El objetivo general de este procedimiento es imitar la condición humana de la restenosis después de la terapia de revascularización en ratones para estudiar los mecanismos moleculares involucrados en la respuesta a la lesión. Las principales ventajas de estas técnicas son que es altamente reproducible y fácil de realizar, permitiendo al investigador con una experiencia mínima aplicar el método en modelos animales pequeños. Demostrar el procedimiento será Adelina Curaj, un postdoctorado para mi laboratorio.
Para inducir la hiperlipidemia, alimente de seis a ocho semanas de edad 18 a 20 gramos Apoe knockout ratones una dieta aterogénica una semana antes del procedimiento quirúrgico y hasta el análisis de placa aterosclerótica. El día de la cirugía, después de confirmar la falta de respuesta al pellizco del dedo del final, afeitar el ratón anestesiado en la región del cuello ventral y desinfectar la piel expuesta con Betadine. Haga una incisión cutánea de un centímetro en la región mediana del cuello sobre la tráquea y separe los dos cuerpos gordos para obtener una vista completa de la región traqueal.
Usando un retractor para mantener la capa muscular abierta, exponga la arteria carótida y use fórceps curvas afiladas para separar la arteria del nervio vago y la vena yugular hasta que el área de bifurcación de la arteria carótida interna y externa sea visible. Suavemente, coloque una sutura de seda de siete centímetros de largo 0-5 debajo de la arteria carótida proximal al arco aórtico, seguido de una sutura de seda de 1,5 centímetros de largo de 0-7 de largo alrededor de la arteria carótida externa cerca del punto de bifurcación, y una posición de sutura de seda de 1,5 centímetros de largo de 0-7 de largo como distal de la bifurcación como sea posible. Coloque otra sutura de seda abierta de 1,5 centímetros de largo 0-7 debajo de la arteria carótida interna.
A continuación, coloque el animal con la cabeza en la posición de las seis. Inmediatamente, cierre firmemente los lazos de sutura en la arteria carótida interna y la sutura distal en la arteria carótida externa. Utilice fórceps de hemostat para tirar de los extremos de la sutura 0-5 para detener el flujo sanguíneo a través de la arteria carótida común.
Usando tijeras pequeñas, haz una pequeña arteriotomía de la mitad del diámetro del vaso distal a la arteria carótida externa entre los dos bucles e inserta un cable guía flexible pulido con alcohol de 14 pulgadas humedecido con una gota de cloruro de sodio al 0,9% en la arteria carótida común a través de la incisión. Para evitar la erupción arterial durante la incisión Y, utilice un alambre guía cuidadosamente pulido. Obtener la denudación endotelial pasando el cable a lo largo del vaso mientras gira tres veces, luego cerrar firmemente el lazo proximal en la arteria carótida externa y cortar las suturas alrededor de las arterias carótidas comunes e internas para restaurar el flujo sanguíneo.
A continuación, retire los retractores y devuelva la capa muscular y los dos cuerpos de grasa a la posición fisiológica. Cierre la piel con clips metálicos, luego permita que el ratón se recupere en su lado izquierdo bajo una luz infrarroja con monitoreo hasta que esté completamente reclinado. La formación de neointima se puede evaluar utilizando la tinción Movat.
El tamaño total de la placa, que puede variar entre 70.000 y 100.000 micras al cuadrado, dependiendo de la habilidad del cirujano, se puede calcular para cada muestra utilizando el software adecuado. La placa desarrollada se asemeja a la restenosis instantánea, que consiste predominantemente en células musculares lisas proliferadas y migradas desde el medio. El contenido de células musculares lisas representa aproximadamente 30 a 40% de la placa, mientras que los macrófagos encontrados dentro de la neointima del vaso lesionado representan entre el 15 y el 25% del número total de células.
La re-endotelialización típicamente alcanza 80 a 90%después de tres semanas y debe estar casi completa después de cuatro semanas. Para realizar un seguimiento del crecimiento de la placa durante su desarrollo, el análisis se puede repetir en varios puntos de tiempo después de la lesión del alambre dependiendo de la pregunta experimental. Una vez masterada, esta técnica se puede completar en 15 minutos si se realiza correctamente.
Al intentar este procedimiento, es importante recordar que el área quirúrgica debe hidratarse constantemente para evitar el secado y facilitar la manipulación del cable.
