 20 min de hipoxia. Retire la mascarilla y permitir el suministro de aire normal si la frecuencia respiratoria cae por debajo de 40. Esto se lleva a 1-2 minutos y no cuenta en la duración hipoxia 30 min. </li></ol></li><li> Después de la hipoxia, transferirlos ratones a una cama quirúrgica y suelte las dos suturas de RCCA. Cierre la herida con pegamento tisular y, a continuación, volver a la jaula de los ratones. Excluir a los animales si tanto de dos nudos vivos se liberan de forma inesperada después de la hipoxia. </li><li> Monitorear los ratones para 5-10 minutos para recuperarse de la hipoxia y la anestesia. Coloque la comida humedecida en la jaula y devolverlo al centro de cuidado de los animales. Nota: Los animales que presenten leves a comportamientos en circuito severa a las 24 horas después de THI se correlacionan con infracción cerebro. La mayoría de los animales con síntomas convulsivos mueren antes de que el punto de tiempo de 24 horas después de THI. </li></ol> 3. láser Speckle de contraste de imagen Nota: Aunque este no es un procedimiento esencial del modelo THI, un láser speckle sistema de imágenes de contraste de dos dimensiones 16 puede ser utilizado para caracterizar los cambios de flujo sanguíneo cerebral (CBF) durante o después de la hipoxia transitoria-isquemia. Para documentar las alteraciones de la CBF bajo THI, ficha inmediatamente después del step 2.6. Alternativamente, para comparar la recuperación CBF después THI insulto, estos procedimientos se pueden realizar después de la etapa 2.10. <ol><li> Publicar un ratón anestesiado en decúbito prono y realizar una incisión de 1 cm de largo en el cuero cabelludo con el cráneo impresionados pero sin abrir. </li><li> Monitorear CBF en ambos hemisferios cerebrales bajo un generador de imágenes del flujo sanguíneo de acuerdo con el protocolo del fabricante y empezar a grabar el flujo sanguíneo cerebral inmediatamente después de la cirugía CCAO (paso 2.6). Continuar durante 50 minutos. </li><li> Mostrar imagen CBF con unidades arbitrarias en una paleta de 16 colores y analizar en tiempo real las regiones seleccionadas utilizando el software MoorFLPI siguiendo las instrucciones del fabricante (Figura 2). </li><li> Después de grabar la imagen CBF, cierre el cuero cabelludo con adhesivo tisular y devolver el animal a la jaula. </li></ol> 4. Administración de tPA <ol><li> Inyectar animales en la vena de la cola con el disolvente o 10 mg / kg de tPA recombinante (220-300 y# 956; l de 1 mg / m tPA) a las 0,5, 1, o 4 horas después de tCCAo más hipoxia (Figura 4). </li></ol> Detección de Daño 5. cerebro con varios diferentes opciones Nota: Para recoger muestras de cerebro, la eutanasia a los ratones a los 1, 4 ó 24 horas después de THI. <ol><li> Realizar cuantificación del volumen de infarto por in vivo cloruro de 2,3,5-trifeniltetrazolio método (TTC) a las 24 horas después de THI insulto como se describe anterior. 17 <ol><li> Intraperitoneal inyectar animales con solución 1,4 M manitol (~ 0,1 ml / g de peso corporal) 30 minutos antes de la perfusión transcardial. Ratones perfundir transcardial con PBS seguido por 10 ml de 2% TTC. </li><li> Retire el cerebro de los animales con los instrumentos quirúrgicos después de 10 minutos y colocar en paraformaldehído al 4% para la fijación durante la noche y en la sección 1 mm de espesor con un vibratome. </li><li> Toma una serie de cuatro diapositivas cerebro seccionado por microscopio digital y quantify el volumen del infarto como la relación de la zona infartada (área blanca en el lado derecho) a la zona de la intacto, hemisferio contralateral usando el software ImageJ. </li></ol></li><li> Alternativamente, lleve a cabo la formación de trombosis por inmunofluorescencia en 1 hora después de THI insulto. <ol><li> Congelar el cerebro fija en compuesto OCT y la sección de los cerebros de 12 micras de espesor utilizando un criostato. </li><li> Incubar el portaobjetos cerebro con anticuerpo de conejo anti-fibrinógeno (1: 100) siguiendo por cabra anti-conejo Alexa 488 Fluro colorante (1: 200) para observar la fluorescencia en un microscopio fluorescente. </li></ol></li><li> Alternativamente, realice la obstrucción buque por inyección en la vena de la cola de 100 l 2% colorante azul de Evans en 4 horas después de THI insulto. <ol><li> La eutanasia a los ratones y rápidamente cortar la cabeza para eliminar cerebros en paraformaldehído al 4% después de la inyección de azul de Evans. Nota: Se necesita 5-10 min para Evans circulación azul con el color azul de tanto delanteras y traseras extremidades. </li><li> SECTIen cerebros fijos a 100 micras de espesor usando un micrótomo de deslizamiento y observar la fluorescencia utilizando un filtro de emisión de 680 nm en un microscopio fluorescente. