El enfoque del modelo de accidente cerebrovascular de fototrombosis puede ser adecuado para estudios celulares y moleculares de plasticidad cortical debido a los bordes limitados y la flexibilidad para inducir lesiones en diferentes áreas de la corteza. Tres ventajas principales distinguen el modelo de fototrombosis de otros modelos de accidente cerebrovascular, la posibilidad de dirigir la lesión a la región deseada, su alta reproducibilidad y baja mortalidad. La dosificación adecuada de rosa de bengala es fundamental para el éxito y la estabilidad del modelo.
Los resultados dependen de especificaciones técnicas como la potencia del láser, el tiempo de aplicación cruzada y el chelín óptico de la corteza no afectada. Comience disolviendo la rosa de bengala en una solución salina al 0,9% para una concentración final de 10 miligramos por mililitro. Esterilice meticulosamente todos los instrumentos con un esterilizador de plomo caliente y desinfecte todas las superficies antes y después de la cirugía con un aerosol desinfectante microbiano.
Prepare una jeringa llena de solución salina para mantener el área de operación hidratada y prepare el gas de anestesia. Mida el peso corporal del ratón para ajustar la dosis de rosa de bengala a inyectar. Ajuste la almohadilla térmica controlada por retroalimentación asociada para mantener la temperatura corporal del ratón.
Una vez que el ratón esté completamente anestesiado y fijado en el marco estereotáctico, inserte suavemente la sonda rectal para controlar la temperatura corporal del ratón durante todo el procedimiento quirúrgico. Aplique el ungüento ocular de pantenol Dex en ambos ojos y limpie la piel y el pelaje circundante con un agente desinfectante. Use tijeras para hacer una sola incisión longitudinal de dos a dos centímetros y medio y retraiga para exponer el cráneo.
Use algodón para quitar suavemente el periostio y localizar las suturas coronales. Use gafas protectoras mientras enciende el láser de 561 nanómetros y marque los más de tres milímetros a la izquierda, luego apague el láser y enganche la pegatina con un orificio de cuatro milímetros de diámetro en las coordenadas marcadas. Inyecte el ratón intraparietal con rosa de bengala.
Coloque el rayo láser a una distancia de cuatro a cinco centímetros del cráneo. Encienda el láser e ilumine el cráneo durante 20 minutos. Rehidrata el cráneo aplicando dos gotas de solución salina al 0,9%.
Después de suturar la herida, coloque el ratón en una cámara de recuperación a 37 grados centígrados para recuperarse de la anestesia. Después de una hora, coloque el ratón de nuevo en la jaula en una habitación con temperatura controlada. La tinción violeta cristalina a las secciones cerebrales coronales seriadas se utilizó para el análisis de entrada de volumen de infarto después de 24 horas de la inducción del accidente cerebrovascular.
La variabilidad de este modelo de accidente cerebrovascular fue baja, y el volumen medio de infarto fue de 29,3 milímetros cúbicos, lo que representa el 23% del hemisferio cerebral. La lesión de fototrombosis causó un deterioro motor sensorial moderado y a largo plazo indicado por la puntuación neuro compuesta. Los animales con accidente cerebrovascular tuvieron un cambio significativo en la puntuación neuro 24 horas después de la cirugía.
A pesar de que las diferencias persistieron, los ratones con accidente cerebrovascular mejoraron con el tiempo. En los ratones sometidos a la rosa de bengala más iluminación, el peso corporal y la temperatura corporal disminuyeron 24 horas después de la cirugía. Sin embargo, dentro de los tres días posteriores a la cirugía, se observó recuperación.
Los cambios isquémicos se confirmaron mediante imágenes láser. Los resultados indicaron que la rosa de bengala o la iluminación láser por sí sola no produjeron una lesión, mientras que la aplicación simultánea de ambas generó un área redonda hipoperfundida rodeada por la estrecha zona oligomérica. La tinción violeta de cristal y túnel para la evaluación del volumen del infarto 24 horas después de la cirugía no reveló daño tisular ni en las cirugías de rosa de bengala ni en las de iluminación láser.
Por otro lado, la rosa de bengala más la iluminación láser generaron una lesión bien demarcada. Es importante medir el peso corporal del animal para ajustar la inyección de rosa de bengala. La condición correcta de los conmutadores forenses es importante para inducir una lesión consistente entre los animales.
Dado que este protocolo deja el cráneo intacto e incluso se puede realizar a través de ventanas craneales, se puede combinar con imágenes in vivo de campo amplio o multi fotones.