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Broderick, J. P., Hacke, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+acute+ischemic+stroke:+Part+I:+recanalization+strategies.">Treatment of acute ischemic stroke: Part I: recanalization strategies.</a> Circulation. 106 (12), 1563-1569 (2002).</li><li>Hossmann, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiological+basis+of+translational+stroke+research.">Pathophysiological basis of translational stroke research.</a> Folia Neuropathol. 47 (3), 213-227 (2009).</li><li>Hossmann, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+two+pathophysiologies+of+focal+brain+ischemia:+implications+for+translational+stroke+research.">The two pathophysiologies of focal brain ischemia: implications for translational stroke research.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 32 (7), 1310-1316 (2012).</li><li>Macrae, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+stroke+research--advantages+and+disadvantages+of+the+most+common+rodent+models+of+focal+ischaemia.">Preclinical stroke research--advantages and disadvantages of the most common rodent models of focal ischaemia.</a> Br. J. Pharmacol. 164 (4), 1062-1078 (2011).</li><li>Niessen, F., Hilger, T., Hoehn, M., Hossmann, K. 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J. Pathol. 169 (2), 566-583 (2006).</li><li>Shereen, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+diffusion+tensor+imaging+and+neuropathological+correlation+in+a+murine+model+of+hypoxia-ischemia-induced+thrombotic+stroke.">Ex vivo diffusion tensor imaging and neuropathological correlation in a murine model of hypoxia-ischemia-induced thrombotic stroke.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 31 (4), 1155-1169 (2011).</li><li>Michaud, J. P., Pimentel-Coelho, P. M., Tremblay, Y., Rivest, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+Ly6C+low+monocytes+after+cerebral+hypoxia-ischemia+in+adult+mice.">The impact of Ly6C low monocytes after cerebral hypoxia-ischemia in adult mice.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 34 (7), e1-e9 (2014).</li><li>Zoppo, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virchow's+triad:+the+vascular+basis+of+cerebral+injury.">Virchow's triad: the vascular basis of cerebral injury.</a> Rev. Neurol. Dis. 5, 12-21 (2008).</li><li>Dunn, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser+speckle+contrast+imaging+of+cerebral+blood+flow.">Laser speckle contrast imaging of cerebral blood flow.</a> Annals Biomed. Eng. 40 (2), 367-377 (2012).</li><li>Sun, Y. Y., Yang, D., Kuan, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mannitol-facilitated+perfusion+staining+with+2,3,5-triphenyltetrazolium+chloride+(TTC)+for+detection+of+experimental+cerebral+infarction+and+biochemical+analysis.">Mannitol-facilitated perfusion staining with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) for detection of experimental cerebral infarction and biochemical analysis.</a> J. Neurosci. Methods. 203 (1), 122-129 (2012).</li><li>Lozano, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+and+regional+mortality+from+235+causes+of+death+for+20+age+groups+in+1990+and+2010:+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study.">Global and regional mortality from 235 causes of death for 20 age groups in 1990 and 2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study.</a> Lancet. 380 (9859), 2095-2128 (2010).</li><li>Murray, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disability-adjusted+life+years+(DALYs)+for+291+diseases+and+injuries+in+21+regions,+1990-2010:+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study.">Disability-adjusted life years (DALYs) for 291 diseases and injuries in 21 regions, 1990-2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study.</a> Lancet. 380 (9859), 2197-2223 (2012).</li><li>Dirnagl, U., Macleod, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stroke+research+at+a+road+block:+the+streets+from+adversity+should+be+paved+with+meta-analysis+and+good+laboratory+practice.">Stroke research at a road block: the streets from adversity should be paved with meta-analysis and good laboratory practice.</a> Br. J. 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C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular-bed--specific+hemostasis+and+hypercoagulable+states.">Vascular-bed--specific hemostasis and hypercoagulable states.</a> New Eng. J. Med. 340 (20), 1555-1564 (1999).</li><li>Majid, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+vulnerability+to+permanent+focal+cerebral+ischemia+among+3+common+mouse+strains.">Differences in vulnerability to permanent focal cerebral ischemia among 3 common mouse strains.</a> Stroke. 31 (11), 2707-2714 (2000).</li></ol>

El ictus es un problema de salud importante de creciente importancia para cualquier sociedad con una población que envejece. A nivel mundial, el accidente cerebrovascular es la segunda causa principal de la muerte con un estimado de 5.9 millones de eventos fatales en 2010, lo que equivale al 11,1% de todas las muertes 18. El accidente cerebrovascular es también la tercera causa de discapacidad años de vida ajustados (AVAD) perdidos a nivel mundial en 2010, pasando de la quinta posición en 1990 19.</s...

Trombolisis y recanalización es la terapia más eficaz de accidente cerebrovascular isquémico agudo en la práctica clínica 1. Sin embargo, la mayoría de la investigación preclínica neuroprotección se realizó en un modelo transitorio mecánico obstrucción (oclusión de la arteria cerebral media de sutura intraluminal) que produce la rápida recuperación del flujo sanguíneo cerebral después de la retirada de la oclusión vascular y muestra poco a ningún beneficio por tPA trombólisis. Se ha sugerido que la dudosa elección de los modelos de accidente cerebrovascular contribuyó, al menos en parte, a la dificultad en la traducción de la terapia neuroprotectora a los pacientes 2,3. Por lo tanto, hay una demanda creciente para el empleo de modelos de ictus tromboembólico tPA-respuesta en la investigación preclínica, pero estos modelos también tienen problemas técnicos (ver Discusión) 4-7. Aquí se describe un nuevo modelo basado en accidente cerebrovascular trombótico (THI) unilateral insulto hipóxico-isquémico transitorio y sus respuestas a la terapia intravenosa tPA 8. El modelo de carrera THI fue desarrollado sobre la base del procedimiento de Levine (ligadura permanente de la arteria carótida común unilateral seguido por la exposición a la hipoxia transitoria en una cámara) que se inventó para los experimentos con ratas adultas en 1960 9. El procedimiento original Levine desvaneció en la oscuridad, porque sólo produce daño cerebral variable, pero el mismo insulto causado neuropatología consistente en crías de roedores cuando fue reintroducido por Roberto Vannucci y sus colegas como un modelo de neonatal encefalopatía hipóxico-isquémica (EHI) en 1981 10. En los últimos años, algunos investigadores re-adaptar el modelo Levine-Vannucci a ratones adultos mediante el ajuste de la temperatura en la cámara hipóxica 11. Es plausible que las lesiones cerebrales inconsistentes en el procedimiento original Levine pueden surgir de la fluctuación de las temperaturas corporales de roedores adultos en la cámara hipóxica. Para probar esta hipótesis, hemos modificado el procedimiento Levine mediante la administración de gas hipóxicoa través de una mascarilla, mientras se mantiene la temperatura del núcleo de roedores a 37 ° C sobre la mesa quirúrgica 12. Como era de esperar, el control estricto de la temperatura corporal aumenta considerablemente la reproducibilidad de la patología cerebral inducida por HI. El insulto HI también provoca la coagulación, la autofagia y grises y lesiones 13 la sustancia blanca. Otros investigadores también han utilizado el modelo HI para investigar después del accidente cerebrovascular respuestas inflamatorias 14. Una característica única del modelo de accidente cerebrovascular HI es que sigue de cerca la tríada de la Virchow de la formación de trombos, incluida la estasis del flujo de sangre, lesión endotelial (por ejemplo, debido al estrés oxidativo inducido-HI), y la hipercoagulabilidad (activación de las plaquetas HI inducida) ( Figura 1 A) 15. Como tal, el modelo HI puede capturar algunos mecanismos fisiopatológicos relacionados con el accidente cerebrovascular isquémico en el mundo real. Con esta idea en mente, hemos perfeccionado aún más el modelo HI con ligadura reversible de la ONUarteria carótida común ilateral (por lo tanto, para crear un insulto HI transitorio), y se ensayó sus respuestas a tPA trombolisis con o sin edavarona. Edaravona es un eliminador de radicales libres ya aprobado en Japón para tratar el ictus isquémico dentro de las 24 horas de aparición 9. Nuestros experimentos mostraron que lo más breve 30 min transitoria HI desencadena el infarto trombótico, y que combinado tratamiento con tPA-edaravona confiere beneficios sinérgicos 8. Aquí se describen los procedimientos quirúrgicos detalladas y consideraciones metodológicas del modelo de THI, que pueden ser utilizados para optimizar los tratamientos de reperfusión de accidente cerebrovascular isquémico agudo.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>adult male mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>C57BL/6&#160;</td>
			<td>10~13 weeks old (22~30 g)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mobile Laboratory Animal Anesthesia System</td>
			<td>VetEquip</td>
			<td>901807</td>
			<td>anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical air (Compressed) air tank</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>UN1002</td>
			<td>anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Piramal Healthcare</td>
			<td>NDC 66794-013-25</td>
			<td>anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-Station Lab Animal AnesthesiaSystem</td>
			<td>Surgivet</td>
			<td>V703501</td>
			<td>hypoxia system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7.5% O2 balanced by 92.5% N2 tank</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>UN1956</td>
			<td>hypoxia system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temperature Controller with heating lamp&#160;</td>
			<td>Cole Parmer&#160;</td>
			<td>EW-89000-10</td>
			<td>temperature controllers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rectal probe</td>
			<td>Cole Parmer&#160;</td>
			<td>NCI-00141PG</td>
			<td>temperature controllers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting microscope&#160;</td>
			<td>Olympus&#160;</td>
			<td>SZ40</td>
			<td>surgical setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat pump with warming pad</td>
			<td>Gaymar&#160;</td>
			<td>TP700</td>
			<td>surgical setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine curved forceps (serrated)</td>
			<td>FST</td>
			<td>11370-31</td>
			<td>surgical instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine curved forceps (smooth)</td>
			<td>FST</td>
			<td>11373-12</td>
			<td>surgical instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>micro scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>15000-03</td>
			<td>surgical instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>micro needle holders</td>
			<td>FST</td>
			<td>12060-01</td>
			<td>surgical instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halsted-Mosquito hemostats</td>
			<td>FST</td>
			<td>13008-12</td>
			<td>surgical instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-0 silk suture&#160;</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>624143</td>
			<td>surgical supplies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4-0 Nylon monofilament suture</td>
			<td>LOOK</td>
			<td>766B</td>
			<td>surgical supplies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue glue</td>
			<td>Abbott Laboratories</td>
			<td>NC9855218</td>
			<td>surgical supplies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Vet ointment</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>NC0138063&#160;</td>
			<td>eye dryness prevention&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MoorFLPI-2 blood flow imager</td>
			<td>Moor</td>
			<td>780-nm laser source</td>
			<td>Laser Speckle Contrast Imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mannitol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M4125</td>
			<td>in-vivo TTC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC)&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8877</td>
			<td>in-vivo TTC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibratome</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51425</td>
			<td>brain section for in-vivo TTC&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital microscope</td>
			<td>Dino-Lite</td>
			<td>AM2111</td>
			<td>whole-braina imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O.C.T compound</td>
			<td>Sakura Finetek</td>
			<td>4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>goat anti-rabbit Alexa Fluro 488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11008</td>
			<td>Immunohistochemistry</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Vibratome</td>
			<td>ultrapro 5000</td>
			<td>brain section for IHC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Evans blue</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E2129</td>
			<td>Detecting vascular perfusion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>5000</td>
			<td>brain section for histology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Avertin (2, 2, 2-Tribromoethanol)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T48402</td>
			<td>euthanasia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>DP73</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a thrombotic stroke model based on transient cerebral hypoxia-ischemia

Investigación Stroke ha sufrido muchos reveses en la traducción de las terapias neuroprotectoras en la práctica clínica. En contraste, la terapia del mundo real (tPA trombolisis) rara vez produce beneficios en modelos experimentales basados ​​en la oclusión mecánica, que dominan la investigación preclínica derrame cerebral. Esta división entre el banco y la cabecera sugiere la necesidad de emplear modelos tPA-sensibles en la investigación preclínica derrame cerebral. Para este fin, un modelo de accidente cerebrovascular trombótico simple y tPA-reactiva se inventó y se describe aquí. Este modelo consiste en la oclusión transitoria de la arteria carótida común unilateral y la entrega de 7,5% de oxígeno a través de una máscara facial en ratones adultos durante 30 min, manteniendo la temperatura rectal de los animales a 37,5 ± 0,5 ° C. Aunque la ligadura reversible de la arteria carótida unilateral o hipoxia cada suprime el flujo sanguíneo cerebral sólo transitoriamente, la combinación de ambos insultos causada duradera déficit de reperfusión, la fibrina y la deposición de plaquetas, y gran INFARct en el territorio de la arteria cerebral media suministrado. Es importante destacar que la cola de la vena inyección de tPA recombinante en 0,5, 1, o 4 horas después de la THI (10 mg / kg) proporcionó una reducción dependiente del tiempo de la tasa de mortalidad y el tamaño del infarto. Este nuevo modelo de accidente cerebrovascular es simple y puede ser estandarizado a través de laboratorios para comparar los resultados experimentales. Además, se induce la trombosis sin craniectomía o introducir émbolos preformadas. Teniendo en cuenta estas ventajas únicas, el modelo THI es una adición útil al repertorio de la investigación preclínica derrame cerebral.

Bidimensional de imágenes de contraste de moteado de láser (LSCI) 16 se utilizó para comparar las alteraciones del flujo sanguíneo cerebral (CBF) por la oclusión transitoria de la carótida 30 min unilateral (tCCAO), la exposición 30 min a la hipoxia (7,5% de oxígeno), y 30 min unilateral carotídea ligadura en condiciones de hipoxia (THI). Este experimento reveló que tCCAO bajo normoxia suprimió la CBF en el hemisferio carótida se ligó a ~ 50% del valor de línea de base, que se recuperó rápidam...

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A Thrombotic Stroke Model Based On Transient Cerebral Hypoxia-ischemia

Thromboembolic stroke models are vital tools for optimizing the recanalization therapy. Here we report a murine thrombotic stroke model based on transient cerebral hypoxic-ischemic (tHI) insult, which triggers thrombosis and infarction, and responds favorably to tissue plasminogen activator (tPA)-mediated fibrinolysis in a therapeutic window similar to those in stroke patients.

Un accidente cerebrovascular trombótico Basado En transitoria cerebral por hipoxia-isquemia Modelo

Stroke research has endured many setbacks in translating neuroprotective therapies into clinical practice. In contrast, the real-world therapy (tPA ...

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JoVE Journal

Medicine

14.6K vistas.  The Emory University School of Medicine. Thromboembolic stroke models are vital tools for optimizing the recanalization therapy. Here we report a murine thrombotic stroke model based on transient cerebral hypoxic-ischemic (tHI) insult, which triggers thrombosis and infarction, and responds favorably to tissue plasminogen activator (tPA)-mediated fibrinolysis in a therapeutic window similar to those in stroke patients. 